王金勇
- 作品数：21 被引量：45H指数：5
- 供职机构：浙江大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 重组鸡白细胞介素2的诱导表达与生物学活性测定被引量：12
- 2005年
- 将去除信号肽的鸡IL-2基因编码框克隆到原核表达载体pBAD/HisB,实现了重组鸡IL-2(rchIL-2)蛋白在大肠杆菌中的高效表达。SDS-PAGE分析显示,表达蛋白的分子量约为18kD。用rchIL-2为抗原制备了单克隆抗体和多克隆抗体,建立了检测rchIL-2含量的抗原捕获ELISA,探讨了天然chIL-2蛋白的体外表达动力学。非变性条件下纯化的rchIL-2(0.4ng)对ConA活化的鸡T淋巴细胞具有明显的增殖活性,而对鸭及鹅的T淋巴细胞无增殖活性。抗chIL-2多克隆抗体可完全中和rchIL-2和天然chIL-2蛋白的生物学活性,而单克隆抗体无中和rchIL-2和天然chIL-2蛋白生物学活性的功能。这些研究结果证实,大肠杆菌表达的rchIL-2及其多克隆抗体拥有生物学功能,而获得的单克隆抗体不具有chIL-2的中和特性。
- 陈吉刚陈维虎周继勇王金勇齐静郑肖娟俞照正孙红霞
- 关键词：生物学活性单克隆抗体多克隆抗体淋巴因子
- 鸭白细胞介素2及其受体alpha的研究
- 王金勇
- 关键词：复性淋巴细胞增殖佐剂效应流式细胞分析
- 鸭白细胞介素2全基因组结构分析
- 2008年
- 依据鸡白细胞介素2(chIL-2)全基因组序列设计引物探针,以简易基因组抽提法获得的鸭外周血单核细胞基因组DNA为模板,用长距离聚合酶链式反应(LD-PCR)扩增出鸭白细胞介素2(duIL-2)全基因片段。经序列测定,得到的duIL-2基因组DNA序列全长为3528bp。运用生物信息学方法对duIL-2的基因、启动子结构和cDNA序列编码的成熟蛋白进行系统分析,结果表明,duIL-2基因具有典型的4个外显子和3个内含子结构,和已知禽类及哺乳类同系物基因总体结构具有明显的相似性。鸭和鸡及其他哺乳动物IL-2基因的启动子序列具有显著的保守性,都具有AP-1、NF-AT、CD28RE、OCT、TATAbox转录起始因子结合位点和预测的转录起始位点。duIL-2cDNA序列编码的成熟蛋白进化分析表明,鸭和鹅的亲缘关系最近,和哺乳动物的亲缘关系较远,显示出明显的种属差异。
- 王金勇齐静方杰颜焰申会刚周继勇
- 关键词：启动子进化分析
- 重组chBJS<Sup>TWO</Sup>蛋白的制备方法
- 本发明公开了一种重组chBJS<Sup>TWO</Sup>蛋白的制备方法。RT-PCR扩增的不同品系鸡BJS<Sup>TWO</Sup>的cDNA片段与原核表达载体pBAD/His B、真核表达载体pMETαA和真核表达...
- 周继勇陈吉刚王金勇吴建祥
- 文献传递
- 鸡白细胞介素-2基因在Pichia methanolica酵母中的表达被引量：5
- 2003年
- 鸡白细胞介素-2(chIL-2)是近年来新发现的一种禽类细胞因子.为建立用甲醇型酵母Pichiamethanolica(P.methanolica)表达鸡白细胞介素-2基因(chIL-2)的新途径,将chIL-2基因插入到P.methanolica分泌型表达载体pMETαA构建了重组PMAD11表达菌株(pMETαA/rchIL-2).经SDS-PAGE、Western印迹测定,证实chIL-2基因在P.methanolica中表达成功,rchIL-2的分子量约为16kDa,其表达量占分泌总蛋白的35%.
- 周继勇陈吉刚王金勇张德勇郑肖娟
- 关键词：基因表达细胞因子
- 鸭的类似鸡白细胞介素2基因的克隆及遗传进化分析被引量：13
- 2003年
- 通过 RT- PCR和 DNA测序技术 ,克隆和测定了绍兴麻鸭的一种类似鸡白细胞介素 2 ( IL- 2 )基因的核苷酸序列 ,并构建了该基因编码蛋白的三维结构分子模型。结果显示 ,绍兴麻鸭的类似于鸡 IL - 2基因的核苷酸长度由 74 8个碱基组成 ,编码产物为由 14 0个氨基酸残基组成的多肽 ,编码产物中含有 2 1个氨基酸残基组成的信号肽。绍兴麻鸭的类似于鸡 IL- 2基因的核苷酸及编码产物 ,与鸡和火鸡 IL- 2的一致性分别为 71.4 %～ 72 .1%和 5 5 .0 %～ 5 7.9% ,与哺乳类等动物 IL- 2的一致性分别为 2 2 .1%～ 2 8.8%和 14 .3%～ 17.1%。对绍兴麻鸭的类似于鸡 IL- 2基因蛋白编码产物的系统进化树分析表明 ,其编码产物与鸡和火鸡 IL- 2具有较远的亲缘关系。绍兴麻鸭的类似于鸡 IL- 2基因编码产物的三维结构 ,预测由 4个α-螺旋结构和 2个β折叠组成。这些研究结果预示 ,鸭的类似于鸡 IL - 2基因编码产物 ,在生物学功能上与哺乳动物和其他禽类具有很大的差异。
- 王金勇周继勇陈吉刚张中华腾巧泱
- 关键词：基因克隆遗传进化RT-PCR免疫调节因子
- 家禽细胞因子研究概况
- 近年来,分子生物学新理论、新技术的不断发展,推动了免疫学的发展,禽类许多如,IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18和IFN等细胞因子被发现和研究。...
- 周继勇陈吉刚王金勇滕巧泱黄振宇顾建友
- 文献传递
- 鸭白介素－2受体α链胞外区蛋白单克隆抗体及其制备方法
- 鸭白介素－2受体α链(duCD25)胞外区蛋白单克隆抗体及其制备方法，根据公布的鸡白介素－2受体α链cDNA，同源克隆duCD25cDNA，并对其编码胞外区蛋白的核苷酸片段扩增，扩增产物连接载体构建重组表达质粒，转化大肠...
- 周继勇王金勇方杰
- 文献传递
- 抗鸭IL-2单克隆抗体的制备与鉴定被引量：8
- 2004年
- 用纯化的重组鸭IL-2蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,对杂交瘤细胞进行筛选,阳性孔经三次有限稀释法克隆,成功获得5株能稳定传代并分泌抗鸭IL-2单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞,分别命名为:1H4、2B3、4G12、5F6、5H6,其中一株对鸡IL-2具有交叉反应性.各单克隆抗体腹水间接ELISA效价在1∶32000～1∶512000之间,抗体类型除mAb5H6为IgG2a亚类外,其余4株mAb均为IgG1亚类,5株mAb的轻链都为κ链.经Western-blot分析表明,所获得的5株抗鸭IL-2单克隆抗体与鸭IL-2具有反应性,推测它们是针对序列决定簇的.
- 龚辉吴建祥王金勇陈吉刚周继勇
- 关键词：IL-2单克隆抗体杂交瘤细胞脾细胞骨髓瘤细胞白细胞介素-2
- 重组鹅白细胞介素－2蛋白的制备方法及其用途
- 本发明公开了一种重组鹅白细胞介素-2(gsIL-2)蛋白的制备方法及其用途。RT-PCR扩增的浙东白鹅白细胞介素-2的DNA片段与原核表达载体pBAD/HisB、真核表达载体pMETαB和pMETB构建表达质粒pBAD/...
- 周继勇陈吉刚王金勇腾巧泱吴建祥
- 文献传递
