徐杰
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
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- 人11β-羟基类固醇脱氢酶基因克隆与表达的实验研究被引量：1
- 2018年
- 目的:构建人Ⅰ型11β羟基类固醇脘氢酶(11β-HSD1)原核表达载体并表达目的蛋白,为代谢综合征的研究奠定基础。方法:从Hep G2细胞系中提取细胞总RNA,经反转录合成c DNA第一链后再以其为模版,扩增11β-HSD1基因。p ET32a原核表达载体和PCR扩增出的产物经过Bam HI和Xho I双酶切后,在16℃过夜的条件下用T4 DNA连接酶连接上述酶切产物,然后用该产物转化Top10大肠杆菌感受态细胞,挑克隆后进行测序。将克隆成功的11β-HSD1重组质粒转化大肠杆菌菌株BL21(DE3),分别用不同浓度、不同时间的IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖)诱导其表达,并优化诱导条件。表达的蛋白采用聚丙烯酰胺凝胶电泳结合考马斯亮蓝染色的方法观察目的基因的表达情况。结果:挑选的克隆经测序证实p ET32a-11β-HSD1重组质粒构建成功,11β-HSD1基因与携带有6×His-tag标签和肠激酶识别位点的硫氧还蛋白trx A基因融合,在IPTG浓度为10μM,诱导时间为5小时时,上清中有明显的分子量约为52 k Da的重组蛋白产生,且目的蛋白分子量的大小与预期一致。结论:本实验成功构建了人p ET32a-11β-HSD1蛋白原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后成功诱导了其融合表达。目的蛋白主要以可溶性蛋白的形式存在于上清中,为进一步研究其结构、功能、制备抗体等奠定了基础。
- 胡蒙亮徐杰任航江韩亭亭满永唐蔚青黎健李国平
- 关键词：原核表达硫氧还蛋白
- Ⅰ型11β羟基类固醇脱氢酶在肿瘤坏死因子-α诱导的胰岛素抵抗中的作用被引量：7
- 2016年
- 目的探讨Ⅰ型11β羟基类固醇脱氢酶（11β—HSD1）在肿瘤坏死因子-α（TNFα）诱导的胰岛素抵抗中的作用机制。方法筛选适宜浓度和时间的TNFα处理HepG2细胞，分别用实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）和蛋白免疫印迹（Western blot）技术分析TNFα对11β—HSD1，糖皮质激素受体（GR），磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）和葡萄糖-6-磷酸酶（G6Pase）mRNA和蛋白表达的影响；用葡萄糖检测试剂盒检测糖异生的水平，肌／肝糖原检试剂盒和高碘酸-希夫（PAS）染色法检测细胞糖原合成的水平；分析AKT／GSK胰岛素信号通路的表达；并用11β-HSD1特异性抑制剂BVT2733预处理HepG2细胞，检测AKT／GSK信号通路、糖异生和糖原水平。结果从0μg／L到20μg／L随着TNFα处理浓度的升高11β-HSD1表达增加，并呈剂量依赖效应。在10μg／L TNFα处理24h这一条件处理下，GR表达升高，糖异生水平升高，其相关基因PEPCK、G6Pase也表达升高；p—AKT，p-GSK水平降低，糖原合成水平降低。11β-HSD1特异性抑制剂BVT2733预处理HepG2细胞后逆转了上述TNFα的作用。结论在HepG2细胞中，11β-HSD1参与了TNFα诱导的胰岛素抵抗，其抑制剂可以显著提高胰岛素敏感性。
- 徐杰李国平唐蔚青满永王抒黎健
- 关键词：肿瘤坏死因子-Α糖皮质激素类胰岛素
- 部分炎症因子活化11β-HSD1参与非酒精性脂肪肝发生的研究进展被引量：3
- 2016年
- 非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）是指非过度饮酒及其它明确损肝因素所致的,以肝细胞内大量脂肪沉积为主要特征的,包含非酒精性脂肪肝以及由其发展来的非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪性肝硬化和肝细胞癌在内的一系列进展性疾病的统称。中国多个发达地区（北京、上海、香港等）流行病学研究发现：普通成人的NAFLD患病率已高达20%以上（[1-3]）,
- 徐杰李国平唐蔚青黎健
- 关键词：肿瘤坏死因子Α炎症因子
