王丽梅
- 作品数：73 被引量：235H指数：8
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- 结核分枝杆菌RpfA融合蛋白的免疫学和生物学特性的初步研究
- 2007年
- 目的在大肠杆菌中表达并纯化结核分枝杆菌RpfA融合蛋白,并初步研究其免疫学和生物学特性。方法Rp-fA融合蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的体液免疫应答效果。分离小鼠的脾淋巴细胞,MTT法检测淋巴细胞增殖指数,ELISA法检测培养液上清IFN-γ,IL-2含量;MTBH37Rv毒株静脉感染免疫小鼠,测定脾脏细菌负荷。将不同浓度的复性RpfA融合蛋白和特异性多抗加入到MTBH37Ra中,测定H37Ra的生长曲线。结果RpfA融合蛋白免疫小鼠的脾淋巴细胞的增殖指数达到3.57,高于生理盐水对照组的1.27(P<0.05);培养上清中IFN-γ含量为362.99±72.75ng/L,IL-2含量为210.10±20.19ng/L,而生理盐水对照组含量均低于50ng/L(P<0.05)。免疫小鼠脾脏细菌负荷计数为5.57±0.37(log10CFU±S),而生理盐水对照组为6.54±0.22(P<0.05)。RpfA融合蛋白对H37Ra的生长有明显促进作用,而加入特异性多抗后可以抑制RpfA融合蛋白的促生长作用。结论RpfA融合蛋白免疫小鼠可引起体液免疫和保护性细胞免疫,可能作为基因疫苗的候选组分。RpfA融合蛋白对H37Ra生长有明显的刺激作用,可能作为快速培养检验结核分枝杆菌的添加组分。
- 高辉柏银兰王丽梅徐志凯薛莹
- 关键词：结核分枝杆菌免疫学生物学
- 结核分枝杆菌esat-6基因疫苗的构建和免疫原性的研究被引量：9
- 2004年
- 目的 构建以结核分枝杆菌H3 7Rvesat - 6基因为基础的基因疫苗 ,并研究其免疫原性。方法 采用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切含有esat- 6目的基因的质粒pGEM -Teasy -esat6 ,10 g L-1琼脂糖凝胶电泳回收约 30 0bp大小片段 ,以亚克隆法构建于真核表达载体 pcDNA3 1的相应酶切位点阳性克隆经酶切鉴定证实。重组表达质粒肌注免疫BALB/c小鼠三次 ,每次间隔 2周 ,ELISA检测小鼠血清中产生抗体的水平。结果 用BamHⅠ和EcoRⅠ酶切鉴定证实目的基因正确插入载体 ,命名为pcDE6 ,重组质粒免疫小鼠体内产生特异性抗体。结论 所构建的重组真核表达质粒pcDE6能引起免疫动物的特异性体液免疫反应 ,应进一步研究其刺激机体的细胞免疫应答 ,以用于结核病 (TB)
- 王丽梅范雄林师长宏李元柏银兰薛莹徐志凯
- 关键词：结核分枝杆菌基因疫苗免疫原性ESAT-6
- 结核杆菌Hsp65与人IL-2融合蛋白在耻垢杆菌表达
- 2011年
- 目的:构建能够分泌表达结核分枝杆菌热休克蛋白65(Hsp65)与人IL-2融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌(recombinant Mycobacterium Smegmatis,rMs)。方法:用EcoRⅤ和HindⅢ双酶切含Hsp65-IL-2融合基因的pPRO-hsp65-IL-2载体,回收目的基因片断Hsp65-IL-2,并将其亚克隆入同样双酶切的大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭分泌表达载体pDE22中。重组质粒pDE22-hsp65-IL-2酶切鉴定正确后,电穿孔转化MS感受态,潮霉素抗性压力筛选阳性rMs。Western-blot鉴定rMs培养上清蛋白中目的蛋白的表达。结果:重组pDE22-hsp65-IL-2质粒酶切后可获得约2000 bp片段,与预期大小一致。Western-blot结果表明,rMs培养上清蛋白中有特异性反应条带,大小为78kD,与Hsp65-IL-2融合蛋白大小相一致。结论:成功构建了大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭分泌表达载体pDE22-hsp65-IL-2,为该rMs的免疫学特性及抗结核分枝杆菌感染的保护效果研究奠定了基础。
- 王丽梅师长宏柏银兰张海康健张薇徐志凯
- 关键词：结核分枝杆菌HSP65耻垢分枝杆菌
- 结核分枝杆菌热休克蛋白65的最新研究进展
- 2013年
- 结核病(tuberculosis,TB)是一种由结核分枝杆菌引起的人兽共患的慢性传染病。而HSP(heat shock protein)是一类在原核和真核细胞中高度保守的蛋白质,在正常细胞的蛋白转位、折叠和装配过程中起着分子伴侣的作用。目前在MTB中研究最多的是HSP65,他的细胞表位较多,是机体免疫系统识别的重要细胞内抗原。
- 康健柏银兰王丽梅张琳徐志凯
- 关键词：结核分枝杆菌真核表达热休克蛋白65融合蛋白
- Hsp65与IL-2融合蛋白诱导小鼠细胞免疫应答及保护力被引量：3
- 2008年
- 目的研究Hsp65与hIL-2的融合蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力。方法在大肠杆菌中诱导表达Hsp65与hIL-2的融合蛋白,通过Ni-NTA亲合柱纯化后的蛋白经鉴定后,与佐剂DDA和MPL联合免疫小鼠,连续免疫3次,每次间隔2周,最后一次免疫结束后两周,分离5只小鼠脾淋巴细胞,测定淋巴细胞增殖指数,IFN-γ和IL-2水平,以及特异性淋巴细胞杀伤功能,其余5只免疫小鼠用于MTB毒株攻击实验。结果获得融合蛋白可分别与抗Hsp65和抗hIL-2的单抗发生特异性反应。融合蛋白免疫小鼠后,小鼠脾淋巴细胞被有效活化,诱导产生的-γIFN和IL-2的水平以及CTL杀伤功能均显著高于BCG和单纯Hsp65免疫组(P<0.05)。融合蛋白免疫组可有效抵抗MTB毒株攻击,脾脏细菌数显著减少(4.36±0.48),提供的保护力与BCG相当(4.30±0.53)。结论Hsp65与hIL-2的融合蛋白是一种有效的亚单位疫苗,可用于TB的预防。
- 师长宏张海席丽张廷芬赵勇王丽梅徐志凯
- 关键词：热休克蛋白65人白细胞介素2
- 结核杆菌cfp10真核载体的构建、表达与基因免疫(英文)被引量：2
- 2003年
- 目的 :构建以结核分枝杆菌H3 7Rvcfp10基因为基础的基因疫苗 .方法 :采用BamHI和XbaI双酶切质粒pGEM Teasy CFP10中 ,10 g·L-1琼脂糖凝胶电泳回收约 30 0bp大小片段 ,以亚克隆法构建于真核表达载体 pcDNA3.1的相应酶切位点 .阳性克隆提取质粒 ,体外电穿孔转化CHO细胞 ,RT PCR法检测cfp10特异的mRNA的表达 .质粒肌注免疫BALB/c小鼠 ,ELISA检测小鼠血清中相应抗体的滴度 .结果 :用BamHI和XbaⅠ酶切鉴定证实目的基因正确插入载体pcDNA3.1,命名为 pcCFP10 ;pcCFP10转化的CHO细胞RNA提取物中 ,RT PCR扩增出 30 0bp大小的条带 .肌注免疫BALB/c小鼠 ,ELISA检测小鼠血清中相应抗体平均滴度为 1∶4 ,0 0 0 .结论 :以CFP10的编码基因为基础的真核表达质粒的构建成功 .
- 范雄林王丽梅师长宏李元柏银兰薛莹徐志凯
- 关键词：CFP10基因疫苗真核表达载体
- 结核分枝杆菌MPT64重组母牛分枝杆菌免疫学特性被引量：1
- 2009年
- 目的:研究结核分枝杆菌MPT64重组母牛分枝杆菌疫苗免疫学特性。方法:用分泌表达MPT64的重组母牛分枝杆菌疫苗免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的特异性抗体滴度和抗体亚类。分离免疫小鼠脾淋巴细胞,检测淋巴细胞增殖、IFN-γ和IL-12产生水平、CD4+细胞和CD8+细胞数、脾淋巴细胞特异性CTL杀伤效应。毒株攻击后对脾脏细菌负荷计数。结果:MPT64重组母牛分枝杆菌疫苗免疫可诱导小鼠高水平的体液免疫应答,免疫小鼠脾淋巴增殖明显,IFN-γ和IL-12含量增加,CD4+和CD8+细胞百分比明显增加,CTL杀伤效应明显,对MTBH37Rv攻击后有一定的保护作用。结论:MPT64重组母牛分枝杆菌疫苗可诱导小鼠有效的体液和细胞免疫应答,有可能作为新型TB疫苗候选。
- 柏银兰薛莹王丽梅樊爱琳张薇何俊杰康健徐志凯
- 关键词：结核分枝杆菌母牛分枝杆菌疫苗MPT64
- 幽门螺杆菌临床诊断进展被引量：3
- 2011年
- 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)为上消化道疾病的重要致病因子,与胃窦炎、胃溃疡、胃腺癌及胃黏膜相关B细胞淋巴瘤的发生均有密切的关系。因此,及早进行Hp诊断,明确是否伴有Hp感染,对防治上消化道疾病有重要意义。目前,临床检测Hp的方法有多种,主要分为侵入性和非侵入性两大类,各有其优缺点,适用于不同的临床情况。现对上述方法及研究进展作一介绍,以供临床工作者参考。
- 周治中王丽梅
- 关键词：幽门螺杆菌
- 循证医学理念引入医学微生物学教学探讨
- 2011年
- 在微生物学教学过程中引入循证医学理念、原则和方法,形成以问题为中心,变学生被动学习为主动学习的一种新的教学模式,有利于培养学生的创新思维能力和自我更新医学知识的能力,提高教学效果和医学生的综合素质。
- 王丽梅姜泓
- 关键词：微生物学教学方法循证医学
- 分枝杆菌esat-6家族研究进展被引量：2
- 2003年
- 随着结核分枝杆菌全基因组序列测定的完成和后基因组学研究的发展,发现esat-6家族是一个免疫优势家族。该家族蛋白具有较强的免疫原性,且有的蛋白可能与结核分枝杆菌的毒力有关。本文综述了该家族蛋白的组成、免疫学特征、与结核分枝杆菌致病性的关系及其在结核病诊断试剂、新型疫苗方面的应用前景。
- 王丽梅范雄林徐志凯
- 关键词：分枝杆菌抗原免疫原性
