柏银兰
- 作品数：107 被引量：323H指数：11
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- 结核分枝杆菌Rv2450基因的克隆、表达及纯化被引量：7
- 2004年
- 目的 :克隆结核分枝杆菌 (Mtb)Rv2 4 5 0基因 ,序列测定正确后进行融合表达、纯化 .方法 :采用聚合酶链反应(PCR)从MtbH37Rv基因组中扩增出Rv2 4 5 0编码基因 ,序列测定正确后 ,亚克隆到融合表达载体 pPro EXHT中 ,转化大肠杆菌DH5α ,目的基因经IPTG诱导 ,由T7启动子调控表达带 6个组氨酸残基的Rv2 4 5 0蛋白 ,在变性条件下对目的蛋白进行亲和层析纯化 .结果 :得到融合 6个组氨酸残基的Rv2 4 5 0蛋白纯度大于 90 % .结论 :构建了MtbRv2 4 5 0基因的重组表达载体 ,并获得了高纯度的融合表达蛋白 .
- 薛莹姜泓高雪柏银兰师长宏张海徐志凯李元
- 关键词：结核分枝杆菌克隆纯化
- 结核分枝杆菌Rv1009结构域多肽的免疫学特性研究被引量：2
- 2008年
- 目的研究结核分枝杆菌Rv1009结构域多肽的免疫学特性。方法用原核表达的Rv1009结构域多肽免疫BALB／c小鼠3次，每次间隔2周。用ELISA法检测免疫小鼠血清中特异性抗体滴度。分离免疫小鼠的脾淋巴细胞，体外用抗原再刺激后，用MTF比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖指数。ELISA方法检测淋巴细胞悬液中γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素（IL）-10和IL-12的产生水平。另一部分免疫的小鼠经尾静脉感染MTB毒株H37Rv，4周后，计数脾脏细菌负荷数。结果Rv1009结构域多肽免疫小鼠血清特异性抗体滴度为1：12800。淋巴细胞增殖指数为2．40±0．18，明显高于生理盐水对照组的0．90±0．21。ELISA方法检测Rvl009结构域多肽免疫组IFN-γ IL—10和IL-12水平为（1432±30）ng／L、（503±11）ng／L和（311±11）ng／L，显著高于生理盐水对照组的（256±20）ng／L、（76±6）ng／L和（56±8）ng／L（P〈0．01）。与生理盐水免疫组（细菌负荷6．64±0．13）相比较，Rv1009结构域多肽免疫组小鼠，对攻击感染后抗MTB在脾脏中增殖有显著作用（细菌负荷为4．86±0．14，P〈0．05），但不及BCG免疫组的3．81±0．16。结论Rv1009结构域多肽有可能作为新型结核疫苗的候选组分。
- 樊爱琳师长宏苏明权简文程晓东柏银兰徐志凯郝晓柯
- 关键词：细菌蛋白质类细胞因子类
- 融合表达Ag85B-ESAT6的结核分枝杆菌真核表达载体的构建及其免疫原性被引量：10
- 2004年
- 目的 :构建融合表达结核分枝杆菌 (Mycobacteriumtuberculosis,MTB)分泌蛋白Ag85B ESAT6真核表达载体 ,研究该重组载体在体外的表达和在小鼠体内诱生体液免疫应答的能力 .方法 :设计含不同酶切位点的Ag85B和ESAT6引物 ,采用PCR的方法从MTB毒株H37Rv DNA中分别扩增出相应大小的DNA片段 ,将片段分别与pGEM T easy载体连接后测序 .将测序正确的Ag85B和ESAT6按照不同的酶切位点克隆入真核表达载体pcDNA3,挑选出阳性克隆 ,分别命名为AZ pcD NA3 EF 和EZ pcDNA3 AF,将重组质粒电转CHO细胞 ,RT PCR检测融合蛋白mRNA的表达 ,间接免疫荧光测定CHO细胞内融合蛋白的表达 ;用重组质粒免疫BALB/c小鼠 ,ELISA测定特异性抗体的滴度 .结果 :PCR获得的Ag85B和ESAT6序列与GenBank报道的一致 .RT PCR可检测融合基因转录出mR NA ,转染重组质粒的CHO细胞内有较强的免疫荧光 ,AZ pcD NA3 EF 质粒免疫小鼠血清特异性抗体滴度为 1∶1 0 0 0 ,EZ pcD NA3 AF 质粒免疫小鼠血清特异性抗体滴度为 1∶1 5 0 0 .结论 :Ag85B和ESAT6融合基因真核表达载体构建成功 。
- 师长宏范雄林徐志凯李元柏银兰薛莹
- 关键词：分枝杆菌结核ESAT6
- 结核分枝杆菌热休克蛋白65与人IL-2融合蛋白在耻垢分枝杆菌中的表达
- 目的：构建能够分泌表达结核分枝杆菌热休克蛋白65(HSP65)与人IL-2融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌(recombinant Mycobacterium Smegmatis，rM.S)。
方法：用EcoR V和...
- 王丽梅师长宏柏银兰张海康健张薇徐志凯
- 关键词：结核分枝杆菌热休克蛋白65IL-2融合蛋白耻垢分枝杆菌分泌表达
- 文献传递
- 结核分枝杆菌esat6-cfp10融合基因的克隆表达及纯化被引量：3
- 2005年
- 获得esat6-cfp10重组蛋白,为研究其在结核病诊断和预防中的作用奠定一定基础。以结核杆菌H37Rv基因组DNA为模板,克隆cfp10基因,将其插入到pGEM-7ZF(+)克隆载体后与esat6基因连接,构建含有esat6和cfp10融合基因的克隆载体pGEM-e6c10。酶切消化pGEM-e6c10重组质粒,将esat6-cfp10基因亚克隆到pPROEXTM HTb原核表达载体,经IPTG诱导后,可表达出分子量约28 kD的esat6-cfp10融合蛋白,重组蛋白经镍柱纯化后,得到了高纯度的esat6-cfp10融合蛋白。Western blot证明表达重组蛋白有较好的免疫原性。
- 张海师长宏范雄林薛莹柏银兰姜泓高雪徐志凯
- 关键词：ESAT6CFP10融合基因结核分枝杆菌
- 分枝杆菌持续感染小鼠模型的建立及其特征分析被引量：4
- 2017年
- 目的建立不同毒力的分枝杆菌持续感染小鼠模型并分析其免疫应答特征,为结核病新型疫苗及药物评价研究奠定基础。方法分别用结核分枝杆菌(Mtb)标准毒株H37Rv、减毒株H37Ra及疫苗株BCG经尾静脉注射感染BALB/c小鼠,5×10~4 CFU/只。感染后4、8周观察小鼠一般状态及体重变化;观察脾脏大体情况和肺组织病理改变;检测分枝杆菌特异性抗体水平、脾淋巴细胞刺激指数(SI)及Th1/Th2细胞因子分泌情况;采用平板计数法计脾、肺脏荷菌数CFUs。结果不同毒力分枝杆菌感染8周后,各组小鼠体重无显著差异;H37Rv感染组脾脏体积显著增大,肺组织病理切片显示菌株感染可引起不同程度的病理损伤;感染4周后小鼠血清特异性抗体水平升高,且感染后8周抗体水平高于4周水平,但不同菌株感染组间差异无统计学意义;不同毒力分枝杆菌感染小鼠的脾淋巴细胞刺激指数(SI)均升高,以H37Rv和H37Ra感染组脾淋巴细胞增殖更显著。H37Rv感染4周后IFN-γ、IL-10分泌水平显著升高(P<0.05)。感染4周后,H37Rv小鼠脾脏荷菌数Log_(10)CFU显著高于BCG组,为4.389±0.1245,而H37Ra感染组与BCG组无显著差异,为4.068±0.2184;各感染组肺荷菌数Log_(10)CFU无显著差异;感染8周后,H37Ra、H37Rv感染组小鼠脾脏荷菌数显著高于BCG组(P<0.05),而肺部荷菌数组间无差异。小鼠呈现持续感染状态。结论本研究成功建立了不同毒力分枝杆菌持续感染小鼠模型,该模型可用于结核病疫苗及药物的研发及筛选。
- 宁唤唤路延之康健许艳慧王立飞王莹姚庆港宋世杰徐志凯柏银兰
- 关键词：结核分枝杆菌小鼠模型
- 医学院校青年教师指导本科生课外科研遇到的问题及解决对策被引量：15
- 2017年
- 高等医学院校开展的本科生课外科研训练,是促使学生由学习向发现进行转化的直接途径,是使学生能够适应现代化并面向未来的需要。本文从学生和教师两个角度,对医学院校青年教师指导本科生课外科研过程中出现的若干问题进行了分析,包括学生科研观念问题、学生实验技能问题、学生探索独立性问题、青年教师引导方向问题、青年教师自身工作安排问题等。同时提出了相应问题的解决对策,包括引导学生正确科研观念形成、做好学生实验操作培训工作、培养学生科研独立性、建立学生良好科研思维、安排好教师自身各项工作等方面,使青年教师能够在培养本科生科研综合能力的过程中发挥更大的作用。
- 路延之柏银兰王丽梅康健吴兴安
- 关键词：青年教师本科生
- 提高医学微生物学教学效果的几点体会被引量：3
- 2009年
- 在医学微生物学教学中教师通过多媒体课件的认真制作、最新前沿知识的介绍、多种教学方法的综合使用，以及实验课教学等方面的加强和改进，有效提高了学生的学习兴趣和主动性，开拓了思维能力，取得了良好的教学效果。
- 王丽梅姜泓柏银兰康健张薇何俊杰徐志凯
- 关键词：微生物学课堂教学实验教学
- 结核分枝杆菌Ag85B-ESAT6融合蛋白稳定表达细胞系的建立
- 2006年
- 建立了能够稳定表达结核分枝杆菌Ag85B-ESAT6融合蛋白的P815细胞系。将Ag85B和ESAT6基因分别克隆至真核表达载体pcDNA3,构建了Ag85B-ESAT6融合蛋白的真核表达质粒Ag85B-pcDNA3-ESAT6。在阳离子聚合物作用下,重组质粒转染与BALB／c遗传背景一致的P815(H-2d)细胞。通过G418压力筛选后,得到1株阳性克隆细胞。经过BT-PCR检测到该细胞中有 Ag85B-ESAT6融合蛋白mRNA表达,用间接免疫荧光可以在转染重组质粒的P815细胞膜上检测到较强的绿色荧光,证实P815细胞内有融合蛋白的表达。获得表达Ag85B-ESAT6融合蛋白的稳定细胞系。
- 师长宏安家泽唐小凤王晓武张海柏银兰徐志凯
- 关键词：结核分枝杆菌细胞系AG85BESAT6基因融合
- 结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B-ESAT6的融合表达及纯化被引量：12
- 2004年
- 目的 融合表达结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B ESAT6 ,为结核病的预防提供有效亚单位疫苗。方法 设计含不同酶切位点的Ag85B和ESAT6引物 ,采用聚合酶链反应 (polymerasechainreaction ,PCR)的方法从结核分枝杆菌毒株H3 7Rv DNA中分别扩增出相应大小的DNA片段 ,将片段分别与PGEM T easy载体连接测序。将测序正确的Ag85B和ESAT6按照不同的酶切位点克隆入PPROEXHT表达载体 ,挑选出阳性克隆 ,将诱导的表达产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分析 ,同时与含6个组氨酸 (histidine 6×his)的单克隆抗体 (monoclonalantibody ,mAb)进行固定化蛋白质免疫学测定(Western blot) ,将用含Ni+鳌合剂的Ni NTA亲合柱纯化的表达产物免疫小鼠 ,用结核分枝杆菌培养上清滤液蛋白 (culturefiltrateproteins ,CFP)作为抗原 ,酶联免疫吸附试验 (enzyme linkedimmunosorbentassay ,ELISA)测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度。结果 PCR获得的Ag85B和ESAT6序列与基因文库 (GenBank)报道的完全一致。两者在大肠杆菌DH5α株中融合表达的产物约为 370 0 0 ,与预计大小相吻合。Western blot结果显示 ,在相对分子量约 370 0 0处有表达产物与 6×hismAb特异性结合带。表达产物为包涵体 ,通过Ni NTA纯化系统 ,可得到纯化的目的蛋白。
- 师长宏范雄林徐志凯李元柏银兰薛莹
- 关键词：结核分枝杆菌纯化结核病
