苗庆芳
- 作品数：45 被引量：60H指数：5
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- HER3与肿瘤及肿瘤耐药的关系研究进展被引量：1
- 2017年
- 表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）家族属于受体酪氨酸激酶,包括4种I型跨膜受体：EGFR（HER1）、HER2（Neu,ERBB2）、HER3（ERBB3）和HER4（ERBB4）。这些受体均包含细胞外区、跨膜区和胞内区3个部分,其中细胞外区包含4个结构域,胞内区包含1个用来信号传导的细胞内酪氨酸激酶结构域和1个位于胞浆内的带有酪氨酸磷酸化残基的尾部。
- 单传坤苗庆芳
- 关键词：胞外结构域酪氨酸磷酸化细胞信号传导胞内区受体酪氨酸激酶
- 抗表皮生长因子受体噬菌体抗体库的构建筛选及单链抗体可溶性表达被引量：13
- 2009年
- 近年来的研究表明,表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是肿瘤治疗中一个很重要的靶点。本研究应用噬菌体展示技术筛选EGFR特异性单链抗体(single chainF v,scFv)。利用高表达EGFR的人鳞状上皮癌细胞A431免疫小鼠,提取脾细胞mRNA,RT-PCR扩增VH和VL基因并拼装成scFv基因。将scFv基因连接到噬菌粒pCANTAB 5E中,电击转化E.coli TG1细胞,构建了库容为2.5×107的噬菌体单链抗体库。用纯化的EGFR为靶抗原对噬菌体抗体库进行5轮富集筛选,得到次级抗体库6F-10。挑取48个克隆进行ELISA测定,45个克隆为阳性。取阳性值最高的克隆感染E.coli HB2151,IPTG诱导scFv的表达。scFv(约27kD)以可溶形式存在于细胞质及细胞周质中,并可分泌至上清液。测序结果表明,scFv基因序列全长768bp,编码256个氨基酸。VH为与小鼠Ig同源的重链可变区基因,VL为κ型轻链可变区基因;VH和VL均由3个抗原互补决定区和4个框架区构成。免疫印迹和细胞免疫荧光显示,可溶性scFv可分别与纯化的EGFR抗原以及细胞表面的EGFR发生特异性结合。抗EGFR特异性scFv的获得,为研制靶向EGFR的抗体药物与研究生物治疗提供导向载体分子。
- 盛唯瑾苗庆芳甄永苏
- 关键词：表皮生长因子受体噬菌体抗体库单链抗体可溶性表达
- 靶向CD123的重组白细胞介素-3-力达霉素融合蛋白对白血病M07e细胞的杀伤机制被引量：1
- 2013年
- 目的 研究白细胞介素-3-力达霉素（IL-3-LDM）融合蛋白靶向杀伤CD＋123 肿瘤细胞的作用机制。方法 用CCK-8检测IL-3-LDM融合蛋白靶向杀伤人类原巨核细胞白血病MO7e细胞的作用，用IC20浓度的IL-3-LDM及LDM分别与MO7e靶细胞培养后，利用AnnexinV-FITC及碘化丙啶（PI）染色经流式细胞分选术检测分析细胞凋亡率和周期分布变化。结果 LDM、IL-3-LDM对MO7e细胞的IC50分别为116、50 pmol／L。经IC20浓度的IL-3-LDM（12 pmol／L）融合蛋白与LDM（30 pmol／L）分别处理MO7e细胞后，在24、48、72 h分别检测到细胞凋亡率呈逐渐上升趋势（IL-3-LDM组分别为26.1 %、59.3 %和62.1 %，LDM组分别为34.4 %、43.3 %和55.2 %），且细胞在处理48和72 h后出现明显的G2／M期阻滞现象，与没有靶向的LDM药物作用机制一致。结论 IL-3-LDM融合蛋白作用机制与LDM一致，通过引起细胞G2／M期阻滞导致细胞凋亡进而死亡，证明IL-3靶向作用及其携带的高效药物LDM杀伤作用的有效性。
- 张砚君李真真胡蕴慧袁向飞范冬梅齐怀丰高雪孙长海苗庆芳甄永苏
- 关键词：重组融合蛋白质类力达霉素白细胞介素-3白血病
- 抗EGFR单链抗体与力达霉素强化融合蛋白的构建及其抗肿瘤活性研究
- 目的:利用噬菌体展示技术构建单链抗体库,筛选EGFR高亲和力单链抗体。利用基因重组技术构建表达单链抗体与力达霉素辅基蛋白的融合蛋白EGFR(scFv-LDP),与力达霉素发色团组装生成强化融合蛋白EGFR(scFv-LD...
- 盛唯瑾苗庆芳商悦甄永苏
- 文献传递
- 抗表皮生长因子受体的单链抗体ER(Fv)的构建及其抗肿瘤活性研究被引量：6
- 2011年
- 目的利用大肠杆菌表达抗表皮生长因子受体(EGFR)的单链抗体并对其抗肿瘤活性进行研究。方法构建含有抗EGFR单链抗体基因片段的重组质粒,IPTG诱导大肠杆菌表达单链抗体ER(Fv),用Ni离子亲和柱纯化单链抗体。ELISA测定ER(Fv)与纯EGFR抗原的结合能力;流式细胞术分析ER(Fv)与肿瘤细胞的结合;MTT法检测ER(Fv)对肿瘤细胞体外增殖的影响;动物试验测定ER(Fv)的体内抑瘤效果。结果应用基因工程菌表达带有组氨酸标签肽(His-tag)的单链抗体ER(Fv),相对分子质量约为27×103,主要以包涵体形式存在,收获量约为10 mg.L-1。ELISA测定ER(Fv)与纯EGFR抗原的亲和常数为4.0×107 L.mol-1。单链抗体能与肿瘤细胞表面的EGFR发生特异性结合,其与3种EGFR高表达肿瘤细胞的解离常数皆为10-7 mol.L-1。细胞增殖实验显示,单链抗体可抑制EGFR高表达肿瘤细胞的增殖。体内抑瘤实验表明,单链抗体对人鳞状上皮癌A431裸鼠移植瘤具有中度的生长抑制作用,5,10和20 mg.kg-1 3个剂量组35 d的抑瘤率分别为43.9%、46.7%和54.8%,与对照组相比存在显著差异。结论成功地表达了抗EGFR单链抗体ER(Fv),其对肿瘤细胞具有良好的亲和力和一定的生长抑制作用,为研制靶向EGFR的抗体药物提供基础。
- 盛唯瑾尚伯杨苗庆芳甄永苏
- 关键词：表皮生长因子受体单链抗体抗肿瘤
- 靶向EGFR的单链抗体－力达霉素融合蛋白ER(Fv－LDP)
- 本发明涉及一种融合蛋白ER(Fv－LDP)及其强化融合蛋白ER(Fv－LDP－AE)，融合蛋白是由抗EGFR单链抗体scFv、力达霉素辅基蛋白LDP和羧基端的组氨酸六聚体尾组成的，基因全长1089bp，编码363个氨基酸...
- 盛唯瑾甄永苏苗庆芳商悦赵春燕李毅
- 文献传递
- 抗Ⅳ型胶原酶单链抗体scFv (3G11)联合顺铂的抗肿瘤活性被引量：3
- 2008年
- 目的研究抗Ⅳ胶原酶基因工程单链抗体scFv (3G11)联合顺铂的抗肿瘤效果。方法明胶酶谱法、Western-blot法研究顺铂对肿瘤细胞分泌Ⅳ胶原酶蛋白的影响,MTT法、实验动物肿瘤模型研究scFv (3G11)与顺铂联合在体外和体内试验中的抗肿瘤效果。结果顺铂可抑制肿瘤细胞分泌的Ⅳ胶原酶活性,scFv (3G11)与顺铂联合在体外试验中可抑制人肝癌BEL-7402细胞的生长,体内试验中对小鼠移植性肝癌H22有显著的抑制作用,药物相互作用指数(CDI值)<1。结论scFv (3G11)和顺铂联合应用对肝癌的治疗有协同作用。
- 苗庆芳尚伯杨甄永苏
- 关键词：顺铂
- 细胞穿透肽(Arg)<Sub>9</Sub>与力达霉素融合蛋白(Arg)<Sub>9</Sub>-LDP
- 本发明涉及一种融合蛋白(Arg)<Sub>9</Sub>-LDP及其强化融合蛋白(Arg)<Sub>9</Sub>-LDP-AE，所说融合蛋白系由细胞穿透肽(Arg)<Sub>9</Sub>、力达霉素辅基蛋白LDP和羧基...
- 茹琴甄永苏尚伯杨郑艳波苗庆芳
- 文献传递
- 治疗性抗体的市场考量和靶点分析
- 2014年
- 近年来，单抗药物因其独特的分子靶向性和良好的临床疗效成为全球研发的热点，治疗性抗体成为产业界及学术界合作研发的令人振奋的领域。目前，在美国和欧盟有约33种市场在售和约30种处于临床III期的治疗性抗体药物，主要用于肿瘤、炎症和自身免疫病及其他一些疾病的治疗。主要对近几年单抗药物的市场状况及治疗靶点进行了概述。
- 苗庆芳邵荣光
- 关键词：治疗性抗体靶点抗体药物自身免疫病靶向性
- 靶向表皮生长因子受体的寡肽与力达霉素强化融合蛋白的构建及其抗肿瘤活性被引量：2
- 2009年
- 背景与目的:表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)在多种肿瘤细胞表面异常表达。力达霉素是从链霉菌中分离得到的具有强抗肿瘤作用的烯二炔类抗生素。本研究的目的是制备一种特异性靶向EGFR的寡肽配体与力达霉素的强化融合蛋白(Ec-LDP-AE),并初步探讨其抗肿瘤活性。方法:制备融合蛋白(Ec-LDP),并分离纯化,用高效液相色谱法检测Ec-LDP的纯度,ELISA、流式细胞技术以及细胞免疫荧光方法分析纯化的Ec-LDP蛋白对不同肿瘤细胞的免疫结合活性。将纯化的Ec-LDP蛋白与力达霉素发色团进行组装,构建Ec-LDP-AE,用高效液相色谱法检测350nm处的吸收峰,MTT法检测Ec-LDP-AE的体外抗肿瘤活性。结果:成功构建并表达了Ec-LDP蛋白,目的蛋白分泌至大肠杆菌周质腔中,产量为每升发酵液18mg活性蛋白,其纯度为95.3%。ELISA和细胞流式检测结果均显示Ec-LDP蛋白对EGFR高表达的肿瘤细胞系A431和MCF-7都有很强的免疫结合活性,而对不表达EGFR的NIH3T3细胞则无结合活性。免疫荧光实验也证实Ec-LDP蛋白可与A431细胞膜受体结合。Ec-LDP-AE蛋白在350nm波长处出现特定吸收峰,表明其构建成功。MTT法检测结果显示Ec-LDP-AE对体外培养的肿瘤细胞有强烈的杀伤作用,对MCF-7和A431细胞的IC50值分别为3.06×10-11mol/L和9.38×10-13mol/L。结论:本研究制备的强化融合蛋白Ec-LDP-AE对表皮生长因子受体有靶向作用,并且保留了力达霉素的强烈细胞毒作用。
- 郭晓芳钟根深苗庆芳甄永苏
- 关键词：表皮生长因子受体融合蛋白靶向作用力达霉素抗瘤活性
