薛莹
- 作品数：93 被引量：324H指数：11
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划军队科研计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学一般工业技术更多>>
- 结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B-ESAT6的融合表达及纯化被引量：12
- 2004年
- 目的 融合表达结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B ESAT6 ,为结核病的预防提供有效亚单位疫苗。方法 设计含不同酶切位点的Ag85B和ESAT6引物 ,采用聚合酶链反应 (polymerasechainreaction ,PCR)的方法从结核分枝杆菌毒株H3 7Rv DNA中分别扩增出相应大小的DNA片段 ,将片段分别与PGEM T easy载体连接测序。将测序正确的Ag85B和ESAT6按照不同的酶切位点克隆入PPROEXHT表达载体 ,挑选出阳性克隆 ,将诱导的表达产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分析 ,同时与含6个组氨酸 (histidine 6×his)的单克隆抗体 (monoclonalantibody ,mAb)进行固定化蛋白质免疫学测定(Western blot) ,将用含Ni+鳌合剂的Ni NTA亲合柱纯化的表达产物免疫小鼠 ,用结核分枝杆菌培养上清滤液蛋白 (culturefiltrateproteins ,CFP)作为抗原 ,酶联免疫吸附试验 (enzyme linkedimmunosorbentassay ,ELISA)测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度。结果 PCR获得的Ag85B和ESAT6序列与基因文库 (GenBank)报道的完全一致。两者在大肠杆菌DH5α株中融合表达的产物约为 370 0 0 ,与预计大小相吻合。Western blot结果显示 ,在相对分子量约 370 0 0处有表达产物与 6×hismAb特异性结合带。表达产物为包涵体 ,通过Ni NTA纯化系统 ,可得到纯化的目的蛋白。
- 师长宏范雄林徐志凯李元柏银兰薛莹
- 关键词：结核分枝杆菌纯化结核病
- 结核分枝杆菌Rpf样蛋白生物学及免疫学活性的研究
- 结核病/(Tuberculosis,TB/)是由结核分枝杆菌/(Mycobacterium tuberculosis,MTB/)引起的以呼吸道传播为主的慢性传染性疾病。近年来,由于卡介苗/(BCG/)保护性的不完善、MT...
- 薛莹
- 关键词：结核分枝杆菌结核病疫苗免疫
- 文献传递
- 结核分枝杆菌esat6-cfp10融合基因疫苗的构建及表达被引量：5
- 2005年
- 目的:构建结核分枝杆菌esat6 cfp10融合基因疫苗 并对其在体外进行表达.方法:用PCR技术从MTB毒株 H37Rv基因组DNA中扩增cfp10基因,以HindⅢ和EcoRⅠ双 酶切后克隆入含esat6基因的pGEM 7zf(+)载体中,将测序 正确的esat6 cfp10融合基因按照BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点 亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),重组质粒酶切鉴定 正确后以脂质体转染CHO细胞,分别以RT PCR方法检测 mRNA表达和间接免疫荧光技术检测目的蛋白的表达. 结果:PCR获得的cfp10基因序列与文献报道一致,大小约为 350bp.重组真核表达质粒酶切后可获得约630bp的融合 esat6 cfp10基因片段.RT PCR可获得大小约为350bp的 cfp10基因,间接免疫荧光检测后表达有Esat6 Cfp10蛋白的阳 性细胞着染.结论:成功克隆结核分枝杆菌cfp10基因,构建 了融合有esat6 cfp10基因的真核表达质粒并对其在体外进行 了表达.
- 张海师长宏薛莹姜泓高雪柏银兰王丽梅徐志凯
- 关键词：结核分枝杆菌ESAT6CFP10基因疫苗真核表达
- 结核分支杆菌Ag85B分泌蛋白基因疫苗的构建和免疫原性的研究被引量：26
- 2001年
- 目的 构建编码结核分支杆菌 (MTB)Ag85B分泌蛋白的重组真核表达质粒 ,并研究其免疫原性。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)方法从结核分支杆菌H3 7Ra 基因组DNA中扩增出Ag85B分泌蛋白基因 ,用HindⅢ和EcoRⅠ消化后 ,与同样酶消化的pcDNA3连接 ,转化大肠杆菌JM10 9,阳性克隆用酶切鉴定 ;重组表达质粒肌注免疫小鼠 4周后 ,分别用dotblotting和ELISA方法检测抗体的产生和滴度。结果 酶切鉴定重组表达质粒pTB30s构建成功 ;dotblotting检测免疫小鼠血清抗Ag85B特异性抗体阳性 ,ELISA检测抗体几何平均滴度为 1∶12 0。结论 应进一步研究pTB30s刺激机体的细胞免疫应答 ,以用于结核病 (TB)
- 范雄林徐志凯李元薛莹李别虎白光春
- 关键词：结核分支杆菌基因疫苗免疫原性结核免疫
- 结核分枝杆菌Ag85B基因疫苗免疫保护作用的初步研究被引量：11
- 2003年
- 目的:研究编码结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的基因疫苗pTB30m和pTB30s对免疫动物的保护作用。方法:以基因疫苗pTB30m和pTB30s肌注免疫BALB/c小鼠。免疫完成6 wk后,用5×105 CFU的MTB H37Rv毒株经小鼠尾静脉攻击感染。同时用尼龙毛柱分离基因免疫BALB/c小鼠的T细胞,并以5×106 T细胞/只小鼠过继免疫正常BALB/c小鼠,立即用105 CFU的MTB毒株经小鼠尾静脉攻击感染。4 wk后分别计数脾脏中的细菌负荷。结果:与生理盐水对照组相比较,pTB30m及pTB30s质粒免疫组BALB/c小鼠脾脏中的细菌负荷均减少,分别为0.645(log10 CFU,P<0.01)和0.839(log10CFU,P<0.001);而空质粒对照组小鼠脾脏中的细菌负荷减少较少。经质粒pTB30m和pTB30s免疫的BALB/c小鼠的T细胞,过继免疫的正常BALB/c小鼠,对攻击感染的MTB H37Rv毒株在脾脏中的增殖具有部分抑制作用。结论:pTB30s免疫的BALB/c小鼠,对MTB H37 Rv毒株攻击的保护作用优于pTB30m质粒免疫,有望进一步用于结核病的防治研究。
- 范雄林徐志凯李元李别虎薛莹柏银兰白光春贾向志
- 关键词：结核分枝杆菌AG85B基因疫苗免疫保护作用
- 创新教育在医学微生物学实验课教学中的应用被引量：6
- 2002年
- 本文着重讨论如何适应科学技术的迅猛发展,在医学微生物学的实验课中培养同学们的创新能力和创新精神.
- 薛莹
- 关键词：创新教育医学微生物学实验课医学教学
- 医学微生物学小班教学理念探讨被引量：1
- 2007年
- 教学理念就是人们对教学和学习活动内在规律的认识的集中体现。微生物学小班教学理念以“一切为了学生的发展”为中心，正确处理教学与教程的关系，并采用多种手段，促进学生自主学习，培养求异思维，激发学生勇于创新的精神。
- 柏银兰柴春雨薛莹
- 关键词：微生物学教学方法教学理念
- 沙眼衣原体重组口服活疫苗的体液免疫学特性被引量：1
- 2001年
- 目的检测所构建的沙眼衣原体Ct重组疫苗株口服免疫小鼠后,产生的体液免疫应答。方法将所构建的重组菌以5×108菌落形成单位CFU/只的剂量,口服免疫雌性Balb/c小鼠,随机分为7组,每组3只。于免疫后第2,7,14,21,28,35和42d各取1组,采集血清、小肠肠腔冲洗液和阴道冲洗液标本。分别以D型Ct和鼠伤寒杆菌临床分离株为抗原,检测各组血清、小肠冲洗液和阴道冲洗液标本中特异性IgG,IgA和IgM。取抗D型Ct血清IgG阳性标本和阴道冲洗液IgA阳性标本,分别用于检测与C型Ct的交叉反应。结果在血清标本中,有抗D型Ct和抗鼠伤寒杆菌特异性IgG和IgM,在小肠冲洗液和阴道冲洗液标本中有抗上述两种抗原特异性IgG和IgA。抗D型CtIgG阳性血清标本和IgA阳性阴道冲洗液标本与C型Ct均有交叉反应。结论所构建的疫苗株免疫小鼠后,能够诱导Ct特异性IgG及IgA产生。
- 白光春李元薛莹李别虎范雄林马文煜
- 关键词：沙眼衣原体鼠伤寒杆菌重组疫苗
- 适形调强放疗联合希罗达治疗老年性食管癌的疗效评价
- 目的:探讨适形调强放疗联合希罗达同期放化疗治疗老年性食管癌的疗效与不良反应。方法:对2005年4月-2007年4月我科收治的,经过病理证实为鳞癌的,老年性食管癌患者,符合入组条件的(无严重心肺疾患,无严重肝肾功能障碍,无...
- 朱勇陆军肖锋薛莹魏丽春石梅
- 文献传递
- 表达Ag85B-ESAT6的重组卡介苗在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力被引量：3
- 2006年
- 师长宏安家泽王晓武张海徐志凯柏银兰薛莹
- 关键词：重组卡介苗AG85B免疫应答保护力小鼠结核病疫苗
