邹丽辉
- 作品数：26 被引量：26H指数：3
- 供职机构：北京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- 治疗心衰的mRNA药物制剂及其制备方法与应用
- 本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及治疗心衰的mRNA药物制剂及其制备方法与应用。本发明将表达脑利钠肽(BNP)的mRNA递送至体内，利用人体细胞自主表达BNP，利钠利尿、舒张血管、降低体循环血管阻力及血浆容量，从而达到...
- 季福绥于雪邹丽辉张兰馨
- NO-sGC-cGMP信号通路在肺血管损伤修复中的作用机制研究
- 邹丽辉金军华张恩毅肖飞
- 一种高效制备人β2微球蛋白标准物质的方法和应用被引量：1
- 2018年
- 目的构建重组人β2微球蛋白表达体系,高效快速获取β2微球蛋白,为临床实验室检测参考物质的制备奠定基础。方法优化人β2微球蛋白序列,人工合成优化序列片段并与麦芽糖结合蛋白(MBP)分别克隆至pRSF-Duet载体以构建重组人β2微球蛋白表达质粒。使用大肠杆菌E.coli BL21(DE3)对重组质粒进行诱导表达,TEV蛋白酶切除MBP,全自动生化仪测定β2微球蛋白浓度。对重组蛋白在4℃和–20℃储存条件下的稳定性进行检测,对β2微球蛋白纯品与校准品的互通性进行分析。结果成功构建重组人β2微球蛋白表达质粒,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)成功诱导重组蛋白表达,MBP-β2微球蛋白(MBP-β2-MG)浓度可达100 mg/L,β2微球蛋白浓度可达185 mg/L。在4℃和–20℃储存条件下监测64周,β2微球蛋白稳定存在。β2微球蛋白纯品与RANDOX生化校准品互通性良好。结论通过密码子优化,成功构建了重组β2微球蛋白的高效表达系统,β2微球蛋白可溶性高,稳定性好,与国际通用校准品互通性好,可充分满足该产品诊断试剂制备的需求。
- 邹丽辉王萌黄薇张恩毅肖飞王玉梅
- 关键词：Β2微球蛋白重组蛋白质类
- NO-sGC-cGMP信号通路通过cGK调控PAI-2基因表达
- 2019年
- 目的:体外分析环磷酸鸟苷是否(cGMP)通过cGMP依赖性蛋白激酶(cGK)调控人纤溶酶原激活物抑制剂2(PAI-2)基因启动子活性,阐明PAI-2基因表达的分子调控机制。方法:构建cGK的真核过表达载体及其小干扰RNA(siRNA)敲减体系,以及PAI-2基因启动子缺失突变序列双萤光素酶报告载体,瞬时转染人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs),在可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)特异性刺激剂BAY 41-2272处理前后,real-time PCR检测PKG1(cGK编码基因)和PAI-2基因的mRNA水平。结果:cGK过表达能显著上调细胞内PKG1的mRNA水平和蛋白表达水平,cGK siRNA则能显著降低其表达(P<0.01);BAY 41-2272处理HPASMCs后,PKG1基因和PAI-2基因的mRNA水平均明显升高,而cGK siRNA则能抑制该上调作用(P<0.01);双萤光素酶报告基因实验显示,cGK过表达显著上调PAI-2基因启动子活性,而cGK敲减组其活性与对照组比较差异无统计学显著性;BAY 41-2272处理后PAI-2基因启动子缺失突变体PAI-2-Prom-M1组和PAI-2-Prom-M2组的萤光素酶相对活性显著增强,其它启动子缺失突变体组其活性与对照组比较差异无统计学显著性。结论:NO-sGC-cGMP信号通路通过cGK调控PAI-2表达,PAI-2基因转录起始位点5’侧翼区的-1 000 bp^-800 bp是其表达调控的关键区域之一。
- 韩敬丽邹丽辉金军华李文卿李英肖飞
- 微流控技术在临床检验中的应用被引量：7
- 2018年
- 目前,临床检验正在向两种不同方向发展,一种是高度流水线化的中心实验室,一种是高度集成的便携式检测系统.后者从早期的单个项目检测,逐渐演化为基于微流控技术的集成平台,可以同时执行多个实验步骤和测试,进而形成包括生化、免疫、微生物、细胞学检测的全套微型实验体系,这些基于微流控技术的快速诊断系统将伴随我国的医改进程,下沉到基层的医疗机构甚至家庭.本文综述了目前微流控技术在临床检验领域的应用现状以及未来发展趋势.
- 邹丽辉李英肖飞
- 关键词：芯片分析技术临床实验室技术
- 应用基因密码子优化技术建立高效人降钙素原的原核表达方法及产品纯化和鉴定
- 2022年
- 目的建立人降钙素原(procalcitonin,PCT)表达体系,高效表达可溶性PCT蛋白。方法合成PCT蛋白密码子优化序列,克隆至带麦芽糖结合蛋白(maltose-binding protein,MBP)标签的pRSF-Duet载体以构建pMBP-PCT-pRSF原核表达质粒。在E.coli BL21(DE3)pLysS菌株中诱导表达,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE)鉴定蛋白分子量及纯度,生物梅里埃VIDAS全自动荧光免疫分析仪检测蛋白浓度、稳定性及均匀性。结果pMBP-PCT-pRSF质粒成功构建及表达,浓度达168(168.00±2.65)mg/L,纯度达95%。在4℃及-20℃储存,PCT蛋白具有良好的稳定性(F=2.016,2.620,均P>0.05)和均匀性(F=0.7273,0.9739,均P>0.05)。结论利用密码子优化,成功构建可溶性PCT蛋白的高效原核表达体系,可充分满足临床实验室参考物质的需求。
- 罗玄梅黄薇孙高远汤小琨王璐瑶邹丽辉
- 关键词：降钙素原重组蛋白质类
- 人胱抑素C参考物质制备方法的建立
- 2018年
- [目的]建立重组人胱抑素C(cystatin C)表达体系,获得可溶、稳定、高纯度的胱抑素C。[方法]密码子优化并人工合成人胱抑素C编码序列,与麦芽糖结合蛋白(MBP)分别克隆至PRSF-Duet载体以构建重组人p MBP-CYSC PRSF表达质粒。使用大肠杆菌E. coli BL21(DE3) p Lys S对其进行诱导表达,SDS-PAGE鉴定蛋白纯度和分子量,全自动生化仪测定纯化蛋白浓度及稳定性。[结果]成功构建重组人p MBP-CYSC PRSF表达质粒并诱导表达,胱抑素C蛋白浓度可达500 mg/L,纯度可达90%,在4℃和-20℃储存条件下监测64 w,胱抑素C蛋浓度稳定,均在允许相对偏差5%以内。[结论]通过密码子优化,成功获得浓度为500 mg/L、纯度为90%、存储稳定性至少达到64 w的胱抑素C蛋白,可充分满足该产品诊断试剂制备的需求。
- 邹丽辉邹丽辉王萌张恩毅黄薇张恩毅肖飞
- 关键词：重组蛋白表达
- 肿瘤相关免疫功能评价指标的增龄研究被引量：1
- 2021年
- 目的探讨随年龄变化的人体免疫功能评价指标变化特点,为建立肿瘤免疫治疗疗效评价体系提供科学依据。方法纳入并收集2019年1-12月北京医院进行常规体检的478例健康人的血液标本,建立临床信息库,根据年龄分为青年组(<40岁,257例)和老年组(≥70岁,221例),比较两组健康人外周血中与肿瘤免疫密切相关基因的表达量、血浆中的细胞因子、T细胞增殖能力和T细胞及自然杀伤(NK)细胞杀伤能力等细胞功能的差异。结果实时定量荧光PCR检测肿瘤免疫相关基因:程序性死亡受体-1(PD1)、补体C3(C3)、补体C4(C4)、高敏C-反应蛋白(HsCRP)、肿瘤坏死因子-α(TNFα)、干扰素-γ(INF-γ)、白细胞素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)、核转录因子(NF-κB)、促进红细胞存活的长链基因间非编码性RNA(lincRNA-EPS)、髓样调节Bim诱导死亡的长链非编码RNA(lncRNA-Morrbid)、环氧合酶2的长链基因间非编码性RNA(lincRNA-Cox2)、树突状细胞中特异性高表达的长链非编码RNA(Lnc-DC)和环状RNA-7(ciRS-7)的表达情况,结果显示与青年组相比,老年组免疫相关基因C4的mRNA表达水平下降[青年组(1.01±0.18)比老年组(0.64±0.13),P=0.047],其他基因差异无统计学意义(P>0.05)。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤免疫相关的蛋白:其中IL-6[青年组(249.30±100.02)ng/L比老年组(283.00±94.98)ng/L,P=0.021]、HsCRP[青年组(2543.00±1111.89)ng/L比老年组(3056.00±1056.61)ng/L,P=0.002]、INF-γ[青年组(362.40±383.67)ng/L比老年组(500.40±502.27)ng/L,P=0.0470]和TNF-α[青年组(20.74±29.47)ng/L比老年组(33.09±48.91)ng/L,P=0.0416]在老年组表达水平升高,C4[青年组(449.50±51.17)ng/L比老年组(407.10±59.78)ng/L,P<0.0001]在老年组表达水平低于青年组。T淋巴细胞增殖实验显示同等条件下老年组CD3+ T淋巴细胞可增殖4代,而青年组的T细胞可增殖5代。NK细胞对肿瘤细胞的杀伤实验显示�
- 韩玉坤高春晓童金莲邹丽辉马洁
- 关键词：增龄免疫
- 肺动脉高压患者外周血细胞中PAI-2mRNA水平及sGC激活剂对其表达的影响被引量：3
- 2016年
- 目的探讨肺动脉高压患者外周血细胞中纤溶酶原激活抑制剂-2（PAI-2）mRNA水平及可溶性鸟苷酸环化酶（sGC）激活剂对其表达的影响。方法sGC激活剂西那西呱（Cinaciguat）以100μmol／L浓度处理人肺动脉平滑肌细胞，实时定量荧光PCR和蛋白质印迹法检测PAI-2的mRNA和蛋白表达水平。收集2014年11月至2015年3月中日友好医院的8份动脉性肺动脉高压（PAH）和16份慢性血栓栓塞性肺动脉高压（CTEPH）全血样本以及2015年3月北京医院体检中心的24份健康对照全血样本，Cinaciguat与PAH组和CTEPH组及其各对照组的外周血室温孵育8h，实时定量荧光PCR检测Cinaciguat处理前后PAI-2mRNA表达水平，应用变量相关性分析明确PAI-2mRNA水平是否与肺动脉高压患者的疾病严重程度相关。结果Cinaciguat在人肺动脉平滑肌细胞中能明显上调PAI-2的mRNA和蛋白表达水平。Cinaciguat处理前，PAH组基线PAI-2mRNA表达水平显著低于PAH对照组（0．201±0．152比0．660±0．440，P=0．021），CTEPH组基线PAI-2mRNA表达水平与CTEPH对照组差异无统计学意义（0．428±0．364比0．769±0．682，P=0．152）；Cinaciguat处理后，PAH组、CTEPH组外周血白细胞中PAI-2在mRNA水平上呈增加趋势（1．352±1．127、1．203±1．008），但诱导后PAI-2mRNA水平在PAH组和PAH对照组、CTEPH组和CTEPH对照组之间差异均无统计学意义（P=0．130、0．534）。PAH组基线PAI-2mRNA水平与肺动脉收缩压显著负相关（r=-0．744，P=0．034）。结论肺动脉高压患者外周血细胞中基线PAI-2mRNA水平显著降低，sGC激活剂能上调其mRNA表达水平，PAI-2可作为PAH血管重构潜在的生物标志物。
- 邹丽辉张帅许小毛肖飞翟振国
- 关键词：肺性鸟苷酸环化酶
- 基于滚环扩增的测序文库构建方法及其应用
- 本申请提供了一种基于滚环扩增的测序文库的构建方法及其应用。该测序文库的构建方法包括：提供闭合环状的双链DNA、cDNA或RNA分子；利用特异性引物，进行滚环扩增，从而每个环仅扩增得到一条含多拷贝的单链DNA产物作为第一链...
- 肖飞罗玄梅邹丽辉苏斐张丽丽李贺鑫
- 文献传递
