刘海冰
- 作品数：12 被引量：21H指数：3
- 供职机构：江苏大学附属人民医院更多>>
- 发文基金：镇江市科技支撑计划(社会发展)项目国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- EV71型VP1蛋白表达与纯化
- 赵培培孔枕枕刘海冰茅凌翔苏兆亮仝佳王胜军陈建国
- 肠道病毒71型多表位-mGITRL真核表达质粒的构建、表达及其免疫原性研究被引量：1
- 2012年
- 目的:构建肠道病毒71型(EV71)多表位-mGITRL真核表达质粒并对其免疫原性进行研究。方法:串联已证实的VP1表位并合成(VP1’);PCR扩增获得mGITRL,克隆至真核共表达载体pIRES中。对重组质粒进行测序鉴定后,以脂质体介导法转染至COS7细胞,通过Western blot方法检测其在COS7细胞中的表达。将构建好的重组质粒免疫小鼠,应用ELISA法检测小鼠血清中抗VP1的抗体滴度。结果:PCR扩增出目的基因,测序证实真核共表达载体pIRES-VP1’-mGITRL构建成功,Western blot结果显示目的基因在COS7细胞和肌细胞中过表达。小鼠血清中检测出高滴度的抗VP1抗体。结论:成功扩增出目的基因并构建VP1表位的重组真核共表达载体pIRES-VP1’-mGITRL,在COS7细胞和肌细胞中过表达,并获得高滴度的抗VP1抗体。
- 毛镇伟刘海冰郑东彭辉勇王瑞苏兆亮陈建国
- 关键词：EV71VP1表位
- Bcl-6基因3'UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与miR-346靶向关系的验证被引量：1
- 2014年
- 目的:构建Bcl-6基因3'非编码区(3'untranslated region,3'UTR)荧光素酶报告质粒,分析miR-346对Bcl-6的调控作用。方法:通过PicTar数据库和miRanda数据库预测可能与Bcl-6基因3'UTR作用的miRNA;将人工合成的Bcl-6基因3'UTR区序列克隆至荧光素酶报告质粒psiCHECK-2;将重组荧光素酶报告质粒和miRNA mimics共转染293T细胞,用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。结果:PicTar数据库和miRanda数据库预测交叉结果显示,miR-346与Bcl-6基因3'UTR存在互补结合位点;构建的荧光素酶报告质粒经酶切及测序鉴定正确;重组质粒和miR-346 mimics共转染293T细胞后,荧光素酶报告质粒表达的荧光素酶活性降低66%左右。结论:成功构建了Bcl-6基因3'UTR荧光素酶报告质粒,筛选出和Bcl-6表达相关的miRNA即miR-346。
- 陈娟袁靖吴晶晶田洁汤新逸芮棵田新宇张悦刘海冰耿丽娜杨珺许化溪王胜军
- 关键词：BCL-6基因微小RNA
- 肠道病毒71型VP1蛋白在昆虫杆状病毒表达系统的表达被引量：1
- 2015年
- 目的利用昆虫杆状病毒表达系统表达肠道病毒71型VP1蛋白并对其进行纯化。方法首先通过化学合成法合成EV71 VP1基因,然后将EV71 VP1基因插入到供体质粒pFast Bac1中,构成重组质粒pFast Bac1-VP1,再转入JM190感受态细菌扩增,然后提取重组质粒pFast Bac1-VP1转入DH10BacTM感受态细胞,通过转座从而获得重组质粒bacmid-VP1,采用脂质体Cellfectin Reagent将重组质粒bacmid-VP1转染Sf9细胞。通过SDS-PAGE、Western blot法检测目的蛋白的水平,经镍离子亲和层析,纯化VP1蛋白。结果 SDS-PAGE及Western blot法检测获得蛋白的相对分子质量与预期结果一致。Bradford分析纯化后蛋白的浓度为70μg/m L,纯化度达90%。结论利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达EV71 VP1蛋白。
- 赵培培孔枕枕刘海冰茅凌翔苏兆亮仝佳王胜军陈建国
- 关键词：EV71VP1蛋白
- 1例肺隐球菌病误诊为涂阴肺结核的病例报告
- 2023年
- 患有获得性免疫缺陷综合征(AIDS)、糖尿病或使用大量免疫抑制剂和糖皮质激素的患者很容易感染新型隐球菌,但是临床表现和影像学检查结果使其诊断困难。肺隐球菌病在临床和影像学表现上与肺结核相似,有时被误诊为肺结核[1]。笔者对1例被误诊为不典型涂阴肺结核的新型隐球菌感染病例进行报道,回顾了该例多发肺结节的肺隐球菌病患者的诊断过程(包括影像学表现、微生物检验、病理资料)及治疗情况,以帮助降低临床误诊的可能性。
- 曹玲刘海冰郑礼杰陈建国
- 关键词：肺隐球菌病肺结核误诊
- 胰腺癌患者外周血CD4^+T亚群细胞因子及转录因子的表达及其临床意义被引量：1
- 2019年
- 目的:探讨胰腺癌患者外周血中CD4^+T亚群细胞因子及转录因子表达。方法:收集27例胰腺癌患者和30例健康者外周血标本,ELISA法检测两组血清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-17、转化生长因子(TGF)-β及IL-10含量。实时荧光定量PCR检测两组血清中相关转录因子T细胞表达的T盒(T-box expressed in T cells,T-bet)、GATA结合蛋白3(GATA-binding factor 3,Gata-3)、视黄酸相关的孤儿受体γt (RAR-related orphan receptor gamma t,RORγt)及叉头框蛋白p3(Forkhead box protein P3,Foxp3)表达。结果:与对照组相比,胰腺癌组外周血中细胞因子IFN-γ、IL-2水平明显降低,T-bet mRNA表达下降(P均<0. 05); IL-4、IL-17、TGF-β及IL-10水平明显升高,Gata-3 mRNA、RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表达明显升高(P均<0. 05)。结论:胰腺癌患者外周血中Th1类细胞因子及转录因子表达下降,Th2、Th17和Tregs类细胞因子及转录因子表达升高; Th2、Th17及Treg细胞可能协同促进胰腺肿瘤疾病的进展。
- 刘嫣方付敏付敏刘海冰尹亮
- 关键词：胰腺癌TH1TH2TH17TREGS
- 肠道病毒71型ICR乳鼠感染模型的建立被引量：3
- 2017年
- 目的:建立肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染ICR乳鼠模型,为该病毒疫苗和抗病毒药物的研究提供实用的动物模型。方法:将本课题组自行分离鉴定的EV71 G03株经颅内接种感染1日龄SPF级ICR小鼠,定期对濒死的小鼠实施安乐死,采集心肌、肺组织、骨骼肌、小肠和脑组织,RT-PCR检测病毒RNA、HE染色观察病理形态学、免疫组织化学分析及蛋白质印迹鉴定病毒VP1蛋白表达。结果:经颅内途径感染ICR乳鼠后,小鼠出现消瘦、精神麻痹、弓背、肢体麻痹瘫痪、死亡等症状;病理学观察发现,在感染后小鼠的心肌、肺组织、骨骼肌、小肠和脑组织等出现特定的病理变化,如出血、炎症细胞浸润等。免疫组化显示感染后所取小鼠的5种组织都有EV71病毒特异性分布。蛋白质印迹分析显示EV71 VP1蛋白在所取小鼠5种组织均有表达。结论:成功建立了EV71感染1日龄ICR乳鼠模型。
- 秦闫燕卢洁李季霖刘海冰茅凌翔邵启祥陈建国
- 关键词：肠道病毒71型动物模型小鼠
- 干扰EV71病毒2A^(pro)基因的siRNA具有潜在的抗病毒作用
- 2014年
- 目的:探讨以肠病毒71(entrovirus 71,EV71)2A蛋白酶(2Apro)基因为靶序列合成的siRNA是否具有潜在的抗病毒作用。方法:用Lipofectamine 2000脂质体分别将40、60、80 nmol/L FITC标记的BLOCK-iT Fluorescent Oligo转染RD细胞,通过流式细胞仪和倒置荧光显微镜检测siRNA的转染效率。将化学合成的3个siRNA-2Apro(siRNA-69、294、319)和阴性对照的乱序si-RNA(siRNA-SCS)转染RD细胞,siRNA-2Apro为实验组,siRNA-SCS为阴性对照组,另设模拟转染组,仅用脂质体处理;用EV71分别感染各组RD细胞,观察细胞形态学改变,荧光定量PCR和蛋白质印迹检测病毒RNA和VP1蛋白。结果:当siRNA浓度为60 nmol/L时转染效率最高,达87%。细胞形态学结果显示,与对照组比较,实验组细胞只发生了轻微的病变。荧光定量PCR和蛋白质印迹结果显示,siRNA-2Apro组的病毒RNA和VP1蛋白明显低于对照组(P<0.01)。结论:以EV71 2Apro基因为靶序列化学合成的siRNA能有效地抑制病毒的复制。
- 刘海冰孔枕枕赵培培茅凌翔苏兆亮陈建国
- 关键词：SIRNA病毒抑制
- EV71多表位-mGITRL真核表达质粒的构建、表达及其免疫原性研究
- 目的:构建肠道病毒EV71多表位-m GIT RL真核表达质粒并对其免疫原性进行研究。方法:串联已证实的VP1表位并合成(VP1’);PCR扩增获得m GIT RL,克隆至真核共表达载体p I RES中。对重组质粒进行测...
- 刘海冰毛镇伟郑东彭辉勇王瑞苏兆亮陈建国
- 关键词：EV71VP1表位
- PCT、CRP及内毒素对血流感染致病菌类型鉴别能力的研究被引量：9
- 2021年
- 目的探讨降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)和内毒素对血流感染致病菌类型的诊断能力及在血流感染中的临床价值。方法选择江苏大学附属人民医院2018-2019年血培养阳性并且检测了PCT/CRP/内毒素的患者进行研究,分别比较不同致病菌所致血流感染患者的炎症指标水平,并评价各炎症指标的诊断效能。结果革兰阴性菌(G^(-)菌)血流感染患者的PCT、CRP和内毒素水平均明显高于革兰阳性菌(G^(+)菌)血流感染患者,链球菌血流感染患者的PCT水平明显高于葡萄球菌血流感染患者,产超广谱β-内酰胺酶肠杆菌科细菌(ESBL)血流感染患者的CRP水平明显低于非ESBL血流感染患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论PCT、CRP和内毒素均能有效预测G+菌和G-菌所致血流感染的致病菌类型,其中PCT的预测能力最强;此外,PCT具有鉴别葡萄球菌和链球菌所致血流感染的能力,CRP可以鉴别ESBL与非ESBL所致血流感染。因此,各炎症指标在血流感染的早期诊断和治疗中具有重要意义。
- 刘海冰张悦陈建国芮棵
- 关键词：血流感染C-反应蛋白内毒素
