张庆
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 供职机构：徐州市肿瘤医院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 细胞周期蛋白激酶9（CDK9）对卡波氏肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）裂解复制周期的影响
- 2017年
- 目的 探讨细胞周期蛋白激酶9（cyclin-dependent kinase 9，CDK9）在卡波氏肉瘤相关疱疹病毒（Kaposi′s sarcoma-associated herpesvirus，KSHV）裂解复制周期中的作用。方法 分别应用CDK9特异性抑制剂FIT-039处理或CDK9小干扰RNA（siRNA）转染iSLK.219及TREx-K-Rta BCBL-1细胞，四环素（Dox）或佛波酯（TPA）和丁酸钠刺激48 h后，分别采用荧光显微镜和实时定量PCR（qPCR）方法观察红色荧光蛋白（RFP，病毒裂解复制）阳性细胞数目及KSHV相关基因的mRNA转录水平。染色质免疫沉淀（ChIP）试验检测KSHV PAN启动子上RNA PolⅡ及其磷酸化CTD-S2的富集含量。结果 FIT-039处理和CDK9-siRNA转染后，iSLK.219细胞RFP阳性率显著降低、TREx-K-Rta BCBL-1细胞中KSHV裂解复制周期相关基因ORF50、PAN及K2的mRNA转录水平明显下降。且FIT-039处理后，TREx-K-Rta BCBL-1细胞中KSHV PAN启动子上结合的RNA PolⅡ及其磷酸化CTD-S2含量显著下降。结论 CDK9可能通过磷酸化RNA PolⅡ丝氨酸调控KSHV病毒裂解复制。
- 张庆史震李小翠王晓天薛敏周峰
- 关键词：卡波济肉瘤相关疱疹病毒
- miR-383增强SLE患者外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达被引量：2
- 2011年
- 目的初步探讨microRNA-383（miR-383）对IL-2信号介导的系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中Foxp3mRNA转录的影响。方法采用Westernblot方法检测14例SLE患者PBMCs中SOCS3蛋白表达水平，通过相关microRNA软件预测和Westernblot鉴定靶向SOCS3的microRNA，RT—PCR方法检测miR-383转染SLE患者的PBMCs中转录因子Foxp3mRNA的转录水平。结果Westernblot结果发现，SLE患者的PBMCs中SOCS3蛋白表达水平显著增加，miR-383抑制SOCS3蛋白表达。SLE患者PBMCs转染miR-383后Foxp3mRNA的转录水平显著增高。结论miR-383靶向抑制SOCS3，上调IL-2信号介导的SLE患者的PBMCs中Foxp3mRNA的转录水平。
- 史震张庆张海清李小翠郑葵阳周峰
- 关键词：系统性红斑狼疮SOCS3外周血单个核细胞FOXP3MRNA
- 人T淋巴细胞活化后羟甲基化的变化
- 2014年
- 目的初步探讨人T淋巴细胞活化后细胞内5-羟甲基胞嘧啶(5-hydroxymethylcytosine,5-hmC)和5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5-mC)的含量变化。方法成年健康人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMCs)分别经刀豆蛋白(ConA)或CD3抗体和CD28抗体处理72 h后,采用免疫荧光法观察5-hmC和5-mC的变化,Real-time PCR检测TETs的mRNA转录水平。结果免疫荧光结果显示无论是经ConA非特异性刺激还是经CD3抗体和CD28抗体处理的人T淋巴细胞细胞核内,5-hmC水平明显高于5-mC,且后者从核内转位到胞浆;CD3抗体和CD28抗体处理后的TET2 mRNA转录水平显著高于非处理组。结论活化的T淋巴细胞中5-mC转变是由TET2调控的。
- 张庆史震李小翠刘晓梅汤仁仙郑葵阳周峰
- 关键词：T淋巴细胞
- 细胞周期蛋白激酶抑制调控蛋白p21在HHV-8病毒裂解复制周期的作用
- 2024年
- 目的研究细胞周期蛋白激酶抑制调控蛋白p21对人类疱疹病毒8型(human herpesvirus 8,HHV-8)病毒裂解复制周期的影响。方法组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂SAHA预处理后,倒置荧光显微镜观察红色荧光蛋白(RFP)阳性的iSLK.219细胞数,实时定量PCR检测TREx-K-Rta BCBL-1细胞中HHV-8病毒相关基因的mRNA水平。脂质体转染p21-siRNA后,免疫印迹法检测iSLK.219和TREx-K-Rta BCBL-1细胞中p21蛋白表达,计算RFP阳性iSLK.219细胞百分率,检测TREx-K-Rta BCBL-1细胞中ORF50和PAN的mRNA水平,CCK-8法和台盼蓝染色观察细胞存活情况。结果SAHA显著增强iSLK.219细胞RFP阳性率、TREx-K-Rta BCBL-1细胞中HHV-8裂解复制周期相关基因ORF50、PAN及K8.1的mRNA水平和p21蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。siRNA沉默p21后,iSLK.219细胞RFP阳性率、TREx-K-Rta BCBL-1细胞中HHV-8裂解复制周期相关基因ORF50和PAN mRNA水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),且保护SAHA介导的TREx-K-Rta BCBL-1细胞死亡。结论抑制HDAC活性通过调控p21促进HHV-8病毒裂解复制。
- 张庆秦苏萍李小翠王晓天刘晓梅周峰
- 关键词：人类疱疹病毒8型
- 携带microRNA-383重组慢病毒的包装及其上调PBMCs中Foxp3mRNA的表达被引量：4
- 2011年
- 目的包装携带microRNA-383(miR-383)的重组慢病毒,并观察其对正常人外周血单个核细胞(peripheral bloodmononuclear cells,PBMCs)中Foxp3 mRNA转录的影响。方法将4个串联的miRNA-383前体序列亚克隆入慢病毒转移载体pHAGE-CMV-MCS-IZsGreen,构建重组载体,命名为pHAGE-miR-383。将pHAGE-383、包装质粒psPAX2与包膜质粒pMD2.G共转染入HEK 293T细胞进行重组慢病毒包装。进而分别采用定量PCR和RT-PCR检测慢病毒miR-383和Mock感染48 h后细胞中的miR-383的表达和转录因子Foxp3 mRNA的转录水平。结果定量PCR证实携带miR-383的重组慢病毒包装成功,滴度为1×107 TU/ml。以MOI为5的慢病毒感染HEK 293T细胞后miR-383表达明显增多。RT-PCR结果显示,miR-383能够上调PBMCs中Foxp3 mRNA的表达。结论成功包装出含有miR-383前体序列的重组慢病毒,而且慢病毒miR-383能够上调PBMCs中Foxp3 mRNA的转录水平,为进一步研究其对调节性T细胞的调控作用奠定基础。
- 周峰张庆张海清刘晓梅史震郑葵阳
- 关键词：慢病毒PBMCS
