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杨少辉: 作品数：10 被引量：86H指数：3; 供职机构：南开大学更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划河北省自然科学基金河北省科技攻关计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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一种高产促胰岛素激素的毕赤酵母工程菌及其构建方法: 本发明公开了一种高产促胰岛素激素毕赤酵母(Pichia pastoris)工程菌及其构建方法。本发明运用分子生物学技术先构建毕赤酵母(P.pastoris)表达载体pPIC9GLP－1，然后将其线性化后转化进入毕赤酵母G...; 李明刚侯建华方园园薄涛王翠艳杨少辉武志强闫瑞香; 文献传递

一种高产促胰岛素激素的毕赤酵母工程菌及其构建方法: 本发明公开了一种高产促胰岛素激素毕赤酵母(Pichia pastoris)工程菌及其构建方法。本发明运用分子生物学技术先构建毕赤酵母(P.pastoris)表达载体pPIC9GLP-1，然后将其线性化后转化进入毕赤酵母G...; 李明刚侯建华方园园薄涛王翠艳杨少辉武志强闫瑞香; 文献传递

拟南芥黑芥子酶基因根特异性表达启动子的克隆被引量：12: 2005年; 黑芥子酶是一类催化芥子油苷水解的同工酶, pyk10 是一个在拟南芥根和下胚轴中特异表达的黑芥子酶基因。本研究用PCR方法从拟南芥Columbia生态型基因组中克隆了pyk10 基因启动子片段。序列分析表明:该片段全长1 454 bp,与已发表的pyk10 启动子序列(GenBank accession no. AJ292756)同源性达98%。该启动子片段中含有多种其他植物基因启动子中发现的通用启动子元件,并含有器官和组织特异性转录因子的结合位点ACGT-、CANNTG-、GATA-以及I盒等顺式元件。; 李桂兰王文颇臧少先乔亚科杨少辉薄涛李明刚; 关键词：拟南芥启动子

治疗糖尿病的短肽药物GLP-1在毕赤酵母中的分泌表达被引量：1: 2006年; 利用毕赤酵母表达治疗糖尿病的短肽药物GLP-1(胰高血糖素样肽-1)。以pUC18GLP-1 为模板进行PCR,将获得的GLP-1基因片段克隆到pMD18T-vector上,然后将SmaI和NotI双酶切获得的基因小片段插入到表达载体pPIC9上,完成表达载体pPIC9GLP-1的构建,SacI线性化重组质粒,通过醋酸锂转化法转化毕赤酵母GS115感受态细胞,成功构建了能够分泌抗二肽酶Ⅳ降解的长效促胰岛素激素的毕赤酵母工程菌株。结果表明毕赤酵母6号菌株的GLP-1分泌表达产量最高可达 100．00 mg／L．实现了GLP-1在毕赤酵母中的表达,为进一步开发治疗糖尿病新型短肽药物的研究奠定了基础。; 侯建华王翠艳方园园杨少辉薄涛杨立泉于雷李明刚; 关键词：糖尿病胰高血糖素样肽-1 毕赤酵母短肽分泌表达

产人胰岛素毕赤酵母工程菌的构建被引量：3: 2006年; 根据人胰岛素的氨基酸序列和酵母偏爱的密码子,采用基因半合成技术合成人胰岛素基因.将合成的胰岛素基因克隆到pP IK 9质粒,构建了毕赤(P ich ia)酵母重组表达载体pP IN S319,用B g lⅡ线性化后用电转化法导入毕赤酵母G S ll5菌株,经过营养筛选和PCR复筛,得到含人胰岛素基因的毕赤酵母工程菌株.经SDS-PAGR和密度扫描分析表明,合成的人胰岛素基因能够在毕赤酵母中高效分泌性表达,表达量可达0.563 m g/mL,表达产物无需转肽过程,只经过胰蛋白酶和羧肽酶B简单处理即得到优质重组人胰岛素,其体内活力约为30 IU/m g.; 王隆飞方园园陈功博涛侯健华杨少辉李桂兰李欣李明刚; 关键词：人胰岛素基因毕赤酵母分泌性表达

农杆菌介导大豆子叶节遗传转化的研究被引量：30: 2005年; 直接以农杆菌转化系统为平台 ,以栽培大豆 (GlycinemaxL )吉林 35、中黄 2 8、南农、铁丰 2 9、铁丰 30和开育 12的子叶节为外植体 ,用LBA4 4 0 4农杆菌 (含pPC KSA质粒 )研究了影响大豆子叶节转化的因素。结果表明 ,大豆品种之间转化存在着差异 ,吉林 35转化率最高 ,平均转化率为 2 16 % ,单次最高转化率达 6 12 % ;中黄 2 8次之 ,平均转化率为1 9% ,单次最高转化率达 3 33% ;南农转化率为 1 0 5 % ;铁丰 2 9居第 4位 ,转化率为 0 95 % ;铁丰 30和开育 12无转化植株。用 4d苗龄的子叶节 ,农杆菌浸染 30min ,共培养 3d比较合适。萌发培养基和不定芽诱导培养基对转化率的影响存在交互作用 ,对于吉林 35来说 ,大豆萌发培养基 (G)和不定芽诱导培养基 (Y)的最佳组配方式为G2 +Y1(转化率 6 12 % )和G1+Y2组合 (转化率 5 2 6 % )。农杆菌介导的转化系统中 ,转化植株的筛选方式对转化率影响很大 ,筛选培养初期 ,采用比较低的筛选浓度 ,在继代培养过程中逐次提高筛选压力 ,可以获得较好的转化效果。; 李桂兰乔亚科河北科技师范学院杨少辉靳朝霞李明刚; 关键词：大豆根癌农杆菌子叶节

鸡溶菌酶A元件在大豆中对uidA基因瞬时表达的影响(英文): 2005年; 本研究将报告基因uidA(β-葡糖苷酶基因)两侧各含有一个鸡溶菌酶A元件(chiMAR)的中间表达载体pLM9与不含chiMAR的中间表达载体pLM5经农杆菌介导转化大豆,以研究chiMAR对外源uidA基因瞬时表达的影响.结果表明,在大豆品种科丰6号和冀豆12中,chiMAR均能显著提高uidA基因的瞬时表达率(p<0.01),并且chiMAR对不同品种中uidA基因瞬时表达率的影响不同;在科丰6号中,chiMAR对uidA基因的瞬时表达量没有显著影响,但能够降低uidA基因瞬时表达的个体差异度;chiMAR可以显著降低uidA基因在冀豆12中的瞬时表达量(p<0.01),同时提高uidA基因瞬时表达的个体差异度.; 杨少辉丁东风侯建华Ludmila Mlynárová李明刚; 关键词：大豆子叶节