黄倩
- 作品数：147 被引量：507H指数：11
- 供职机构：上海交通大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划上海市卫生局“百人计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术电子电信更多>>
- 反义RNA抑制人视网膜色素上皮细胞VEGF分泌的研究被引量：2
- 2003年
- 目的 探索应用血管内皮生长因子 (VEGF12 1)的反义RNA抑制人视网膜色素上皮细胞 (RPE)VEGF表达的可行性。方法 构建编码反义hVEGF12 1真核表达质粒 ,转入人RPE细胞。将稳定表达外源基因的细胞分别置于大气氧环境 ( 2 1%O2 )或缺氧环境 ( 1%O2 )中培养 ,以空白细胞为对照 ,18h后收集上清液 ,ELISA测定其中VEGF的浓度 ,将此上清液加入人脐静脉血管内皮细胞 (HUVEC) ,观察其对细胞生长的影响。结果 反义VEGF转染能使RPE细胞VEGF的分泌量降低 62 7%。缺氧条件下 ,RPE细胞大量分泌VEGF ,18h时细胞培养上清液能刺激HUVEC细胞增殖 18 4% (P <0 0 1)。同样状态下 ,转染反义VEGF的RPE细胞培养上清液则无明显促内皮细胞生长作用 (P >0 0 1)。结论 本实验构建的反义VEGF12 1质粒能通过下调RPE细胞VEGF的蛋白分泌水平 。
- 樊莹许迅王丰张皙黄倩
- 关键词：色素上皮内皮基因转移
- 使用热休克蛋白基因启动子调控靶基因在肿瘤局部表达被引量：8
- 2001年
- 目的 利用人热休克蛋白基因启动子结合加热选择性诱导目的基因在肿瘤局部表达 ,建立肿瘤基因治疗新方法。方法 分离不同大小的人热休克蛋白 70基因 5’端调控顺序作为启动子 ,以绿色荧光蛋白 (GFP)作报告基因 ,构建热诱导型GFP表达质粒。转染体外培养的肿瘤细胞 ,或将稳定转导GFP表达质粒的肿瘤细胞移植到大鼠皮窗内 ,或将热诱导型GFP腺病毒注射到肿瘤内 ,加热后直接利用荧光显微镜观察GFP表达水平。结果 40 0bp人热休克蛋白 70基因 5’端调控顺序背景表达水平低 ,加热后可被显著激活 ,能作为启动子有效驱动下游目的基因的表达。GFP作报告基因使体内外肿瘤细胞内目的基因的表达水平仅通过荧光显微镜便能直接观察到。结论 利用热诱导型启动子结合加热能选择性诱导目的基因在肿瘤局部表达 ,为肿瘤基因治疗提供了一种新方法。
- 黄倩李川源
- 关键词：肿瘤基因表达基因治疗热休克蛋白靶基因基因启动子
- 胚胎与成人视网膜神经细胞培养被引量：4
- 2002年
- 目的 建立胚胎及成人视网膜神经细胞体外培养系统 ,为视网膜神经细胞的基础研究与药物开发提供实验模型。 方法 10～ 13周龄胎儿及 2 0～ 40岁成人视网膜神经层用不同的酶进行消化 ,分散的细胞接种于预先经过包被的细胞培养盘内 ,加入或不加入表皮生长因子 (epidermal growth factor,EGF)、成纤维细胞生长因子 (fibroblast growth factor,FGF)、脑源性神经营养因子 (brainderived neu-rotrophic factor,BDNF)、神经营养素 - 4(neurotrophic- 4,NT- 4)等培养。通过 Brd U掺入、免疫组织化学及免疫荧光等方法检测培养细胞增殖并辨别细胞成分。 结果 胚胎及成人视网膜细胞可在体外连续培养10 0及 180 d以上。加入 EGF、FGF、BDNF或 NT- 4可明显促进胚胎与成人视网膜神经元存活 ,胎儿视网膜细胞增殖。与对照组相比 ,处理组神经元或神经节细胞的百分率较高。 结论 胚胎及成人视网膜神经细胞培养技术为视网膜神经细胞基础研究及药物开发提供了一种十分有价值的手段 ,加入外源性的生长因子可促进培养的视网膜神经细胞存活、增殖与分化。
- 刘文文徐萍黄倩
- 关键词：视网膜细胞培养神经营养因子胚胎
- 选择性复制型腺病毒介导的自杀基因HSV-tk在肿瘤基因治疗中的应用被引量：2
- 2006年
- 自杀基因治疗是肿瘤基因治疗的手段之一,治疗效果与自杀基因能否被高效、选择性的导入肿瘤细胞有关。肿瘤选择性复制型腺病毒(Conditionally replication adenovirus,CRAds)可以特异性的在肿瘤细胞中复制,在复制的同时所携带的治疗基因也大量表达。由CRAds介导的自杀基因,实现了对肿瘤的病毒治疗和基因治疗的结合,提高了治疗效率和使用复制型腺病毒的安全性。
- 张巨峰黄倩
- 关键词：自杀基因肿瘤基因治疗
- 视网膜母细胞瘤易感基因（Rb基因）抑制人肝癌细胞的生长被引量：5
- 1994年
- 利用流式细胞学检查及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ、Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交技术对中国人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１进行分析，发现该细胞ＤＮＡ指数为０．８ｌ，为亚倍体细胞。该细胞Ｒｂ基因的５′端存在内部缺失，Ｒｂ基因失活，没有Ｒｂ蛋白产生。将正常人ＲｂｃＤＮＡ正向插入逆转录病毒载体ＤＯＬ，得到重组逆转录病毒载体ＤＯＬＲＢ。用电穿孔转染技术把ＤＯＬＲＢ转入ＳＭＭＣ７７２１细胞，发现Ｒｂ基因导致约７５％的肝癌细胞死亡，另外２５％的肝癌细胞则因外源性Ｒｂ基因突变失活而继续存活。
- 陈大年李岱宗刘超亭姚明李洪年蒋惠秋李安仁黄倩顾健人罗成仁
- 关键词：视网膜母细胞瘤RB基因肝癌细胞
- 表达分泌型脑源性神经营养因子的腺相关病毒载体的构建及其表达的检测被引量：3
- 2008年
- 采用PCR和体外连接的方法构建了带有信号肽的脑源性神经营养因子(BDNF)的融合基因,将此基因插入到腺相关病毒载体穿梭质粒pSNAV,然后用重组质粒pSNAV-Ig-BDNF转染包装细胞,筛选出永久细胞株后,用携带腺相关病毒rep及cap基因的单纯疱疹病毒超感染包装细胞,成功包装出含有目的基因的一型血清型腺相关病毒。经PCR鉴定该病毒含有目的基因片段,被该病毒感染的细胞裂解液经Western blotting证实有BDNF表达,其培养液经ELISA检测证实含有高水平的BDNF蛋白。该病毒与小量的非复制型腺病毒Ad-null联合应用时,其BDNF蛋白的表达水平显著提高。可弥补腺相关病毒起效慢、对细胞转导效率低的弱点,为今后应用AAV作基因治疗提供了实验证据。
- 李惠明裘玮王丰韦芳陈霞芳吴小兵黄倩
- 关键词：腺相关病毒脑源性神经营养因子基因表达基因治疗
- 靶向重组腺病毒载体研究进展及其在肿瘤基因治疗中的应用被引量：4
- 2006年
- 腺病毒载体已经广泛应用于肿瘤的基因治疗临床试验,然而某些组织和细胞表面缺乏或低表达其相应的受体,使得腺病毒不能有效感染并发挥作用。研究新型重组腺病毒载体使之特异性感染靶器官,降低对正常组织的损伤,已成为肿瘤基因治疗研究的热点。靶向基因治疗可通过靶向性导入和靶向性基因表达调控等策略来达到。本文介绍了重组腺病毒载体系统靶向改造及在肿瘤基因治疗应用方面的最新研究进展。
- 任鹏康黄倩
- 关键词：腺病毒靶向基因治疗肿瘤
- 基因表达谱分析小鼠膀胱癌VEGF信号转导通路的作用被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在肿瘤新生血管形成过程中的作用,与肿瘤生长、转移的关系及其作用机制。方法:通过转染反义VEGF表达质粒,建立遗传背景相同但产生VEGF能力明显不同的肿瘤细胞株,观察VEGF对细胞生长速率、体内成瘤及肿瘤生长和转移能力的影响。分别将来自高与低水平表达VEGF的肿瘤细胞和肿瘤组织的cDNA与含有16 361个人cDNA芯片杂交,分析差异表达基因及基因表达谱变化,并通过实时荧光定量PCR进行验证。结果:反义VEGF表达质粒可选择性抑制肿瘤细胞产生VEGF,VEGF产生减少并不影响肿瘤细胞在体外的生长速率和生长方式,但在小鼠体内生长明显变慢,转移减少。基因芯片杂交结果显示高与低水平表达VEGF的肿瘤细胞和肿瘤组织中存在82个共同的差异表达在2倍以上的基因。进一步从中选择出23个杂交信号强度较高(信号强度大于或等于40)的基因,根据cDNA芯片上的探针顺序,比对小鼠cDNA及EST数据库,在其中杂交信号强度较高(信号强度大于或等于40)的23个基因中,找到了17个同源基因,其中9个为功能已知基因。由于这些基因并非已知的新生血管形成有关的基因,提示可能有更多的新基因参与肿瘤新生血管形成。结论:VEGF通过调控肿瘤新生血管形成影响肿瘤的生长和转移,而VEGF的作用需要多个基因或信号通路构成的复杂网络来完成。
- 王丰田毓华陈霞芳黄倩
- 关键词：基因表达谱
- 病毒与非病毒介导的绿色荧光蛋白基因转导的比较研究被引量：5
- 2000年
- 黄倩李川源
- 关键词：绿色荧光蛋白基因CDNA基因转导重组质粒
- CD真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达
- 2006年
- 目的：构建含自杀基因胞嘧啶脱氨酶(CD)的真核表达载体pcDNA3．1／HA-myc-His(-)Z-CD,并进行哺乳动物细胞HEK293转染研究。方法：以本实验室保存的含CD基因全长的质粒为模版,用PCR方法扩增CD基因阅读框序列,并定向克隆到带有HAtag的pcDNA3．1／HA-myc-His(-)Z载体上,使目的基因与HAtag在同一阅读框。重组体质粒经EcoRI和BamHI双酶切鉴定,并对插入的CD基因片段进行测序,将鉴定好的阳性重组质粒pcDNA3．1／HA-myc-His(-)Z-CD用脂质体介导转染HEK293,提取细胞蛋白,western blot检测CD基因的表达情况。结果：阳性重组质粒pcDNA3．1／HA-myc-His(-)Z CD经EcoRI和BamHI双酶切后,获得约为5．5kb片段和1．3kb插入片段,序列分析表明插入的片段与GenBank发布的序列一致,western blot检测到CD基因的表达。结论：成功构建了含自杀基因CD的真核表达质粒。
- 张巨峰韦芳李惠明黄陈于慧裘玮黄倩
- 关键词：自杀基因CD基因基因表达
