赵培培
- 作品数：5 被引量：6H指数：1
- 供职机构：江苏大学基础医学与医学技术学院检验医学研究所更多>>
- 发文基金：镇江市科技支撑计划(社会发展)项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- EV71型VP1蛋白表达与纯化
- 赵培培孔枕枕刘海冰茅凌翔苏兆亮仝佳王胜军陈建国
- 肠道病毒71型VP1蛋白在昆虫杆状病毒表达系统的表达被引量：1
- 2015年
- 目的利用昆虫杆状病毒表达系统表达肠道病毒71型VP1蛋白并对其进行纯化。方法首先通过化学合成法合成EV71 VP1基因,然后将EV71 VP1基因插入到供体质粒pFast Bac1中,构成重组质粒pFast Bac1-VP1,再转入JM190感受态细菌扩增,然后提取重组质粒pFast Bac1-VP1转入DH10BacTM感受态细胞,通过转座从而获得重组质粒bacmid-VP1,采用脂质体Cellfectin Reagent将重组质粒bacmid-VP1转染Sf9细胞。通过SDS-PAGE、Western blot法检测目的蛋白的水平,经镍离子亲和层析,纯化VP1蛋白。结果 SDS-PAGE及Western blot法检测获得蛋白的相对分子质量与预期结果一致。Bradford分析纯化后蛋白的浓度为70μg/m L,纯化度达90%。结论利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达EV71 VP1蛋白。
- 赵培培孔枕枕刘海冰茅凌翔苏兆亮仝佳王胜军陈建国
- 关键词：EV71VP1蛋白
- 干扰EV71病毒2A^(pro)基因的siRNA具有潜在的抗病毒作用
- 2014年
- 目的:探讨以肠病毒71(entrovirus 71,EV71)2A蛋白酶(2Apro)基因为靶序列合成的siRNA是否具有潜在的抗病毒作用。方法:用Lipofectamine 2000脂质体分别将40、60、80 nmol/L FITC标记的BLOCK-iT Fluorescent Oligo转染RD细胞,通过流式细胞仪和倒置荧光显微镜检测siRNA的转染效率。将化学合成的3个siRNA-2Apro(siRNA-69、294、319)和阴性对照的乱序si-RNA(siRNA-SCS)转染RD细胞,siRNA-2Apro为实验组,siRNA-SCS为阴性对照组,另设模拟转染组,仅用脂质体处理;用EV71分别感染各组RD细胞,观察细胞形态学改变,荧光定量PCR和蛋白质印迹检测病毒RNA和VP1蛋白。结果:当siRNA浓度为60 nmol/L时转染效率最高,达87%。细胞形态学结果显示,与对照组比较,实验组细胞只发生了轻微的病变。荧光定量PCR和蛋白质印迹结果显示,siRNA-2Apro组的病毒RNA和VP1蛋白明显低于对照组(P<0.01)。结论:以EV71 2Apro基因为靶序列化学合成的siRNA能有效地抑制病毒的复制。
- 刘海冰孔枕枕赵培培茅凌翔苏兆亮陈建国
- 关键词：SIRNA病毒抑制
- 干扰EV71病毒2A蛋白酶基因的siRNA具有潜在的抗病毒作用
- 目的 探讨以EV71 病毒2A 蛋白酶基因为靶序列化学合成的siRNA 是否具有潜在的抗病毒作用方法 化学合成以EV71 病毒2A 蛋白酶基因为靶序列的siRNA,通过流式细胞仪和倒置免疫荧光显微镜检测siRNA 的转染...
- 刘海冰孔枕枕赵培培王胜军陈建国
