王文
- 作品数：41 被引量：110H指数：7
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 北京地区成人呼吸道感染患者中HCoV-HKU1感染的初步分析与基因型确定被引量：2
- 2013年
- 目的：对北京地区成人呼吸道感染患者中人冠状病毒（HCoV）HKUl的感染状况进行初步分析，了解其流行分布、临床特点，并确定流行株的基因型别。方法：2011年1月～2012年1月从北京地区成人呼吸道感染患者中收集鼻咽拭子标本559份，利用靶向棘突蛋白S与核心蛋白N的2种巢式PCR方法进行HCoV—HKUl筛查，并对阳性片段进行序列测定，以确定其基因型别；同时，对阳性标本进行常见呼吸道病毒的共感染筛查，进而分析HCoV—HKUl感染的临床表现和流行病学特点。结果：559份鼻咽拭子标本中检出HCoV—HKUl阳性9例（1．61％），其中3例合并HCoV-0C43感染；感染患者临床表现为急性呼吸道症状，以发热（88．9％）、咽痛（66．7％）、寒颤（68％）、流涕（55．6％）和咳嗽（44_4％）为主，其中1例有系统性红斑狼疮史；阳性基因片段系统进化分析发现这9例感染均为HCoV—I-IKUlB型。结论：北京地区近年成人呼吸道感染患者中HCoV—HKUl感染率较低（1．61％）。其流行株基因型为B型。
- 段希洁陆柔剑俞晓燕彭堃王文周为民张陵林王仲谭文杰
- 关键词：人冠状病毒呼吸道感染成人基因型
- 表达分泌荧光素酶的重组流感病毒构建及体外生物学特性研究
- 2023年
- 目的采用不同的流感病毒骨架构建表达分泌荧光素酶(Gaussia luciferase,Gluc)的重组流感病毒,同时研究其生长特性、遗传稳定性、Gluc表达水平、体外抗流感药物活性。方法在PR8NA的C端插入猪捷申病毒2A肽(porcine teschovirus-2A autocleavage peptide,P2A)自剪切位点及Gluc编码基因,其余7个质粒分别来源于A/Puerto Rico/8/34(PR8)(H1N1)和A/WSN/1933(WSN)(H1N1),通过流感病毒反向遗传学8质粒系统拯救重组病毒,分别命名为PR8NAGluc/PR8和PR8NAGluc/WSN。检测重组病毒遗传稳定性;对比PR8NAGluc/PR8和PR8NAGluc/WSN的荧光强度;检测重组病毒的生长动力学;同时测定PR8NAGluc/WSN荧光强度与半数组织培养感染剂量(median tissue culture infective dose,TCID_(50))的相关性及对奥司他韦、法匹拉韦和莲花清瘟的体外抗流感药物活性。结果通过反向遗传学成功拯救出以PR8和WSN为骨架表达Gluc的重组病毒。相对于PR8骨架,以WSN为骨架明显提高了Gluc的表达且遗传稳定,复制动力学比野生型稍低。PR8NAGluc/WSN荧光强度与TCID_(50)有较好的相关性,其对奥司他韦、法匹拉韦和莲花清瘟具有良好的敏感性。结论以WSN为骨架的重组病毒荧光表达强度比PR8骨架高,为高通量筛选抗流感病毒药物及研发流感病毒载体疫苗提供参考。
- 王东红邓瑶叶飞周剑芳王文黄保英王梦微孟昕谭文杰
- 关键词：反向遗传学荧光素酶重组病毒
- 基于RAA-CRISPR/Cas12a的猴痘病毒核酸检测方法的建立
- 2023年
- 目的建立一种基于RAA-CRISPR/Cas12a的特异性强、灵敏度高的猴痘病毒核酸检测方法。方法根据已知猴痘病毒基因保守区设计合成重组酶介导等温核酸扩增(recombinase-aided amplification,RAA)引物和成簇规律间隔的短回文重复序列RNA(clustered regularly interspaced short palindromic repeats RNA,CRISPR RNA,crRNA),利用荧光检测技术筛选特异crRNA,通过荧光计数读取CRISPR/Cas12a检测结果,同时对所建立方法的灵敏性和特异性进行评价。结果建立了基于RAA-CRISPR/Cas12a的猴痘病毒核酸检测方法,其灵敏度为2.5拷贝/反应,且与鼠痘病毒、痘苗病毒无交叉反应,具有高特异性。结论建立了基于RAA-CRISPR/Cas12a的猴痘病毒核酸检测方法,为高效、快速、特异性检测猴痘病毒感染提供了有力工具。
- 罗美惠赵莉吴长城陆柔剑阿茹罕黄保英邓瑶任皎王慧娟叶飞王文田厚文王文玲谭文杰
- 关键词：猴痘病毒核酸检测
- 比较可表达产生VLP颗粒的CHIKV DNA疫苗和减毒活疫苗在小鼠中的免疫效果
- 2022年
- 目的比较可表达产生病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)的CHIKV DNA疫苗与CHIKV181/clone25减毒活疫苗在小鼠中的免疫应答与保护效果。方法C57BL/6n小鼠分别用CHIKV DNA疫苗20μg以肌肉注射加电转的形式免疫2次,CHIKV181/clone25减毒活疫苗10^(5) PFU以皮下注射的形式免疫2次,阴性对照以50μLPBS皮下注射免疫2次,在每次免疫后的第14 d进行体液免疫和细胞免疫检测。在末次免疫后第4周进行CHIKV Ross攻毒实验。结果CHIKV DNA疫苗免疫后诱导的特异性细胞免疫反应和特异性抗体反应均高于CHIKV 181/clone25减毒活疫苗。在CHIKV Ross致死性攻击后,DNA疫苗与CHIKV181/clone25减毒活疫苗均可保护小鼠免于死亡。结论DNA疫苗20μg与CHIKV181/clone25减毒活疫苗105 PFU均可有效预防小鼠CHIKV感染,但DNA疫苗诱导更高水平的体液免疫反应和细胞免疫反应。
- 赵志敏黄梦婧李梦哲邓瑶王文张磊亮赵平谭文杰
- 关键词：DNA疫苗减毒活疫苗体液免疫
- 基于丙型肝炎病毒结构基因的DNA疫苗初免重组腺病毒疫苗加强免疫小鼠后可诱导交叉保护被引量：1
- 2016年
- 目的 探索基于HCV多个靶抗原的新型T细胞疫苗研发策略.方法 用表达HCV河北株（1b亚型）结构蛋白（Core,E1,E2）的DNA疫苗与重组腺病毒载体疫苗联合免疫小鼠,并采用ELISPOT与胞内细胞因子染色分析（ICS）方法分析了特异性T细胞免疫应答特点与交叉保护效果.结果 DNA疫苗与重组腺病毒疫苗联合免疫小鼠后,针对Core、E1、E2都可产生较强细胞免疫应答;ELISPOT结果表明：联合免疫针对E1的反应最强,明显高于DNA疫苗同源免疫;ICS结果显示：针对E1抗原特异的CD4＋T细胞分泌的TNF-α水平与CD8＋T细胞分泌的IFN-γ水平以及E2抗原特异的CD4＋T细胞与CD8＋T细胞分泌的IFN-γ水平均高于三针DNA疫苗免疫组.在表达2a亚型HCV（JFH1）全长ORF的重组痘苗病毒替代攻击小鼠模型中,复制型DNA疫苗与重组腺病毒联合免疫可表现出交叉保护效应.结论 本研究为HCV新型疫苗研制及免疫保护机制研究提供了一定参考.
- 邓瑶管洁殷霄蓝佳明陈红王文谭文杰
- 关键词：T细胞应答联合免疫
- 含乙型肝炎病毒S-PreS1基因的DNA疫苗与蛋白颗粒疫苗联合免疫可增强免疫应答被引量：6
- 2011年
- 为研制新型有效的HBV治疗性疫苗,构建了含PreS1与S融合基因的HBV DNA疫苗,即pVRC-HBSS1(PreS121–47 aa融合在S抗原1–223 aa的羧基端),并制备了CHO表达相同结构的蛋白颗粒亚单位疫苗HBSS1。在Balb/C小鼠中采用不同的DNA免疫方式(即肌肉注射、皮内注射加电转)初免3次,蛋白颗粒亚单位疫苗(不同佐剂)肌肉注射加强免疫1次,然后我们分析比较了各组疫苗所引起的免疫应答特点。抗体检测结果表明:皮内注射结合电转初免组产生的PreS1与S特异性抗体水平皆高于肌肉直接注射组。进一步还发现DNA疫苗与蛋白颗粒亚单位疫苗两种疫苗联合应用后S抗原特异的细胞免疫应答(IFN-γELISpot分析)明显高于DNA疫苗或蛋白颗粒亚单位单独应用,其中皮内注射+电转结合蛋白颗粒亚单位疫苗联合免疫组可产生最强的细胞免疫应答。这些研究为新型HBV治疗性疫苗的优化设计与合理应用提供了依据。
- 陈红邓瑶谭文杰王文管洁文波殷霄阮力
- 关键词：DNA疫苗联合免疫
- CpG对乙型肝炎基因重组(CHO细胞)疫苗免疫效果的影响被引量：11
- 2002年
- 为了研究CpG -寡脱氧核苷酸 (CpG -OPN)作为佐剂对乙型肝炎基因重组 (CHO细胞 )疫苗 (简称乙肝疫苗 )免疫效果的影响 ,以乙肝疫苗加Al(OH) 3 、疫苗加CpG和疫苗加Al(OH) 3 与CpG3三种配伍方式 ,通过腹腔、皮下或肌内 3种不同途径免疫Balb/c小鼠 ,观察不同免疫途径和不同配伍的免疫效果。同时又将疫苗与CpG混合后在4℃存放 6个月再免疫小鼠 ,观察CpG的稳定性。结果表明 :① 3种免疫途径中以肌内注射效果最好 ,这在使用CpG的实验组尤为明显 ,在该组肌内免疫的ED50 比腹腔的低了 10倍 ,而诱发的抗体滴度提高了 3倍 ;②疫苗与CpG、Al(OH) 3 联合使用的免疫效果最好 ,在肌内免疫时联合使用的免疫效果比疫苗 +Al(OH) 3 提高 4倍 ,比疫苗+CpG提高 7倍 ;③疫苗 +Al(OH) 3 免疫时 ,表现为IgG1抗体亚型占优势 ,而再加入CpG后则IgG1和IgG2a均升高 ,以IgG2a最显著 ;④疫苗与CpG混合后 4℃保存半年 。
- 王四清田淑芳许洪林郭斐王文陈红王秀平王世峰阮力
- 关键词：CPG乙型肝炎基因重组CHO细胞疫苗免疫效果
- 基于慢病毒转导质粒的HBV小鼠模型
- 本发明涉及一种基于慢病毒转导质粒建立的HBV小鼠模型，旨在提供一种建立小鼠HBV持续性感染模型的方法。所属领域为生物技术。其技术特征在于将携带多拷贝HBV DNA的重组质粒pCS-HBV1.3经尾静脉高压水动力注射到小鼠...
- 谭文杰揣侠王文陈红杨扬
- 文献传递
- 携带乙型肝炎病毒感染性克隆的四种转基因载体在体内外抗原表达分析
- 2012年
- 目的构建四种不同结构的1．3倍全基因乙型肝炎病毒（HBV）转基因载体，观察HBV抗原在体内外表达水平的差异。方法克隆1．3倍的HBV基因至慢病毒转基因质粒pCS—CG并取代其中的EGFP表达盒，构建四种结构的pCS—HBVl．3质粒，体外转染Huh7细胞和尾静脉高压水动力法注射C57 BL／6小鼠后，ELISA方法分别检测细胞上清和小鼠血清中HBsAg和HBeAg的表达。结果成功构建了四种不同结构的pCS—HBV1．3质粒，四种质粒HBVS抗原与e抗原在体内外的表达趋势一致，即乙肝抗原表达水平在正向插入的转基因质粒中高于反向插入；HBV抗原表达水平还与载体序列中RRE调控元件和cPPT调控元件前的基因序列长度有关。结论筛选获得了可在体内外高效表达HBV抗原的转基因载体可应用于乙肝病毒体内外感染模型的建立与应用。
- 揣侠陈红杨扬王文文波王刚黄保英邓瑶谭文杰
- 关键词：基因组
- 新型冠状病毒抗体检测结果的标准化和平行比较
- 2022年
- 目的通过世界卫生组织(world health organization,WHO)新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)抗体国际标准品(international standard,IS)(G样本)、抗体参考盘(样本E、F、H、I、J)的应用降低SARS-CoV-2抗体检测结果差异、提高检测结果一致性。方法利用基于SARS-CoV-2活病毒的微量中和试验、假病毒中和试验以及商品化的ELISA试剂盒对WHO的SARS-CoV-2抗体IS和参考盘等共10个样本(A~J)分别进行检测,对检测结果进行分析比较。结果以IS为参考品确定其他样本的相对浓度,降低了检测结果之间的差异。假病毒中和试验、ELISA检测血清抗体参考盘结果与基于SARS-CoV-2 HB02株的中和试验基本一致,个别试剂可检测弱阳性样本。结论SARS-CoV-2抗体IS的使用促进了血清学检测方法的标准化,抗体参考盘适用于基于SARS-CoV-2原型株的所有检测方法,假病毒中和试验、ELISA等在一定程度上可作为活病毒中和试验的替代方法。
- 王文玲王慧娟黄保英邓瑶赵莉叶飞王文任皎谭文杰
- 关键词：新型冠状病毒中和抗体酶联免疫吸附试验
