王俊芳
- 作品数：12 被引量：22H指数：4
- 供职机构：新疆医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金新疆维吾尔自治区高校科研计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Em18.3重组蛋白的表达及其免疫诊断特性的研究被引量：7
- 2007年
- 目的:在大肠杆菌中表达和纯化截短的泡球蚴rEm18.3抗原重组蛋白,对其免疫诊断特性进行鉴定。方法:IPTG诱导pET41a-Em18.3原核表达质粒,表达和纯化rEm18.3-GST重组蛋白,SDS-PAGE电泳及West-ern blot法对其进行初步鉴定,ELISA法确定其免疫诊断特性。结果:rEm18.3-GST重组蛋白得到成功表达,SDS-PAGE电泳显示相对分子量为45kDa。Western blot结果表明,rEm18.3-GST重组蛋白能被AE病人阳性血清识别。对56例多房棘球蚴病(AE)、88例细粒棘球蚴病(CE)、24例其他寄生虫病、24例其他疾病和24例健康者共236份血清进行ELISA检测结果显示,对AE血清诊断的敏感性为10.7%,特异性为99.4%,阳性预测值85.7%,阴性预测值78.1%。结论:rEm18.3-GST免疫诊断价值较低,Em18抗原重要的表位可能位于1-40位氨基酸。
- 林仁勇张春桃温浩王俊芳王星王俨卢晓梅张静萍张琰无
- 关键词：泡球蚴免疫检测
- 泡球蚴Em18多克隆抗血清的制备和鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的:制备和鉴定泡球蚴Em18抗原的多克隆抗血清。方法:利用大肠杆菌BL21(DE3)表达重组质粒pET41a-Em18,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导、表达和纯化rEm18-GST蛋白,免疫BALB/c小鼠,制备鼠源抗Em18多克隆抗体,采用ELISA和Western blot法鉴定其特异性。结果:(1)SDS-PAGE检测表明,rEm18-GST蛋白得到成功表达,在相对分子量为50kDa处有表达条带。(2)纯化后获得高纯度的rEm18-GST蛋白。(3)ELISA结果表明,抗Em18抗血清的抗体滴度为1∶25600;Western blot结果表明抗Em18抗血清能与rEm18-GST蛋白发生特异性结合。结论:获得了特异性识别rEm18-GST蛋白的多克隆抗体,为进一步筛选Em18模拟抗原表位奠定基础。
- 王俊芳林仁勇张春桃王星王俨卢晓梅张琰张建龙温浩
- 关键词：泡球蚴
- 抗泡球蚴重组Em18抗原多克隆抗体的纯化与鉴定被引量：4
- 2007年
- 目的:制备抗泡球蚴18(Em18)抗原多克隆抗体,纯化并鉴定。方法:表达并纯化rEm18-GST蛋白。用纯化后的蛋白作为免疫原,免疫新西兰白兔获得抗rEm18-GST的多克隆抗体IgG,采用ELISA法检测抗体效价,进一步纯化抗体,获得抗Em18特异性多克隆抗体IgG,用Western blot及ELISA法检测并进行初步鉴定。结果:免疫制备获得兔抗rEm18-GST抗体,随着免疫次数的增加,抗体滴度不断升高,于第10周达到最高。ELISA检测抗体效价为1∶51200。Western blot及ELISA法鉴定表明Em18-GST抗体去除了与GST的交叉反应。结论:获得了去除与GST交叉反应的抗Em18多克隆抗体,为进行噬菌体肽库筛选奠定基础。
- 杨晨晨张蓓王俊芳张春桃王俨许晏王星张静萍张琰温浩林仁勇
- 关键词：泡球蚴多克隆抗体纯化
- 应用噬菌体7肽库筛选泡球蚴Em18抗原模拟表位的初步研究被引量：2
- 2007年
- 目的:从噬菌体7肽库中筛选泡球蚴Em18抗原模拟表位,为研究和开发新的包虫病诊断抗原提供实验依据。方法:用纯化后的rEm18-GST免疫新西兰白兔,获得抗rEm18-GST的多克隆抗体,进一步纯化,获得抗Em18多克隆抗体IgG,以之作为靶分子,免疫筛选噬菌体随机7肽库。经过5轮的淘筛过程,随机挑取9个蓝色噬菌斑扩增,核苷酸序列测定分析并与Em18进行同源性比较。结果:经5轮筛选后,阳性克隆得到富集,9个噬菌体克隆的氨基酸序列与Em18无同源性。结论:所得肽段可能是Em18抗原模拟表位。
- 张蓓杨晨晨林仁勇王俊芳张春桃王俨卢晓梅张静萍张琰许晏温浩
- 关键词：噬菌体肽库模拟表位
- 泡球蚴Em18重组蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化方法的优化被引量：3
- 2007年
- 目的:筛选和优化泡球蚴Em18重组蛋白在大肠杆菌中表达和纯化的方法,为进一步筛选Em18抗原表位奠定基础。方法:原核表达pET41a-Em18重组质粒,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导、表达,获得rEm18-GST蛋白,采用不同的超声程序破碎大肠杆菌细胞,分别采用GST柱、His柱及两者结合方法,改变不同的平衡、洗涤和洗脱缓冲液浓度,纯化rEm18-GST蛋白。结果:(1)rEm18-GST蛋白在相对分子质量为50kDa处有表达条带,蛋白表达量随诱导时间的延长而增加;(2)超声程序为工作1s,间歇3s,每个循环时程10min,加入蛋白酶抑制剂,可降低目的蛋白的降解;(3)采用单纯His柱可获得回收量高、纯度高的rEm18-GST蛋白。结论:(1)对含有GST-tag和His-tag双重标签重组蛋白的纯化,应用His柱更有效,更经济;(2)建立和优化一套从大肠杆菌细胞中分离纯化重组Em18蛋白的有效方法。
- 王俊芳王星张春桃王俨林仁勇卢晓梅张琰张建龙温浩
- 3种截短的泡球蚴Em18基因原核表达质粒的构建、表达及鉴定被引量：6
- 2006年
- 目的构建3种截短的泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的3种重组蛋白,并对其进行初步鉴定。方法DNAman软件设计引物,PCR法扩增并构建3种截短的pET41a-Em18.1、Em18.2和Em18.3原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性;IPTG诱导、表达和纯化rEm18.1-GST、rEm18.2-GST和rEm18.3-GST重组蛋白,SDS-PAGE电泳及Western blot进行初步鉴定。结果成功构建了3种截短的pET41a-Em18.1、Em18.2和Em18.3重组表达质粒;SDS-PAGE检测表明rEm18.1-GST、rEm18.2-GST、rEm18.3-GST重组蛋白得到成功表达,在分子质量单位为41、45.5和45.5ku处有表达条带;Western blot显示3种重组蛋白均能被AE病人血清识别。结论成功构建了截短的pET41a-Em18.1、pET41a-Em18.2和pET41a-Em18.3原核表达质粒,表达的3种重组蛋白均具有良好的抗原性,为Em18抗原表位分析奠定了基础。
- 张春桃林仁勇王俊芳王星王俨卢晓梅张静萍张琰张彤温浩
- 关键词：泡球蚴免疫检测
- Gq/11蛋白在ARDS时大鼠肺损伤中的动态变化被引量：4
- 2005年
- 目的研究急性呼吸窘迫综合征(ARDS)时大鼠肺Gq/11蛋白的动态变化。方法采用尾静脉注射油酸法复制大鼠ARDS模型,并将其分为对照组(C组)和油酸组(OA组),又根据不同时限将其分为30min、60min、90min和120min4个亚组;紫外法测定血管紧张肽转化酶(ACE)活性,免疫印迹法检测各组大鼠肺组织中的Gq/11蛋白含量。结果OA各组随时间延长Gq/11蛋白含量较C组分别高(19.24±2.38)%、(35.12±2.01)%、(43.93±1.62)%、(48.63±1.88)%(P<0.01),OA组除了30min组其它各组血浆及肺组织的ACE活性显著低于C组,并随着时间延长而更低(P<0.01)。结论Gq/11蛋白的表达上调在ARDS肺损伤中可能占有一定地位,并参与ARDS的发生发展。
- 克拉拉.阿巴斯刘春喜艾努尔.加力力马琪夏米西努尔.伊力克王俊芳张丽李士勇刘新军
- 关键词：G蛋白信号转导呼吸窘迫综合征
- 截短的泡球蚴Em18基因原核表达质粒的构建、表达及鉴定被引量：5
- 2006年
- 目的:构建截短的泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的重组蛋白,并对其进行初步鉴定。方法:DNAman软件设计引物,PCR法扩增并构建截短的pET41a-Em18．1原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性。异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导、表达和纯化rEm18．1-GST重组蛋白,采用SDS-PAGE 电泳及Western免疫印迹法对其进行初步鉴定。结果:成功构建出截短的pET41a-Em18．1,SDS-PAGE检测表明rEm18．1-GST重组蛋白得到成功表达,在相对分子量为41 kDa处有表达条带。Western blot结果显示 rEm18．1-GST重组蛋白能被AE病人阳性血清识别。结论:截短的pET41a-Em18．1原核表达质粒表达的 rEm18．1-GST重组蛋白具有良好的抗原性,为Em18抗原表位的分析奠定基础。
- 张春桃林仁勇王俊芳王星王俨卢晓梅张静萍张琰张彤温浩
- 关键词：泡球蚴重组蛋白
- 泡球蚴Em18重组蛋白的诱导表达、纯化和多克隆抗血清的制备和鉴定
- 目的：诱导泡球蚴Em18重组蛋白在大肠杆菌中的表达，优化Em18重组蛋白的纯化方法，将纯化的重组蛋白作为抗原，制备泡球蚴Em18抗原的多克隆抗血清，为进一步运用噬菌体表面抗原展示技术，筛选Em18抗原表位奠定基础。方法：...
- 王俊芳
- 文献传递
- 两种克隆方法在3种截短的泡球蚴Em18原核表达载体构建中的比较
- 2006年
- 目的比较3种截短的泡球蚴Em18基因聚合酶链反应(PCR)扩增产物经TA克隆和直接酶切2种方法,在原核表达质粒构建中的运用。方法PCR扩增带有EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的3种截短的泡球蚴Em18基因,经2种方法构建3种截短的Em18原核表达质粒：①PCR扩增产物与T载体连接构建T-Em18,重组质粒经EcoRⅠ/XhoⅠ酶切,电泳分离、纯化目的片段,再与经过EcoRⅠ/XhoⅠ酶切的原核表达载体pET41a(+)连接；②PCR扩增产物经EcoRⅠ和XhoⅠ酶切,电泳、纯化,直接与经过相同限制性内切酶酶切的pET41a(+)连接。结果先经TA克隆,再经酶切构建3种截短的泡球蚴Em18原核表达载体获得成功。而采用直接酶切PCR扩增产物的构建方法未获得成功。结论TA克隆可用于对直接酶切效果不好的PCR扩增片段与表达载体的连接构建,方法简便高效,可提高带有限制性酶切位点的PCR扩增片段克隆人原核表达载体的效率。
- 张春桃王俊芳林仁勇张彤王星卢晓梅王俨张琰温浩
- 关键词：克隆分子DNA质粒
