郝永华
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗登革病毒NS1单抗的制备及其在登革病毒诊断中的应用
- 登革病毒属黄病毒科（Flaviviridae）黄病毒属（Flavivirus），共有4个血清型，即登革1、2、3、4型病毒。病毒基因组为具有感染性的单股正链RNA，共编码3种结构蛋白和7种非结构蛋白。其中NSl（Nons...
- 郝永华
- 关键词：登革病毒NS1蛋白抗原表位
- 文献传递
- 抗登革病毒NS1单抗的制备及检测NS1方法的建立被引量：2
- 2006年
- 制备抗登革病毒NS1蛋白单克隆抗体，建立检测NS1的ELISA方法。表达1～4型登革病毒NS1蛋白，将1型NS1蛋白纯化后免疫BALB／c小鼠，通过杂交瘤技术制备单克隆抗体。经ELISA、Western blotting、间接免疫荧光筛选和鉴定单克隆抗体，进行纯化和HRP标记。通过鉴定每两株单抗之间是否存在竞争作用，选择非竞争单抗组合并建立NS1捕获法ELISA。结果获得7株高滴度抗NS1单抗，捕获法ELISA可以检出10ng／mLNS1。原核表达登革病毒NS1蛋白制备的单抗可以和天然病毒抗原反应，NS1捕获法ELISA可以用于登革病毒感染检测。
- 郝永华王芹关武祥修梅红戴晓霞郑峰李伟红刘峰刘琴芝李川张全福梁米芳李德新
- 关键词：登革病毒NS1蛋白单克隆抗体
- SARS-CoV核蛋白和宿主细胞相互作用的初步研究被引量：1
- 2006年
- 寻找与SARS-CoV核蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,从而探索SARS-CoV的致病机理。可溶性表达SARS-CoV核蛋白,利用His标签和离子交换层析对表达的蛋白进行了纯化,获得较纯的可溶性核蛋白。再将SPR/BIA技术与MALDI-TOF MS技术结合起来,使用SPR生物传感芯片作为亲和吸附的表面,分别捕获2BS细胞和A549细胞裂解液中与SARS-CoV核蛋白相互作用的细胞蛋白,收集足够量的相互作用蛋白,再利用MALDI-TOF-MS分析获得蛋白的性质。结果鉴定出与SARS-CoV核蛋白相互作用的蛋白:26S蛋白酶调节亚单位S10B(蛋白酶体亚单位p42)(蛋白酶体26S亚单位ATPase 6)(P62333),属于泛素/蛋白酶体系统;目前国内外尚未见类似报道。此研究初步发现了一种与SARS-CoV核蛋白在细胞外相互作用的蛋白,但这种相互作用在SARS-CoV感染及SARS的发生发展中发挥的作用还有待于深入研究和探索。
- 王芹郝永华关武祥于建石张全福李川刘琴芝曹守春修梅红刘峰代晓霞梁米芳李德新
- 关键词：SARS-COV核蛋白MALDI-TOF-MS
- 汉坦病毒Q32株L和M片段全基因序列分析被引量：1
- 2006年
- 目的测定汉坦病毒Q32株L、M片段的全长序列,了解其分子基础。方法设计特异的PCR引物,用RT-PCR技术分段扩增Q32株全长L、M片段,PCR产物纯化后直接测序,或用T-A克隆方法进行PCR产物克隆,然后进行遗传进化分析。结果Q32株L片段的全基因序列共6533个核苷酸,GC含量为37·38%,AT含量为62·62%,包含一个单一的开放读码框架(ORF),该读码框架从38到6493,由6456个核苷酸组成,编码2151个氨基酸,可以合成相对分子质量为2·46×105的蛋白。M片段全基因序列共3616个核苷酸,GC含量为39·44%,AT含量为60·56%,包含一个单一的开放读码框架(ORF),其读码框架从41到3448,由3408个核苷酸组成,编码1135个氨基酸,可以合成相对分子质量为1·26×105的蛋白。Q32编码的RNA聚合酶也有6个比较保守的区域。结论汉坦病毒Q32株M和L片段具有和其他汉坦病毒糖蛋白和RNA聚合酶相似的核苷酸一级结构,核苷酸序列虽有差异,但在氨基酸水平上的同源性仍很高。
- 代晓霞张全福王世文楚雍列郝永华王芹修梅红张颖李德新
- 关键词：汉坦病毒核苷酸序列分析
