田可港
- 作品数：14 被引量：46H指数：4
- 供职机构：温州医科大学更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金温州市科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重叠延伸PCR法构建β地中海贫血基因突变质粒标准品被引量：3
- 2012年
- 目的:构建含β地中海贫血(简称β地贫)-28(A>G)与IVS-2-654(C>T)突变基因的质粒标准品。方法:以含β珠蛋白野生型基因的质粒DNA为模板,采用重叠延伸PCR(Overlap extension PCR,OE-PCR)定点诱变后行TA克隆的方法分别构建含-28(A>G)与IVS-2-654(C>T)突变基因的质粒。结果:DNA测序表明:重组质粒1的确含β地贫-28(A>G)突变基因,β珠蛋白-28处的碱基已由A突变成G,其余序列与野生型完全相同;重组质粒2的确含IVS-2-654(C>T)突变基因,β珠蛋白IVS-2-654处的碱基已由C突变成T,其余序列与野生型完全相。成功实现了定点诱变。结论:分别成功地构建了含β地贫-28(A>G)与IVS-2-654(C>T)突变基因的质粒标准品,进一步为HRM技术检测β地贫基因突变方法的建立及该病其它基因诊断与筛查技术的研究奠定了实验基础。
- 余玲玲冯晶晶田可港王慧燕郑晓群
- 关键词：Β地中海贫血基因突变重叠延伸PCR定点诱变
- IgG抗体亲和力指数在儿童巨细胞病毒感染诊断中的意义被引量：6
- 2011年
- 目的探讨IgG抗体亲和力指数(AI)在儿童巨细胞病毒(HCMV)感染诊断中的意义。方法分别收集120例临床疑似HCMV感染患儿的尿液和外周血标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和微粒子酶免化学发光法检测尿液HCMV DNA载量和血清HCMV IgM/IgG抗体;采用尿素变性结合酶联免疫吸附试验(ELISA)测定HCMV IgG抗体亲和力指数(AI)。结果 120例疑似HCMV感染患儿的尿液HCMV DNA、血清HCMV IgM和HCMV IgG阳性检出率分别为70.83%(85/120)、60.83%(73/120)和76.67%(92/120),差异有统计学意义(χ2=7.252,P=0.027);25例HCMV IgM-/IgG+患儿中,以高亲和力抗体检出为主,占92%(23/25);67例HCMV IgM+/IgG+患儿中,以低、中等亲和力抗体为主,分别占26.87%(18/67)和53.73%(36/67);高、中、低IgG抗体AI患儿尿液HCMV DNA阳性检出率分别为36.11%(13/36)、86.84%(33/38)和100%(18/18),差异有统计学意义(χ2=32.262,P<0.01)。结论 IgG抗体亲和力指数测定能准确地反映HCMV感染的活动状况,有助于HCMV感染的诊断与治疗。
- 郑晓群余坚田可港张琪
- 关键词：人巨细胞病毒抗体
- 高分辨熔解曲线技术检测HLA-G14bp插入/缺失突变方法的建立及初步应用被引量：1
- 2014年
- 目的建立高分辨率熔解(HRM)技术检测人类白细胞抗原G(HLA-G)14 bp插入/缺失突变的方法,并初步探讨其临床应用价值。方法对HRM进行方法学评价。对100例EV71感染重症手足口病(HFMD)患儿、80例EBV感染传染性单核细胞增多症(IM)患儿和100例对照组进行HLA-G 14 bp插入/缺失突变的检测;用聚合酶链反应结合聚丙烯酰胺凝胶电泳(PCR-PAGE)法和产物测序法验证HRM分型。结果不同基因型HRM检测的批内、批间熔解温度(Tm)值的变异系数(CV)均<0.1%;HRM与PAGE及直接测序所得基因型相符。100份EV71感染HFMD患儿DNA样本经检测,10份为14 bp+/+纯合子基因型,42份为14 bp+/-杂合子基因型,48份为14 bp-/-纯合子基因型,与对照组比较差别有统计学意义(χ2=6.181,P<0.05),80份EBV感染IM患儿DNA样本与对照组比较差别亦有统计学意义(χ2=8.531,P<0.05)。结论本研究建立的HRM技术可用于HLA-G 14 bp插入/缺失基因突变的检测。
- 陈晓晴余玲玲王慧燕田可港郑晓群
- 关键词：人类白细胞抗原G基因突变EV71病毒
- HRM技术检测β-地中海贫血IVS-2-654（C〉T）与．28（A〉G）突变方法的建立及初步应用被引量：4
- 2012年
- 目的建立基于高分辨率熔解曲线（HRM）技术快速筛查β-地中海贫血（简称β-地贫）基因突变的方法，并初步探讨其临床应用价值。方法选取温州地区人群β-地贫常见基因突变位点IVS-2-654（C〉T）与-28（A〉G）作为研究位点，采用TA克隆技术构建其质粒DNA作为模板或基因分型对照，建立基于HRM技术检测β-地贫基因突变的方法，并对该方法的特异性、重复性、灵敏度等指标进行方法学评价。收集2009年11月至2010年10月温州医学院附属第二医院、育英儿童医院临床疑似p-地贫患者117例，抽取外周血标本，提取外周血白细胞DNA，用该方法进行IVS．2-654（C〉T）与-28（A〉G）位点的HRM检测，并将检测结果与双向直接测序做比较。结果建立的HRM技术可对β-地贫IVS-2-654（C〉T）与-28（A〉G）突变位点进行检测，未见非特异性扩增片段；不同基因型HRM检测的批内、批间熔解温度（Tm）值的变异系数（cv）均〈0．1％；该法最低可检出10^3拷贝的DNA模板，并可检测低至10％的突变存在。117份临床疑似β-地贫患者样本经该法检测，45份为IVS·2-654（C〉T）杂合突变型，9份为一28（A〉G）杂合突变型，未发现2个位点的纯合突变型基因；此结果与直接测序所得基因型结果完全一致。结论建立的HRM技术操作简便，特异性强，灵敏度高，可用于β-地贫基因突变筛查，并为β-地贫其他突变位点的检测及基因组单核苷酸多态性分型等提供了一个通用的技术平台。
- 余玲玲田可港冯晶晶王慧燕郑美琴郑晓群吕建新
- 关键词：Β-地中海贫血突变高分辨率熔解曲线
- 浙江省温州地区住院患儿人巨细胞病毒感染状况分析被引量：2
- 2012年
- 目的分析温州地区住院患儿人巨细胞病毒(HCMV)感染状况及血清标志物的分布特点。方法收集2010年3月至2011年2月期间5 215例温州地区住院患儿,按年龄将患儿分为<28d、28～d、6～月龄、1～岁、3～岁、7～14岁6个组,采用化学发光法(chemiluminescence immunoassay,CLIA)定量检测血清HCMV IgM/IgG抗体浓度,并对各年龄段HCMV IgM/IgG的阳性检出率及抗体水平进行分析。结果 5 215例住院患儿HCMV IgM阳性检出率为14.38%(750/5 215),HCMV IgG阳性检出率为82.45%(4 300/5 215),HCMV IgM和HCMV IgG同时为阳性12.98%(677/5 215);HCMV IgM阳性检出率以<28d组最低(1.06%,P<0.01),28～d组最高(21.48%,P<0.01);HCMV IgG阳性检出率以<28d和7～14岁两组高(分别为98.77%和86.54%,P均<0.01);HCMV IgM阳性浓度在6个组间分布差异无统计学意义(P=0.52),但随着年龄的增长有降低趋势(P=0.02);HCMV IgG阳性浓度以28～d组最低(P<0.05),且随着年龄的增长有升高趋势(P<0.01)。750例HCMV IgM阳性的患儿中,以呼吸道感染最多占34.80%(261/750),其中肺炎占16.93%(127/750)。结论温州地区住院患儿HCMV感染率高,以呼吸道感染为主,不同年龄组间患儿HCMV感染率及抗体浓度不同。
- 浮苗田可港高艳郑晓群
- 关键词：化学发光法儿童
- 人巨细胞病毒潜伏感染相关基因研究进展被引量：4
- 2014年
- 人巨细胞病毒(HCMV)在人群中感染非常普遍,在免疫功能正常的个体,HCMV初次感染大多数能够被宿主的免疫系统有效清除,少部分通过建立长期的潜伏感染生存下来。HCMV基因组庞大,表达许多病毒基因产物,其中一部分可能促进病毒潜伏在宿主细胞中。目前对于HCMV在宿主体内潜伏感染的机制及相关基因的表达知之甚少,本文将对近年来有关HCMV潜伏感染时相关病毒基因的表达及功能研究作一综述。
- 浮苗田可港郑晓群
- 关键词：人巨细胞病毒病毒基因
- 重组hcmvIL-10的表达纯化及免疫抑制活性研究被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨重组人巨细胞病毒白细胞介素10(hcmvIL-10)对单核细胞的免疫抑制活性及分化相关基因表达的影响。方法:将重组的原核表达质粒pMal-c2X-hcmvIL-10和pMal-c2X-hIL-10转化受体菌E.coli BL21(DE3)进行诱导表达,采用Amylose-resin亲和层析纯化重组蛋白,并用葡聚糖凝胶(Sephadex G-75)进行二次纯化。纯化的重组蛋白hcmvIL-10和人白细胞介素10(hIL-10)分别与THP-1细胞作用后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养细胞上清液TNF-α水平;实时荧光定量PCR与流式细胞术分别检测THP-1细胞HLA-DR mRNA及HLA-DR分子的表达;采用功能分类Th1-Th2-Th3 PCRARRAY检测分化相关基因表达谱。结果:重组蛋白hcmvIL-10和hIL-10经SDS-PAGE及Western blot鉴定与目的相符;不同浓度(2、10和50 ng/ml)重组hcmvIL-10和hIL-10分别与经PHA诱导的THP-1细胞作用48小时后,培养上清液中TNF-α的浓度分别为:(3.8±0.96)pg/ml、(1.95±0.51)pg/ml、(1.6±0.45)pg/ml和(2.49±0.43)pg/ml、(1.77±0.38)pg/ml、(0.98±0.16)pg/ml,除2 ng/ml重组hcmvIL-10处理组外,其它处理组与对照组比较均明显降低(P<0.01);不同浓度重组hcmvIL-10和hIL-10分别与THP-1细胞作用48小时后,HLA-DR mRNA相对表达量分别为:0.86±0.025、0.76±0.023、0.75±0.017和0.73±0.017、0.61±0.017、0.55±0.015,HLA-DR分子的表达分别为:(11.5±0.44)%、(10.1±0.30)%、(9.1±0.38)%和(10.9±0.10)%、(9.7±0.50)%、(7.5±0.32)%,除2 ng/ml重组hcmvIL-10处理组外,其它处理组与对照组比较均明显降低(P<0.01);功能分类Th1-Th2-Th3 PCR ARRAY共检测84个分化相关基因,hcmvIL-10处理组共有8个基因差异表达,上调基因为IL-12RB2、NFATC2、SOCS2、TYK2、GFI1和CEBPB,下调基因为CD80和CTLA4;hIL-10处理组共有5个基因差异表达,上调基因为SOCS2,下调基因为CD80、CD28、CTLA4和IL-6。结论:重组蛋白hcmvIL-10可抑制THP-1细胞分泌TNF-α,下调THP-1细胞HLA-DR分子的表达,类似hIL-10的免疫抑制功能;重组蛋白hcmvIL-10可影响THP-1
- 曾智高艳冯晶晶田可港浮苗彭颖郑晓群
- 关键词：人巨细胞病毒白细胞介素10免疫抑制
- 定点诱变法构建β地中海贫血IVS-2-654(C>T)突变基因质粒被引量：1
- 2012年
- 目的构建含β地中海贫血(简称β地贫)IVS-2-654(C>T)突变基因的质粒。方法以含β珠蛋白野生型基因的质粒DNA为模板,采用重叠延伸PCR(OE-PCR)定点诱变后行TA克隆的方法构建含IVS-2-654(C>T)突变基因的质粒。结果双向测序结果表明:重组质粒的确含β地贫IVS-2-654(C>T)突变基因,β珠蛋白IVS-2-654处的碱基已由C突变成T,其余序列与野生型完全相同,成功实现了定点诱变。结论成功地构建了含β地贫IVS-2-654(C>T)突变基因的质粒,进一步为该病基因诊断与筛查技术的研究奠定了实验基础;OE-PCR定点诱变法简便、经济,值得推广应用。
- 余玲玲田可港冯晶晶王慧燕郑晓群
- 关键词：Β地中海贫血基因突变重叠延伸PCR定点诱变
- 转录因子GATA-1与人巨细胞病毒UL111A基因5＇上游序列结合的实验研究被引量：4
- 2012年
- 目的:利用人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)潜伏及再激活感染THP-1细胞模型,研究细胞核内转录因子GATA-1与HCMV UL111A基因5'上游DNA序列的相互作用。方法:采用免疫印迹(Western blotting)技术定量分析HCMV潜伏及再激活感染时细胞核内转录因子GATA-1的表达;通过MATCH工具软件分析UL111A基因5'上游DNA序列,发现存在着11个GATA-1的结合位点,针对这11个GATA-1结合位点DNA序列设计9对引物,采用染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)及实时荧光定量PCR技术分析转录因子GATA-1与UL111A基因5'上游DNA序列的结合情况。结果:HCMV潜伏感染时UL111A基因未表达cmvIL-10,激活感染时表达cmvIL-10,潜伏感染时转录因子GATA-1的相对表达量高于激活感染;以GATA-1抗体特异性结合的DNA片段为模板,9对引物中共有5对扩增出目的条带;HCMV潜伏感染组和激活感染组5个位点转录因子GATA-1结合率分别为:-4.00±0.26、-4.50±0.33、-4.41±0.21、-3.61±0.20、-3.47±0.11和-1.13±0.07、-0.63±0.05、-1.10±0.07、-0.24±0.03和-0.14±0.01,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:HCMV感染时转录因子GATA-1可能通过与UL111A基因5’上游序列1119(-3760)位点、107(-4772)位点、609(-4270)位点、849(-4030)位点和2047(-2832)位点结合,调节UL111A基因的转录,参与HCMV潜伏与再激活感染的过程。
- 田可港浮苗高艳彭颖李祥郑晓群徐志伟宋建华吕建新
- HLA-G14bp基因多态性与儿童EB病毒感染的相关性分析
- 目的通过检测EB病毒(EBV)感染传染性单核细胞增多症(IM)患儿人类白细胞抗原G(HLA-G)14bp插入/缺失多态性及血浆可溶性HLA-G(sHLA-G)水平,探讨其与儿童EBV感染IM的相关性。方法采用PCR结合聚...
- 王慧燕田可港浮苗陈益平郑晓群何时军
- 关键词：人类白细胞抗原G基因多态性EB病毒传染性单核细胞增多症
- 文献传递
