于明懂
- 作品数：21 被引量：46H指数：4
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- DNA甲基转移酶在脓毒症小鼠急性肺损伤中的作用
- 2022年
- 目的评价DNA甲基转移酶在脓毒症小鼠急性肺损伤中的作用。方法健康雄性C57BL/6小鼠48只,6~8周龄,体重20~25 g,采用随机数字表法分为4组(n=12):假手术组(Sham组)、假手术+DNA甲基转移酶抑制剂组(Sham+5-Aza组)、脓毒症组(Sepsis组)和脓毒症+DNA甲基转移酶抑制剂组(Sepsis+5-Aza组)。采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备脓毒症小鼠急性肺损伤模型。于CLP后24 h时处死小鼠取肺组织,提取DNA利用比色法测定全基因组DNA甲基化水平,提取RNA采用实时荧光定量PCR法检测DNA甲基转移酶(DNMTl、DNMT3a、DNMT3b)的mRNA表达,确定肺湿重/干重比值,HE染色观察肺组织病理学结果,采用ELISA法测定IL-6、TNF-α、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、MDA含量、SOD和过氧化氢酶(CAT)活性。结果与Sham组比较,Sepsis组和Sepsis+5-Aza组小鼠CLP后24 h时肺组织全基因组甲基化水平升高,DNMT1和DNMT3a的mRNA表达上调,肺组织病理学损伤评分和肺湿重/干重比值升高,IL-6、TNF-α、HMGB1和MDA含量升高,SOD和CAT活性降低(P<0.05),Sham+5-Aza组上述各指标差异无统计学意义(P>0.05);与Sepsis组比较,Sepsis+5-Aza组小鼠肺组织全基因组甲基化水平降低,DNMT1和DNMT3a的mRNA表达下调,肺组织病理学损伤评分、肺湿重/干重比值、IL-6、TNF-α、HMGB1和MDA含量降低,SOD和CAT活性增加(P<0.05)。结论DNMT1和DNMT3a介导的DNA高甲基化参与了脓毒症小鼠急性肺损伤的过程。
- 李佩于明懂于明懂张英立余剑波
- 关键词：DNA甲基化脓毒症急性肺损伤
- 富氢液对人肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤时Akt/Nrf2信号通路的影响
- 2021年
- 目的评价富氢液对人肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤时丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)/核因子-E2相关因子2(Nrf2)信号通路的影响。方法体外培养的人肾小管上皮细胞系,以1.5×10^(4)个/ml的密度接种于96孔培养板(200μl/孔)或以2×10^(5)个/ml密度接种于6孔培养板(2 ml/孔),采用随机数字表法分为5组(n=30):对照组(C组)置于常氧恒温培养箱(37℃、5%CO2-21%O2-74%N2)中培养28 h;富氢液组(H组)加入含0.6 mmol/L富氢液的培养基,置于常氧恒温培养箱中孵育28 h;缺氧复氧组(H/R组)置于厌氧恒温培养箱(37℃、5%CO2-1%O2-94%N2)中缺氧24 h,取出后置于常氧恒温培养箱复氧4 h;缺氧复氧+富氢液组(H/R+H组)置于厌氧恒温培养箱中缺氧24 h,取出后加入含0.6 mmol/L富氢液的培养基,置于常氧恒温培养箱中复氧4 h;缺氧复氧+富氢液+Akt抑制剂Uprosertib组(H/R+H+U组)加入终浓度为10μmol/L的Uprosertib孵育1 h,其余处理同H/R+H组。各组细胞处理结束后,采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术测定细胞凋亡率,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性,硫代巴比妥酸法测定MDA含量,Western blot法检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、总Nrf2、核Nrf2和活化的caspase-3表达,RT-PCR法检测Nrf2 mRNA表达。结果与C组比较,H/R组和H/R+H组细胞活力和SOD活性下降,细胞凋亡率和MDA含量升高,p-Akt、核Nrf2、总Nrf2、活化的caspase-3和Nrf2 mRNA表达上调(P<0.05);与H/R组比较,H/R+H组细胞活力和SOD活性升高,细胞凋亡率和MDA含量降低,p-Akt、核Nrf2、总Nrf2和Nrf2 mRNA表达上调,活化的caspase-3表达下调(P<0.05);与H/R+H组比较,H/R+H+U组细胞活力和SOD活性下降,细胞凋亡率和MDA含量升高,p-Akt、核Nrf2、总Nrf2和Nrf2 mRNA表达下调,活化的caspase-3表达上调(P<0.05)。结论富氢液减轻人肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤的机制与促进Akt/Nrf2信号通路激活,降低氧化应激水平,抑制细胞凋亡有关。
- 杨春梅于明懂陈君王慧星
- 关键词：肾小管蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶
- POCD小鼠海马组织中差异表达miRNA的筛选、靶基因预测和生物信息学分析及其调控机制探讨被引量：2
- 2021年
- 目的采用生物信息学方法分析术后认知功能障碍(POCD)小鼠海马组织中差异表达miRNA(DEMs)及其靶基因(DEGs),并构建POCD小鼠海马组织中差异表达miRNA-mRNA的调控网络图,探讨其机制。方法在GEO数据库中搜索下载POCD小鼠海马组织与正常小鼠海马组织基因表达谱芯片数据GSE95070,采用R软件lim⁃ma函数包筛选出差异表达的miRNA,即DEMs。将DEMs分别输入到miRTarBase、TargetScan、miRDB数据库中,三个数据库中皆存在的靶基因为差异表达的DEMs靶基因,即DEGs。使用R软件中的ggplot2、enrichplot函数包对DEGs进行了基因本体(GO)功能富集分析和KEGG信号通路分析。通过STRING在线工具构建DEGs蛋白互作网络(PPI),将蛋白间相互作用得分>0.4的节点输入到可视化工具Cytoscape软件中,利用cytoHubba插件筛选出节点度值排名前10的节点,即为可能参与小鼠POCD发生发展的枢纽基因。选取枢纽基因及其相应的DEMs,利用Cyto⁃scape软件构建POCD小鼠海马组织中差异表达miRNA-mRNA调控网络图。结果共筛选出19个显著差异表达的DEMs,得到448个DEGs。GO功能富集分析结果显示,DEGs在DNA结合的转录因子激活活性、特异性RNA聚合酶Ⅱ、微小GTP酶结合等分子功能中显著富集,在树突的形成以及调节、促进神经胶质细胞的增殖等生物学过程中显著富集,在突触膜的有机组成成分、细胞边缘以及囊泡运输等细胞组分中显著富集。KEGG信号通路分析结果显示,DEGs在Cushing综合征相关通路、cGMP-PKG信号通路、Hepatitis C信号通路、Apelin信号通路等通路中显著富集。小鼠POCD发生发展的10个枢纽基因分别为Gsk3β、Igf1、Cd34、Ubxn7、Smad2、Smarca4、Stat1、Grb2、Sin3a、Ncam1,相应的6个DEMs分别为mmu-miR-362-3p、mmu-miR-3065-5p、mmu-miR-592-3p、mmu-miR-28a-3p、mmu-miR-181c-5p、mmu-miR-351-5p,成功构建了POCD小鼠海马组织中差异表达miRNA-mRNA调控网络图,其中mmu-miR-362-3p调控Gsk3β�
- 张英立刘乘麟于明懂王莹胡南卢悦淳吕国义
- 关键词：认知功能障碍术后认知功能障碍微小RNA信使RNA
- DNA甲基化在神经发育及中枢神经系统相关疾病中的作用研究进展被引量：3
- 2021年
- DNA甲基化是DNA化学修饰的一种形式,受非遗传因素影响,能够在不改变DNA序列的前提下,改变基因的表达,是一种重要的表观遗传学修饰方式,在神经发育及中枢神经系统相关疾病的发展过程中发挥了重要作用。DNA甲基化参与调控具有相同基因组的细胞产生不同类型的、不同功能的神经元和胶质细胞群体,对中枢神经系统的发育及分化、学习记忆的形成及发展过程有重要的调节作用。关键基因的DNA异常甲基化参与了神经退行性病变的发生发展过程,如发病率最高的阿尔茨海默病和帕金森病等。DNA甲基化状态在脑缺血缺氧性损伤疾病的发展过程中也表现出了明显的改变。外周血中的DNA甲基化模式可用于预测中枢神经系统相关疾病的严重程度,并且DNA甲基化是一个可逆的过程,能够被调控,使其已经逐步成为神经系统相关疾病治疗过程中的重要药物靶点。
- 于明懂于泳浩李佩张英立
- 关键词：DNA甲基化表观遗传神经保护神经变性疾病
- 不同剂量右美托咪定对病人七氟醚镇静最低肺泡有效浓度的影响被引量：10
- 2013年
- 目的探讨不同剂量右美托咪定对病人七氟醚镇静最低肺泡有效浓度（MAC）的影响。方法择期全麻下腹部手术病人，ASA分级I或Ⅱ级，年龄18—64岁，性别不限，采用随机数字表法分为4组：对照组（C组）和不同剂量右美托咪定组（D1组、D2组和D3组），D1组、D2组及功组分别静脉输注负荷量右美托咪定0．4、0．6、0．8μg／kg，经15min输注完毕，记录心血管不良反应的发生情况，继之分别以0．4、0．6、0．8μg·kg-1·h-1的速率静脉输注，c组静脉输注等容量生理盐水。负荷量输注完毕后，采用序贯法进行试验，通过调控挥发罐和氧流量使呼气末七氟醚浓度迅速达到目标浓度，C组、D1组、D2组及D3组起始呼气末七氟醚浓度分别为0．8％、0．7％、0．6％和0．5％，并维持此浓度15min，然后由观察者用中等音量的声音指令病人睁眼，出现睁眼反应，下一例病人七氟醚浓度升高1个浓度梯度，否则下一例病人降低1个浓度梯度，相邻浓度比值为0．9，将每次能够做出正确反应与不能够做出正确反应的中点为1个交叉点，直至每组出现第7个交叉点结束。计算七氟醚镇静MAC及其95％可信区间（CI）。结果功组心血管不良事件发生率明显高于D1.2组（P〈0．05）。C组、D1组、D2组及D3组七氟醚MAC及其95％CI分别为0．68％（0．64％～0．74％）、0．50％（0．47％～0．52％）、0．36％（0．32％～0．41％）和0．28％（0．26％-0．31％）。与c组比较，D1-3组七氟醚MAC降低（P〈0．05）；与D1组比较，D2组和D3组七氟醚MACe降低（P〈0．05）；与D2组比较，现组七氟醚MAC降低（P〈0．05）。结论右美托咪定0．6μg／kg既可明显降低病人七氟醚镇静MAC，又无不良反应发生，为适宜剂量。
- 于明懂苗鲁民于泳浩王维
- 关键词：右美托咪啶麻醉药剂量效应关系
- 右美托咪定预处理对肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤的抗炎作用被引量：2
- 2018年
- 目的探讨右美托咪定预处理对肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤的抗炎作用。方法体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2),以1. 5×104/ml的密度接种于96孔培养板(每孔200μl)或以2×105/ml密度接种于6孔培养板(每孔2 ml)。采用随机数字表法分为4组(n=24):正常对照组(CON组)、右美托咪定组(DEX组)、缺氧复氧组(H/R组)、缺氧复氧+右美托咪定组(H/R+DEX组)。DEX组和H/R+DEX组加入0. 1 nmol/L的右美托咪定孵育2 h,随后CON组和DEX组细胞置于常氧恒温细胞培养箱28 h,H/R组和H/R+DEX组细胞缺氧24 h复氧4 h。MTT检测各组细胞活力,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清和细胞内肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-10(IL-10)的水平。结果与CON组相比,H/R组和H/R+DEX组细胞生长状态转坏,细胞活力明显下降,TNF-α、IL-1β浓度升高,IL-10浓度降低(P <0. 05); DEX组上述指标差异无统计学意义(P> 0. 05);与H/R组相比,H/R+DEX组细胞生长状态转好,细胞活力升高,TNF-α、IL-1β浓度降低,IL-10浓度升高(P <0. 05)。结论右美托咪定预处理可以抑制缺氧复氧引起的肾小管上皮细胞的损伤,并减轻其炎症反应。
- 杨春梅于明懂王玉波高春霖
- 关键词：肾小管上皮细胞
- 右美托咪啶预处理对脐静脉内皮细胞缺氧／复氧损伤的影响及其可能机制被引量：1
- 2014年
- 目的：探讨右美托咪啶预处理对人脐静脉内皮细胞缺氧／复氧损伤的影响及其可能机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC－12），采用随机数字表法分为4组（n＝24）：正常对照组（C组）、右美托咪定组（D组）、缺氧复氧组（H／R组）、缺氧复氧＋右美托咪定组（H／R＋D组）。D组和H／R＋D组加入50μmol／L的右美托咪定孵育2 h，随后C组和D组细胞置于常氧恒温细胞培养箱12 h，H／R组和H／R＋D组细胞缺氧6 h复氧6 h。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色（ MTT）法检测各组细胞活力，流式细胞仪检测凋亡率，逆转录聚合酶链反应（ RT－PCR）检测CHOP mRNA的表达，蛋白质印迹法（ Western blotting ）检测细胞内蛋白CHOP、cleaved caspase－3的表达量。结果与C组相比，H／R组和H／R＋D组细胞活力明显下降，细胞凋亡率、CHOP mRNA 以及CHOP蛋白和cleaved caspase－3表达升高（P＜0．05）；D组上述指标差异无统计学意义（P＞0．05）；与H／R组相比， H／R＋D组细胞活力升高，细胞凋亡率、CHOP mRNA 以及CHOP蛋白和cleaved caspase－3表达降低（P＜0．05）。结论右美托咪啶预处理可以抑制缺氧复氧引起的脐静脉内皮细胞凋亡，其机制可能与下调CHOP表达有关。
- 杨春梅高春霖于明懂李波卢悦淳吕国义
- 关键词：内皮细胞缺氧右美托咪啶
- 含左西孟旦的心脏停搏液对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用的实验研究
- 目的：观察含左西孟旦(levosimendan，Levo)的St.Thomas’Ⅱ(STH-2)心脏停搏液对大鼠离体心脏缺血-再灌注损伤(Myocardical ischemia reperfusion injury，M...
- 于明懂
- 关键词：心脏缺血心肌保护左西孟旦实验药理
- 吸入氢气对脓毒症小鼠海马组织DNA甲基化的影响被引量：2
- 2020年
- 目的评价吸入氢气对脓毒症小鼠海马组织的DNA甲基化状态的影响.方法54只健康雄性C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为3组:假手术组(Sham组)、脓毒症组(Sepsis组)和氢气治疗组(Sepsis+H2组),每组18只.Sepsis组和Sepsis+H2组采用盲肠结扎穿孔法(CLP)制备小鼠脓毒症模型,Sepsis+H2组小鼠于手术后1 h和6 h吸入用空气混合的2%氢气1 h,Sham组只开腹不进行盲肠结扎和穿孔.3组小鼠于假手术或CLP后1、3、7 d取小鼠海马组织,比色法测定全基因组DNA甲基化水平;实时定量PCR法检测DNA甲基化转移酶(DNMTs,包括DNMT1、DNMT3a和DNMT3b)的mRNA水平;Western blot法检测DNMT1、DNMT3a和DNMT3b蛋白表达水平.结果与Sham组比较,Sepsis组小鼠在建模后1、3、7 d海马组织全基因组甲基化水平明显下降(P<0.05),DNMT1和DNMT3a的mRNA和蛋白表达水平升高,DNMT3b的mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05);与Sepsis组比较,Sepsis+H2组全基因组甲基化水平升高(P<0.05),DNMT1和DNMT3a的mRNA和蛋白表达水平下降,DNMT3b的mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05).结论吸入氢气可纠正脓毒症小鼠海马组织的DNA甲基化紊乱状态,改善DNA甲基化紊乱状态是氢气治疗脓毒症相关性脑病的重要机制之一.
- 于明懂李佩于泳浩卢悦淳陈会敏王新谢克亮
- 关键词：氢脓毒症DNA甲基化海马
- 右美托咪定对脑缺血再灌注损伤保护作用的研究现状被引量：1
- 2022年
- 脑组织能量储备力低下,代谢率及耗氧率高,所以发生脑缺血后的首要处理方式一般是积极恢复其血供,但其再灌注造成缺血组织的再次损伤是临床面临的重要问题,严重影响患者的生活质量。脑缺血再灌注损伤是一个极其复杂的病理生理过程,近些年来,脑缺血再灌注在围手术期的神经保护已经成为研究热点。右美托咪定作为围手术期常用的镇静药物,是特异性、高选择性的α2肾上腺素能受体激动剂,主要用于重症监护室和手术患者的镇痛和镇静,具有维持血流动力学稳定的优势。相关研究已证实其对脑缺血再灌注所致的脑损伤具有神经保护作用。现对脑缺血再灌注的发病机制以及国内外右美托咪定对脑缺血再灌注损伤保护作用机制研究现状进行总结,为临床研究提供参考。
- 杨春梅于明懂
- 关键词：脑缺血再灌注自噬炎症氧化应激凋亡
