严芳
- 作品数：7 被引量：16H指数：3
- 供职机构：吉首大学生物资源与环境科学学院更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 禽多杀性巴氏杆菌P1059成熟黏附蛋白的原核表达、纯化和抗原性检测被引量：3
- 2008年
- 目的:建立rCPM36在大肠杆菌中的表达体系,纯化表达产物并检测其抗原性。方法:运用PCR方法从禽多杀性巴氏杆菌国际标准株P1059基因组中扩增出编码36kDa成熟黏附蛋白的cpm36基因,构建原核表达载体pQE30-cpm36,转化到大肠杆菌M15中并诱导表达目的蛋白,用镍离子螯合层析柱纯化目的蛋白及制备其抗体,Western blot分析其抗原性。结果:SDS-PAGE结果显示目标蛋白以可溶性形式表达在大肠杆菌M15细胞质中,其相对分子质量为37kDa,Westernblot结果表明表达蛋白具有良好的抗原性。结论:成功构建出原核表达载体并实现了目的蛋白表达,用镍离子螯合层析柱纯化得到具有抗原性的蛋白,为进一步开展禽多杀性巴氏杆菌黏附因子和保护性抗原的研究奠定基础。
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- 关键词：禽多杀性巴氏杆菌原核表达抗原性
- 体内外培养禽巴氏杆菌C48-3株36kDa黏附蛋白免疫原性的比较
- 为了比较体内外培养禽多杀性巴氏杆菌36kDa黏附蛋白的免疫原性,分别以普通TB培养基和鸡胚尿囊液培养禽多杀性巴氏杆菌C48-3株,提取荚膜蛋白并制备抗血清。用SDS-PAGE电泳比较两种培养条件下荚膜蛋白的表达情况,并用...
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- 文献传递
- 禽多杀性巴氏杆菌粘附蛋白Cp39的交叉免疫保护作用被引量：10
- 2010年
- 【目的】比较体内外增殖禽多杀性巴氏杆菌荚膜蛋白、天然粘附蛋白Cp39和重组粘附蛋白rCp39对小鼠的交叉保护作用。【方法】用NaCl提取法制备鸡胚尿囊液和DSA培养基增殖的C48-3株荚膜蛋白,并用电洗脱方法纯化Cp39蛋白,将rCp39蛋白以可溶形式表达在大肠杆菌BL21后,用Amylose Resin亲和层析柱纯化。分别以100μg剂量的鸡胚尿囊液增殖菌体荚膜蛋白、DSA培养基培养菌体荚膜蛋白、纯化的Cp39蛋白和rCp39蛋白通过皮下注射各试验组小鼠,生理盐水为对照组,第二次免疫后2周分别以A:1型菌C48-3株(6.7×102cfu)和A:3型菌C51-3株(1.1×103cfu)进行攻毒试验。采集免疫后小鼠血清,用ELISA法检测抗体水平,并计算免疫保护率,来评价4种抗原对小鼠的交叉保护效果。【结果】SDS-PAGE结果显示,体内外增殖禽多杀性巴氏杆菌荚膜蛋白的条带和分子量相似,且体内外表达的Cp39蛋白的分子量相同;ELISA结果表明Cp39免疫组小鼠和rCp39免疫组小鼠血清rCp39蛋白特异性抗体的水平显著高于其他两组(P<0.05);保护试验表明,体外增殖菌体荚膜蛋白免疫组小鼠对同源C48-3株和异源C51-3株攻毒的保护率分别为100%和60%,鸡胚尿囊液增殖菌体荚膜蛋白免疫组小鼠、Cp39免疫组小鼠和rCp39免疫组小鼠对同源C48-3株和异源C51-3株攻毒的保护率分别为100%和80%。【结论】粘附蛋白Cp39是禽多杀性巴氏杆菌荚膜蛋白中的主要交叉保护抗原,可以作为禽霍乱亚单位疫苗。
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- 关键词：多杀性巴氏杆菌粘附蛋白免疫原性
- 兔多杀性巴氏杆菌C51-3株黏附蛋白的表达、纯化及其抗原性检测
- 2008年
- 应用PCR从兔多杀性巴氏杆菌C51-3株基因组DNA中扩增出编码36kD黏附蛋白的cp36基因，将其克隆到pMD18-T载体并对插入片段进行测序。以重组质粒pMD18-cp36为模板，用PCR扩增得到编码信号肽除外的成熟黏附蛋白基因cpm36，并克隆到原核表达质粒pQE30中，得到重组质粒pQE30-cpm36，转化大肠杆菌M15，在IPTG诱导下表达融合蛋白CPM36，经Ni^2＋-NTA亲和层析纯化。DNA测序结果表明cp36基因片段大小为1032bp，与已报道的16个血清型多杀性巴氏杆菌cp36基因的核苷酸序列比较，同源性在76．9％～100％之间。SDS-PAGE结果显示，表达分子量约为37kD的带有6xHis标签的CPM36蛋白，与预期分子量相符。Western blotting结果表明，抗重组蛋白抗体分别能与CPM36蛋白和多杀性巴氏杆菌36kD蛋白发生特异性反应，证明原核表达蛋白具有抗原性，为进一步开展多杀性巴氏杆菌免疫保护性抗原的研究奠定了基础。
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- 关键词：兔多杀性巴氏杆菌黏附蛋白原核表达抗原性
- 禽巴氏杆菌C_(48-3)株成熟黏附蛋白基因cpm39的克隆及序列分析被引量：5
- 2008年
- 目的:对禽巴氏杆菌C48-3株编码成熟黏附蛋白的基因cpm39进行克隆和序列分析。方法:通过PCR从禽巴氏杆菌C48-3基因组DNA中扩增出cpm39基因,克隆到pMD18-T载体中,转化大肠杆菌DH5α,并对目的基因进行核苷酸序列测定;用Clustal X和Mega 2.1软件将测定的序列与GenBank中已登录的16种血清型巴氏杆菌株核苷酸序列进行同源性分析。结果:测序结果表明cpm39基因大小为1002 bp,与已知的16个血清型巴氏杆菌cpm39基因核苷酸序列的同源性为81.5%～100%。结论:克隆得到禽巴氏杆菌C48-3株编码成熟黏附蛋白的cpm39基因,该基因在不同血清型巴氏杆菌中具有很高的同源性,该蛋白可以作为研制预防巴氏杆菌病亚单位疫苗的候选抗原。
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- 关键词：禽巴氏杆菌克隆同源性
- 体内外培养禽巴氏杆菌荚膜蛋白，外膜蛋白及重组蛋白Cpm39免疫保护功能的研究
- 禽霍乱主要是由血清型A:1、A:3或A:4的禽多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)引起的在鸡等禽类中发生的一种急性、接触性败血性传染病。研究证明不同血清型禽巴氏杆菌相互之间没有交叉保护作用,这给禽...
- 严芳
- 关键词：禽多杀性巴氏杆菌
- 文献传递
- 禽多杀性巴氏杆菌C_(48-3)株成熟黏附蛋白的表达及其免疫原性检测被引量：1
- 2009年
- 目的:在大肠杆菌原核表达系统中高效表达禽多杀性巴氏杆菌成熟黏附蛋白Cpm39,并检测其免疫原性。方法:通过BamHⅠ和SalⅠ双酶切重组载体pMD18-cpm39获得cpm39基因片段,将该基因片段克隆至表达载体pMAL-p2X上,构建表达质粒pMAL-p2X-cpm39,转化至大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达融合蛋白,用禽多杀性巴氏杆菌C48-3株Cp39天然粘附蛋白的免疫血清经Western印迹检测其免疫原性。结果:SDS-PAGE结果显示表达的融合蛋白相对分子质量为78×103,与预期结果相符,而Western印迹结果表明诱导表达的融合蛋白MBP-Cpm39能与Cp39天然黏附蛋白抗体发生特异性反应。结论:构建了表达质粒pMAL-p2X-cpm39,获得了具有免疫原性的重组融合蛋白,为进一步研究禽多杀性巴氏杆菌成熟黏附蛋白的免疫保护功能奠定了基础。
- 严芳何翠张磊吾鲁木汗·那孜尔别克罗南书恩特马克·布拉提白
- 关键词：禽多杀性巴氏杆菌原核表达免疫原性
