王爱娥
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中国人民解放军第二炮兵总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 癌胚抗原在结直肠癌早期诊断和预后评估中的意义及其最新研究进展被引量：4
- 2004年
- 目的:癌胚抗原是目前研究最广泛的一种肿瘤标志物,该抗原分子结构复杂、理化性质及抗原表位多样。探讨癌胚抗原在癌症发生、发展、肿瘤的导向治疗和重组疫苗研制等方面重要进展及其在结直肠癌预后中的价值。资料来源:应用计算机检索NCBIEntrezPubMed1980-01/2004-05期间相关癌胚抗原的文章,检索词“carcinoembryonicantigenandcoloncancer,并限定文章语言种类为英语。计算机检索《中国临床康复》杂志1990-01/2004-05期间相关癌胚抗原的文章,限定文章语言种类为中文,检索词“癌胚抗原结直肠癌诊断”。资料选择:对资料进行初审,纳入标准:①癌胚抗原分子结构、功能性表位分析。②癌胚抗原基因工程和单链抗体工程与结直肠癌。③结直肠癌诊治中靶向癌胚抗原的重组疫苗、重组单链抗体。开始查找全文,所查文献为RCT研究类文章,未排除是否盲法。资料提炼:共收集到56篇相关文献,含追溯法查找文献11篇。36篇文献符合纳入标准。排除的20篇文章中14篇系重复研究,6篇为Meta分析研究。资料综合:36篇文献中10篇对癌胚抗原的分子结构和表位特点加以分析,4篇涉及功能性表位的真核表达。11篇发现并从不同角度阐述癌胚抗原的粘附分子功能及其在结直肠癌发生发展过程中的重要作用。4篇的研究结果表明癌胚抗原单链抗体及重组?
- 王爱娥董书魁王清娟李雪丽
- 关键词：癌胚抗原表位细胞粘附分子结直肠肿瘤
- NANOGP8基因在肺癌细胞系中甲基化水平与表达研究
- 2014年
- 目的:研究NANOGP8基因在肺癌细胞系A549中启动子区域甲基化水平及其与基因表达的相关性。方法:利用MethPrimer甲基化岛预测和甲基化引物设计软件,预测NANOGP8启动子区甲基化位点。分别从人成纤维细胞系和肺癌细胞系中提取基因组DNA,经过亚硫酸氢钠处理后,用针对甲基化位点设计的引物进行PCR扩增,获得相应区段DNA后,连接到pGEM-T载体,转化大肠杆菌鉴定阳性克隆后,测序并与GenBank数据库中NANOGP8基因组DNA序列比对,获得其甲基化水平数据。分别提取两个细胞系的总RNA,RT-PCR获得相应cDNA进行PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后,经酶切和测序验证,获取其表达水平数据。结果:成功预测NANOGP8的两个区域有甲基化位点,并检测到人成纤维细胞系和肺癌A549细胞系中NANOGP8启动子甲基化水平分别为59.7%和12.5%,表达检测结果显示在A549细胞系中检测到NANOGP8的基因片段,而在人成纤维细胞系中没有扩增到相应产物。结论:在正常成体细胞中NANOGP8基因由于启动子的高度甲基化而沉默,而在肺癌细胞系中NANOGP8基因启动子去甲基化激活其表达。NANOGP8基因的表达与其启动子区域去甲基化密切相关,同时NANOGP8在肺癌细胞分化过程中发挥重要作用。
- 王爱娥王英李朝霞宋云熙王东霞甘乐文马建新常艳张睢扬江小霞
- 关键词：甲基化
- 氯霉素抗性融合蛋白报告系统的建立与验证被引量：1
- 2005年
- 利用氯霉素乙酰基转移酶(CAT)N端融合了可溶性蛋白细胞所表现出的氯霉素抗性高于不溶性蛋白这一特点,建立了一种能在大肠杆菌中方便地检测到目的蛋白可溶性的报告系统。以pMalp2X高效表达载体为基础,采用PCR法扩增CAT基因,并通过引物向CAT中引入所需的多克隆位点、终止密码子及linker,将扩增得到的CAT片段插入到pMalp2X中,构建pCAR报道质粒并作测序鉴定;PCR分别扩增IGF1、IL3、Trx基因,连接到pCAR载体上,导入大肠杆菌原核表达系统中进行诱导表达,SDSPAGE分析、氯霉素抗性试验对表达目的蛋白的可溶性和表现出的氯霉素抗性的相关性加以验证。结果显示用该载体表达的重组蛋白的可溶性与氯霉素抗性具有很强的相关性。本报告系统能通过直观的平板氯霉素抗性高低正确指示位于CATN端的目的蛋白的可溶性,为其在生物工程和蛋白质构象相关疾病研究等领域的应用打下了基础。
- 王爱娥张睢扬董书魁梅开城马建新王东霞王英
- 关键词：蛋白质折叠可溶性原核表达
- 一种亨廷顿舞蹈症体外药物筛选细胞模型的建立
- 2006年
- 为建立以多聚谷氨酰胺(polyQ)为靶点的亨廷顿舞蹈症体外药物筛选细胞模型,以随机引物PCR法克隆了不同长度的CAG片段,经序列测定正确后,分别融合到已经建立的氯霉素抗性融合蛋白表达系统pCAR中CAT的N端。重组质粒转化大肠杆菌,并在其中诱导表达,SDS-PAGE和氯霉素抗性平板试验对目的蛋白可溶性与氯霉素活性进行测定。结果显示长度在40以上的polyQ为不溶性包涵体表达,表现为低水平的氯霉素抗性,40以下的polyQ则以可溶形式表达,表现为高水平氯霉素抗性,从而建立起能够模拟亨廷顿舞蹈症病理过程的体外细胞模型。通过检测模型细胞的氯霉素抗性,可以定性、定量地反映polyQ在体内的折叠状态和可溶性,故可以借助该模型对促溶药物或生物活性物质进行高通量筛选,为亨廷顿舞蹈症预防、诊断、治疗提供了新思路。
- 王爱娥张睢扬于新荣王东霞王英马建新梅开城闫春莲
- 关键词：蛋白溶解性细胞模型
- 人NANOGP8蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：4
- 2009年
- 为获得抗人NANOGP8基因的多克隆抗体,采用PCR法扩增了NANOGP8基因,经序列测定正确后,连接到pET-28a质粒上,将获得的重组质粒pET-28a-NANOGP8转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在16℃和37℃下分别进行诱导表达,经SDS-PAGE检测发现融合蛋白以包涵体形式存在于37℃诱导表达的沉淀中,大小约为45kDa。对包涵体进行洗涤、溶解处理,经ChelatingSepharoseFastFlow亲和层析柱进行纯化。对纯化得到的蛋白进行SDS-PAGE及Westernblot免疫印记杂交检测,得到了单一条带。用获得的高纯度融合蛋白免疫新西兰兔,得到兔来源的抗人NANOGP8血清。对抗血清进行蛋白免疫印记杂交反应和酶联免疫吸附反应检测,结果显示成功制备了高滴度和特异性的兔抗人NANOGP8多克隆抗体,与市售抗人Nanog多克隆抗体相比,杂交更迅速,效果更明显。为进一步研究NANOGP8基因在肿瘤发生、发展中的作用奠定了基础。
- 张经余王爱娥李美香戴建武
- 关键词：多克隆抗体
