黄云 作品数:21 被引量:133 H指数:7 供职机构: 中南大学湘雅医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 湖南省科技计划项目 湖南省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
AIBP在肝癌细胞中的表达及意义与含AIBP基因及AFP启动子驱动的双自杀基因表达载体构建 被引量:1 2013年 目的:探讨载脂蛋白A-I结合蛋白(AIBP)在肝癌细胞中的表达及意义。方法:用RT-PCR与Western blot法分别检测正常肝细胞株L02,AFP阳性人肝癌细胞株HepG2和Hep3B,及AFP阴性人肝癌细胞株SMMC7721中AIBP基因与蛋白的表达;构建AFP启动子驱动的双自杀基因(CD,TK)+AIBP基因过表达载体pcDNA3.1-AFP-AIBP-yCD/TK,并转染Hep3B和SMMC7721细胞,用MTT法检测转染后细胞的增殖能力,用RT-PCR和Western blot法检测细胞AIBP,血管内皮生长因子(VEGF),VEGF受体2(VEGFR-2),基质金属蛋白酶9(MMP-9)基因和蛋白的表达。结果:AIBP mRNA和蛋白在正常肝细胞中高表达,而在各肝癌细胞系中均表达下调,且Hep3B和SMMC7721细胞中下调明显。成功构建pcDNA3.1-AFP-AIBP-yCD/TK真核表达质粒并转染入Hep3B和SMMC7721细胞。转染后AFP阳性Hep3B细胞生长到明显抑制,但AFP阴性SMMC7721细胞增殖不受影响;两种细胞的AIBP基因与蛋白表达均明显上调,而VEGFR-2,VEGF和MMP-9基因与蛋白表达明显表达下调。定量指标间的差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:AIBP在肝癌细胞中表达下调,AIBP与肝癌细胞的侵袭转移能力有关,而与细胞增殖能力无关;成功构建了联合基因载体pcDNA3.1-AFP-AIBP-yCD/TK。 黄云 王志明 陶一明 刘喜武关键词:载脂蛋白A-I 血管内皮生长因子受体2 同种异体肝细胞移植促进大鼠肝纤维化逆转 2008年 目的探讨肝细胞移植对大鼠肝纤维化的改善作用及其机制。方法经腹腔注射四氯化碳制备的肝纤维化Wistar大鼠接受正常Wistar大鼠肝细胞移植(实验组),另以不接受肝细胞移植的肝纤维化大鼠(肝纤维化组)和接受肝细胞移植的正常Wistar大鼠(移植对照组)为对照。肝细胞移植于注射四氯化碳后21d进行。分别于移植前及移植后第1、2、7和14天采集抗凝血(肝纤维化组同步采集),测定血浆总转化生长因子β1(TGF-β1)、活性TGF-β1、纤溶酶及α2-巨球蛋白(α2M)水平,并取其肝脏,进行肝脏的纤维成像和定量分析,检测肝脏星形细胞活性。结果肝细胞移植后的第14天,实验组肝脏内成胶原纤维面积百分比为(3.69±0.44)%,低于肝纤维化组的(8.25±0.69)%(P〈0.01);实验组肝内α-SMA阳性信号面积百分比为(0.43±0.03)%,明显低于肝纤维化组同期的(2.79±0.40)%(P〈0.01)。移植前实验组大鼠血浆中总TGF-β1和活性TGF-β1水平分别为(4543.2±307.2)μg/ml和(2380.7±150.8)/μg/ml,移植后1d,二者均显著下降,分别为(2109.9±425.2)μg/ml(P〈0.01)和(1758.9±429.2)μg/ml(P〈0.05)。实验组肝细胞移植前血浆纤溶酶水平为(5.16±0.42)μg/ml,移植后下降至(2.96±0.11)μg/ml(P〈0.01)。实验组肝细胞移植前血浆α2M水平为(152.4±27.6)mg/ml,移植后升高至(343.0±48.8)mg/ml,为移植前的2倍,而移植对照组的α2M水平移植后升高30余倍。结论肝细胞移植能有效改善大鼠肝纤维化,其机制可能与肝内活性星形细胞减少及TGF-β1水平降低有关。 常实 王宪伟 黄云 龚学军 周军 彭创 汤恢焕关键词:细胞移植 肝细胞 纤维化 转化生长因子Β miR-342-5p调控靶基因Merlin表达促进肝细胞癌侵袭转移的实验研究 被引量:3 2014年 目的:探讨miR-342-5p及其可疑靶基因Merlin在肝细胞癌(HCC)中表达及意义。方法:用qRT-PCR检测miR-342-5p和Merlin mRNA在HCC组织与癌旁组织,以及正常肝细胞系与各种不同HCC细胞系中的表达;用重组慢病毒包装质粒pGCSIL-GFP-miR-342-5p或空载体(阴性对照)转染HCCLM3细胞,以无处理的HCCLM3细胞作为空白对照,划痕愈合及Transwell实验观察细胞侵袭运动能力;Western blot法检测细胞中Merlin蛋白的表达。采用双荧光素酶基因报告系统,将含野生型或突变型Merlin基因3'UTR质粒(psiCHECK-Merlin)分别与pGCSIL-GFP-miR-342-5p、空载体(阴性对照)共转染或单独转染(空白对照)HCCLM3细胞后,检测各组细胞荧光素酶活性。结果:与癌旁组织比较,HCC组织中miR-342-5p表达明显上调,Merlin mRNA表达明显下调(均P<0.05);HCC组织中,血管侵犯组较无血管侵犯组miR-342-5p表达明显上调,Merlin mRNA表达明显下调(均P<0.05),且miR-342-5p与Merlin mRNA表达呈负相关(r2=5.364,P<0.05)。各HCC细胞系中miR-342-5p表达均明显高于正常肝细胞系,且miR-342-5p的表达随HCC细胞系的侵袭性增高而上调,而Merlin mRNA表达则呈相反趋势(均P<0.05)。与空白对照组及阴性对照组比较,HCCLM3细胞转染pGCSIL-GFP-miR-342-5p质粒后,细胞侵袭运动能力明显下降(均P<0.05),而Merlin蛋白表达明显上调。psiCHECK-Merlin野生型与pGCSIL-GFP-miR-342-5p质粒共转染HCCLM3细胞后,细胞的荧光素酶活性较其阴性对照组或空白对照组明显降低(P<0.05),而psiCHECK-Merlin突变型与pGCSIL-GFP-miR-342-5p质粒共转染HCCLM3细胞后,细胞的荧光素酶活性与其空白对照组或阴性对照组无统计学差异(P>0.05)。结论:Merlin是miR-342-5p的靶基因,miR-342-5p可能通过调控MerlinmRNA的表达促进肝细胞癌侵袭转移。 胡宽 陶一明 黄云 李新营 王志明关键词:肝细胞 微RNAS MERLIN 肿瘤侵润 45例甲状旁腺肿瘤临床分析 被引量:11 2013年 目的:探讨甲状旁腺肿瘤的诊断、术前定位、外科治疗及预后。方法:对2001年—2012年间收治的45例甲状旁腺肿瘤病例的临床资料进行回顾性分析。结果:全组45例甲状旁腺肿瘤术前均通过B超和或CT、99mTc-MIBI检查得以定位,阳性率分别为86.7%,93.8%,100%。45例均行手术治疗,均为单发肿瘤,其中左上7例,左下23例,右上4例,右下11例。术后病理证实39例为腺瘤,1例腺癌和5例囊肿。囊肿均为非功能性,腺瘤、腺癌均伴原发性甲状旁腺功能亢进(PHPT)。术前PHPT患者均有不同程度的血钙升高和血磷降低,其中24例甲状旁腺激素(PTH)升高;术后血钙明显下降,血磷明显上升(均P〈0.05),1周至3个月恢复正常,PTH明显降低(P〈0.05),22例术后1~5 d即正常,2例1年后正常。术中PTH(IOTPH)判断腺瘤成功切除率100%。40例获随访3个月至10年,均无复发和病灶遗漏。结论:甲状旁腺肿瘤起病缓慢,临床表现复杂多样。血钙、血磷以及血PTH的检测有助于PHPT的诊断;B超可作为甲状旁腺肿瘤的术前定位的首选检查,联合CT和99mTc-MIBI核素扫描能提高定位率;手术治疗为甲状旁腺肿瘤的首选治疗方法,效果良好。 夏发达 梁慧文 李劲东 黄云 王卓路 冯铁成 周宇帆 王志明 李新营关键词:甲状旁腺肿瘤 外科学 甲状旁腺功能亢进症 绕肝提拉法在联合肝脏离断和门静脉切断二步肝切除术中的应用 被引量:10 2015年 目的:探讨绕肝提拉法(LHM)在联合肝脏离断和门静脉切断二步肝切除术(ALPPS)中的应用效果。方法:回顾性分析4例原发性肝细胞癌行ALPPS术患者临床资料,其中肝右叶肿瘤3例,肝尾状叶肿瘤1例,均采用LHM法导引的一期左、右肝脏原位劈离,右门静脉切断;二期行肿瘤完整切除。结果:4例均预先游离肝脏,成功安置弹力带,顺利实施二期肝切除术;一期手术时间195~273(232.2±35.3)min,术中失血420~1 210(735±344.3)m L,并发胆瘘1例;二期手术时间98~186(139.5±36.6)min,术中失血100~320(197.5±95.3)m L;无手术死亡;术后随访3个月,3例情况良好,1例术后2个月复发死亡。结论:LHM法对于下腔静脉的保护,充分显露左右肝动脉、肝静脉、肝内胆管有较好的效果,可常规适用于肝肿瘤ALPPS二步肝切除术。 王志明 胡宽 苌群刚 黄云 周乐杜 李新营 李劲东 陶一明关键词:肝肿瘤 肝切除术 绕肝提拉法 人PPFP基因的重组慢病毒载体的构建和表达 被引量:7 2009年 目的构建含人PAX8/PPARγ融合基因(PPFP)基因重组慢病毒载体并检测其表达性能。方法从已构建好的含PPFP的质粒克隆模板PEGFP—C—PPFP中,利用聚合酶链反应(PCR)方法钓取目的基因PPFP,将该基因克隆到慢病毒载体表达质粒pGC—FU(含Flag基因)中,得到重组的pGC—FU—PPFP,通过PCR、酶切、测序和分析比对验证PPFP基因后,将pGC—FU—PPFP质粒和包装质粒pHelper1.0、pHelper2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞株293T细胞,获得携带PPFP基因和Flag基因的重组慢病毒,收集并浓缩病毒上清液,测定重组病毒的滴度。通过Western blot鉴定PPFP—Flag融合蛋白在靶细胞内的表达进一步验证目的基因在靶细胞中的表达。结果经PCR扩增获得2591bp的目的基因片段,构建的重组质粒经PCR、酶切及测序和分析比对鉴定正确;该质粒与包装质粒共转染293T细胞获取的慢病毒滴度达3.5×10^7转导单位TU/ml;感染的293T细胞,Western blot结果显示条带大小为90KDr,可判断目的基因PPFP在293T细胞中表达。结论成功构建PPFP基因慢病毒载体质粒pGC—FU—PPFP,并建立慢病毒过表达系统。 王志明 刘剑鸣 李萃 段朝军 黄云 李新营关键词:慢病毒载体 滤泡状甲状腺癌 新医科背景下基础与临床融合式教学的研究与实践 2024年 为探索新医科背景下医学人才培养新模式,中南大学湘雅医学院积极推动临床五年制教育教学改革,在基础医学学科和临床学科协同开展系统性研究,从教育理念、教学内容、教学模式、教学资源、评价体系等方面进行改革实践,构建以知识整合为抓手的基础-临床融合式教学模式,建设优质共享资源,多学科整合与渗透、多种教学方法并用,为培养卓越医学人才综合素质提供了新思路。 王颖 曾乐平 黄云 唐荣 李忠魁关键词:课程整合 教学改革 肝脏恶性肿瘤射频消融术后即刻超声造影的临床价值 被引量:14 2017年 目的:探讨肝脏恶性肿瘤射频消融(RFA)后即刻超声造影(CEUS)的临床价值。方法:将中南大学湘雅医院收治的60例肝脏恶性肿瘤患者(76个病灶)随机分为试验组与对照组,每组30例(试验组41个病灶,对照组35个病灶)。两组均采用超声实时引导下经皮RFA治疗,试验组于RFA后即刻(5~10 min内)行CEUS,若发现肿瘤残存则行补充消融治疗,至造影检查无肿瘤残存时结束;对照组RFA后不做即刻CEUS。试验组患者术后36~48 h复查CEUS,所有患者术后1个月复查CEUS及增强CT或增强MRI、肝功能及肿瘤标志物。结果:试验组患者RFA术后即刻CEUS发现5例患者共5处病灶有残存,对残存肿瘤行补充治疗。两组患者1个月后复查,试验组发现1处病灶残存(1/41),对照组发现7处病灶残存(7/35),试验组与对照组的完全消融率差异有统计学意义(96.7%vs.80.0%,P<0.05)。试验组患者RFA后即刻及36~48 h CEUS动脉期所测射频灶周围充血水肿带的宽度分别为(6.89±2.73)mm、(4.68±2.05)mm,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:肝脏恶性肿瘤RFA治疗后即刻CEUS能及时发现残存肿瘤并指导补充治疗,有效提高完全消融率。 谢璐璐 廖锦堂 李悦怡 黄云 周乐杜 李文政 龙学颖关键词:肝肿瘤 消融技术 超声检查 原位肝移植治疗Wilson病术前漏诊布加综合症1例分析 被引量:4 2007年 笔者回顾分析1例行原位肝移植治疗肝豆状核变性病(Wilson病)并布加综合征的临床资料。患者28岁,女性,Wilson患者,接受背驮式原位肝移植,术后出现顽固性腹水及双下肢水肿,经彩超、下腔静脉造影证实为布加综合症,予以经股静脉下腔静脉球囊扩张及支架植入。治疗后恢复顺利,现已术后11个月,患者情况良好。提示对于Wilson病合并布加综合症者,在肝移植术前行介入治疗是一种有效的选择,尤其对下腔静脉病变位置靠近右心房者。 周乐杜 王志明 汤恢焕 黄云 李劲东 吕新生 鄢建勤 郭曲练 李刚 李海平关键词:肝移植 甲状腺癌的外科治疗:附487例报告 被引量:27 2010年 目的探讨甲状腺癌的诊断、治疗以及手术并发症的防治等。方法对1990年3月—2006年7月收治的487例甲状腺癌手术治疗的临床资料进行回顾性分析。结果术前和术中诊断甲状腺癌分别为279例(57.3%)和162例(33.3%),术后确诊46例(9.4%);再次手术140例(28.7%),发现残癌79例(56.4%);487例手术患者无1例院内死亡,17例术后出现短暂性声嘶,2例永久性声嘶,14例出现低钙抽搐或肢端麻木。413例患者获随访,其中颈部淋巴结复发者33例,局部复发者24例,远处转移者17例。分化型甲状腺癌,髓样癌和未分化癌术后5年生存率分别为99.8%,95.8%和87.0%。结论甲状腺结节伴钙化者应怀疑甲状腺癌可能,术中冷冻快速切片有助于甲状腺癌的诊断和术式的选择。应充分重视首次手术,术中应常规显露喉返神经。术后患者坚持终生服用甲状腺素片有助于预防复发和转移。 李新营 王志明 黄云 陆晔斌 李劲东 周乐杜 张鸽文 吕新生关键词:颈淋巴结清扫术 预后