刘洋
- 作品数：29 被引量：34H指数：3
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项“重大新药创制”科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人源抗发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒-Gn蛋白重组抗体的研究
- 2015年
- 为研制人源抗发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)Gn蛋白重组抗体,本研究利用噬菌体表面展示技术,以SFTSV全病毒颗粒和重组表达SFTSV-Gn蛋白为抗原,从人源抗SFTSV Fab噬菌体抗体库中筛选抗SFTSV-Gn蛋白的重组Fab抗体,通过ELISA对Fab抗体的结合特异性进行检测。将Fab抗体基因克隆入哺乳动物细胞表达载体HL51-14,瞬时转染293T细胞获得分泌表达的IgG抗体。通过ELISA、IFA和Western-blotting检测IgG抗体的结合特异性。采用亲和层析纯化IgG抗体,并用微量中和试验检测IgG抗体的中和活性。结果表明经过三轮富集筛选,以SFTSV病毒颗粒为抗原筛选出364株针对SFTS病毒核蛋白Fab抗体,没有筛选出特异性结合Gn蛋白的阳性克隆,而通过Gn蛋白筛选得到8株特异结合Gn蛋白的Fab抗体,其中5株来自Lambda库,3株来自Kappa库。ELISA、IFA和Western-blotting检测证实这8株IgG抗体均能特异性结合Gn蛋白。微量中和试验显示8株新筛抗体没有中和活性,但仍可为后续SFTSV人源单克隆抗体的研究提供借鉴和参考。
- 陈素华孙丽娜刘洋李川刘林梁米芳仇佩虹
- 关键词：噬菌体抗体库发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒
- 人源抗狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号表位链置换基因工程抗体研究被引量：3
- 2016年
- 为获得针对狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号表位的人源单抗,本研究采用噬菌体展示平台,对一株狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号抗原表位的人源单抗CR4098采用链置换法进行改造。以CR4098单链抗体为骨架,从狂犬疫苗接种者外周血分离淋巴细胞,提核酸逆转录,PCR扩增抗体轻链可变区基因,替换CR4098的轻链基因,构建轻链置换文库。经纯化狂犬病毒aG株富集筛选,以上述筛选出的轻链阳性克隆为骨架,构建重链置换抗体库,富集筛选后通过ELISA和IFA鉴定阳性抗体克隆并进行序列测定。利用IgG表达载体VH/VK双质粒系统瞬时转染293T细胞实现IgG抗体的分泌型表达,通过亲和力测定和中和试验鉴定IgG抗体功能。结果显示,通过轻链置换,我们获得14株抗狂犬病毒scFv抗体,通过ELISA、IFA、亲和力测定及中和试验确定人源抗体RV3A5特异性结合狂犬病毒糖蛋白,对狂犬病毒CVS株和aG株均具有良好的中和活性,亲和力达到2.8×10-9 M。通过竞争ELISA对抗体结合表位进行鉴定,结果表明RV3A5特异性识别糖蛋白Ⅲ号抗原表位。通过链置换法成功获得1株全新的针对狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号表位的高亲和力人源中和抗体,为狂犬病毒抗体制剂鸡尾酒治疗奠定了基础。
- 孙丽娜刘洋李川李德新梁米芳
- 关键词：狂犬病毒单链抗体糖蛋白表位
- 重组人源抗狂犬病毒单克隆抗体鸡尾酒暴露后预防效果评价被引量：4
- 2016年
- 本研究对重组人源抗狂犬病毒单克隆抗体鸡尾酒暴露后预防效果进行评价,选用狂犬病毒国内代表性疫苗株、实验室固定毒株及街毒株共11株病毒,通过荧光抗体病毒中和试验(FAVN)分析针对狂犬病毒糖蛋白Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号表位的三株单抗CR57(I)、RV08(II)和RV3A5(Ⅲ)及其鸡尾酒配伍的中和谱,在此基础上选用狂犬病病毒标准攻击毒株CVS-11感染仓鼠腓肠肌,进一步研究重组人源抗狂犬病毒单抗及其鸡尾酒制剂暴露后保护效果,结果显示CR57、RV08、RV3A5及其三联配伍制剂对11株狂犬病毒均具有明确的中和作用,按中和效价1∶1∶1配伍组成的鸡尾酒组合制剂对这些毒株的中和能力没有减弱,表明三株抗体间无相互干扰,对个别毒株(JX08-45、Flury、SRV9)的中和活性表现出协同作用;三株单抗CR57、RV08和RV3A5单独应用或是三联配伍应用的暴露后保护率达100%,与HRIG单独免疫相比较具有更优秀的动物保护活性;在与疫苗联合应用方面重组人源单抗与HRIG在暴露后预防的效果相仿,均可达到100%的保护率,所以重组人源单抗具有替代HRIG应用于狂犬病暴露后预防与保护的潜力,为我国具有自主知识产权的狂犬单抗鸡尾酒制剂的研发打下基础。
- 孙丽娜刘洋李川李德新梁米芳
- 关键词：狂犬病毒糖蛋白
- 人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体、其制备方法及应用
- 本发明提供了利用噬菌体表面展示技术筛选获得的人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体HBIgG03(轻链和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示)和HBIgG12(轻链和重链可变区的氨基...
- 梁米芳毕胜利孙丽娜郭瑜刘洋张福顺李川李德新
- 文献传递
- 一种人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体、其制备方法及应用
- 本发明公开了一种人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体、其制备方法及应用。本发明运用噬菌体表面呈现技术，采集乙肝疫苗免疫后具有高滴度表面抗体者的外周血淋巴细胞，通过基因工程手段构建了人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体文库，并...
- 梁米芳毕胜利孙丽娜郭瑜刘洋张福顺李川李德新
- 文献传递
- 寨卡病毒、登革病毒、基孔肯雅病毒三重荧光定量RT-PCR检测方法的建立及评价被引量：12
- 2018年
- 本研究旨在建立寨卡病毒（ZIKV virus,ZIKV）、登革病毒（Dengue virus,DENV）以及基孔肯雅病毒（Chikungunya virus,CHIKV）三种病毒快速筛查、诊断的核酸检测技术。选用ZIKV的NS1基因、DENV的NS5蛋白基因以及CHIKV的E1蛋白基因作为靶标区域设计三组特异性引物探针,建立三重实时荧光定量RT-PCR检测方法。用ZIKV、DENV、CHIKV病毒体外转录RNA和病毒细胞培养物对该方法的灵敏性、特异性、重复性等方面进行评价,最后临床样本以及模拟标本验证。结果显示：三重实时荧光定量RT-PCR检测方法扩增效率均可达到90%以上,三种病毒体外转录RNA最低检测限均低于15拷贝/PCR,病毒培养物最低检出限均低于10PFU/mL且与单重检测方法无明显差异。与其他病毒无交叉反应,变异系数均在2%以内。临床标本及模拟标本检出率均可达95%以上。本研究建立的检测寨卡病毒、登革病毒以及基孔肯雅病毒的三重实时荧光RT-PCR方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于寨卡病毒病等相关临床标本的检测。
- 龚雪蕊李阿茜刘洋李川张全福李德新梁米芳王世文
- 基于Luminex平台的非洲流行的病毒性出血热IgG抗体多重检测方法的初步建立被引量：2
- 2018年
- 目的初步建立针对非洲流行的病毒性出血热IgG抗体的多重检测方法。方法重组表达并纯化非洲常见的出血热病毒抗原，将抗原偶联至荧光微球，单重检测兔血清IgG抗体评价偶联效果，多重检测从非洲入境的发热人员出血热病毒IgG抗体，并与ELISA方法比较，使用SPSS进行卡方检验和一致性分析。结果重组表达纯化的出血热病毒抗原的纯度和浓度均达到偶联和检测要求。各重组抗原与相应荧光微球偶联有效，多重检测78份非洲入境发热人员血清样本，共检出1份拉沙热IgG抗体阳性、1份卢约病毒IgG抗体阳性，4份登革病毒IgG抗体阳性，6份黄热病毒IgG抗体阳性。与ELISA方法相比较结果无明显统计学差异，且两种方法具有高度相关性。结论初步建立了基于Luminex高通量检测平台的针对非洲流行的病毒性出血热IgG抗体多重检测方法，为实现鉴别诊断提供了实验基础。
- 芜为刘洋张全福李川梁米芳李建东李德新
- 关键词：病毒性出血热
- 人源抗乙肝表面抗原基因工程抗体的研究被引量：1
- 2012年
- 目的研制人源抗乙肝表面抗原（HBsAg）基因工程抗体。方法采集多个HBsAg加强免疫后表面抗体阳性（HBsAb＋）志愿者的外周血，分离淋巴细胞，构建人源抗HBsAgFab噬菌体抗体基因文库。用纯化的HBsAg对抗体库进行富集筛选，经过序列测定确定抗体轻重链型别，分别克隆入真核细胞表达载体pAc—FcR和HL51—14，转染昆虫Sf9细胞和293T细胞，利用杆状病毒／昆虫细胞系统和哺乳动物细胞系统实现全抗体的分泌型表达。结果成功筛选出20株抗HBsAg的人源Fab抗体并制备出其中6株的IgG全抗体，竞争性ELISA结果显示6株全抗体针对的是HBsAg3个不同表位。结论成功筛选并获得了6株针对3个不同表位的抗HBsAg的IgG全抗体，为治疗性抗体和新疫苗的研制奠定了基础。
- 刘洋孙丽娜李川张福顺梁米芳李德新
- 关键词：细菌噬菌体免疫球蛋白G
- 人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体、其制备方法及应用
- 本发明提供了利用噬菌体表面展示技术筛选获得的人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体HBIgG03(轻链和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示)和HBIgG12(轻链和重链可变区的氨基...
- 梁米芳毕胜利孙丽娜郭瑜刘洋张福顺李川李德新
- 人源抗狂犬病毒P蛋白基因工程抗体的研究
- 2015年
- 目的 筛选针对狂犬病毒人源基因工程抗体.方法 采集狂犬疫苗免疫人群外周血并分离淋巴细胞,构建抗狂犬病毒Fab噬菌体抗体库,用纯化狂犬病毒CTN株富集筛选,ELISA初步鉴定阳性克隆,测序确定抗体轻重链型别,构建IgG全抗表达载体,转染293T细胞并纯化IgG抗体,采用竞争ELISA、Western Blot和IFA鉴定抗体功能.结果 筛选出1株抗狂犬病毒的人源Fab抗体并表达纯化IgG全抗体,IFA结果显示抗体特异针对狂犬病毒,竞争性ELISA,Western Blot结果显示新筛抗体针对磷蛋白.结论 首次通过Fab噬菌体抗体库技术获得针对狂犬病毒磷蛋白人源抗体,为磷蛋白功能机制研究和狂犬病的诊断提供了新的抗体.
- 刘洋孙丽娜李川梁米芳李德新
- 关键词：狂犬病病毒细菌噬菌体抗体病毒
