田国忠
- 作品数：9 被引量：10H指数：2
- 供职机构：北京市虹天济神经科学研究院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市优秀人才培养资助更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 来源于人胚室下区神经干/祖细胞的贴壁法培养和鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的建立有效的人胚胎神经干/祖细胞分离及纯化方法以达到临床需要。方法无菌取胎脑室管膜下区组织,经反复机械吹打制备细胞混悬液,采用贴壁法进行体外培养、传代。传代后用Nestin进行细胞鉴定。结果应用贴壁法进行胎脑室管膜下区神经干/祖细胞的培养能够稳定传代20代以上;共聚焦显微镜下可见Nestin阳性细胞表达呈递增趋势,传至P3(passage3)阳性率为35%,P7为79%,P12为90%,P15为99%。传到前七代时分别做细胞存活率鉴定,可达(82.57±1.38)%。结论成功建立了来源于人胚室下区的神经干/祖细胞的贴壁法培养,为该细胞移植治疗神经系统疾病提供了技术方法支持。
- 姜晓荣王洪美陈琳田国忠包建玲任玉水黄红云郗海涛
- 关键词：细胞培养人胚胎免疫细胞化学
- 两种冻存液中海马神经元细胞复苏后生物学特性比较
- 2010年
- 目的：建立海马神经元适宜的冻存方法。方法：将新生24h以内的大鼠海马消化成单个细胞后分别直接冻存于血清浓度不同的冻存液中，复苏后进行台盼蓝染色观察细胞活性；培养后观察其生长状态并在第7天固定细胞，分别进行Hoechst，微管蛋白（Tubulin）和神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）显色后，荧光显微镜下计数海马神经元、胶质细胞的百分率，从而建立最佳冻存方法。结果：冻存于高浓度血清冻存液中的神经元百分率为87．5％，冻存于低浓度血清冻存液中的神经元百分率为73．8％，高浓度血清冻存液中的细胞复苏后的状态及神经元存活率明显优于保存于低浓度血清冻存液中的；而冻存于高低浓度血清冻存液中的胶质细胞百分率分别为9．5％和16．5％，胶质细胞在高浓度血清的相对含量明显低于低血清组。结论：高浓度血清冻存液更利于海马神经细胞冻存后的复苏和生长。
- 王洪美胡琴肖娟姜晓荣赵艳廷曹敬丽任玉水田国忠黄红云
- 关键词：海马神经元冻存微管蛋白神经胶质纤维酸性蛋白
- 人胚胎嗅鞘细胞移植供、受者HLA配型方法介绍
- 陈琳方明俊黄红云王洪美姜晓荣任玉水田国忠
- 人类胚胎嗅球嗅鞘细胞质量标准被引量：4
- 2008年
- 为严格控制人类胚胎嗅鞘细胞培养和临床使用准备过程中诸多环节的质量,制定了人类胚胎嗅球嗅鞘细胞培养操作规范。因为完善的操作流程,可以最大限度的减少人为因素,确保细胞质量的稳定性。所以对嗅鞘细胞来源的标本要求,要严格规定人类胚胎嗅球嗅鞘细胞培养过程中的实验室条件以及细胞培养的规范,对操作中关键步骤进行严格规范要求,质控嗅鞘细胞冻存和复苏过程,提出细胞培养中微生物污染的检测方法,减少应用风险,为人类胚胎嗅球嗅鞘细胞临床使用提供高质量保证。
- 任玉水田国忠王洪美黄红云陈琳
- 关键词：嗅鞘细胞胚胎嗅球细胞培养
- 人胚嗅球嗅鞘细胞原代培养的实验研究被引量：2
- 2010年
- 目的拟建立人胚胎嗅球嗅鞘细胞的培养方法并探讨这些细胞在活性、纯度方面是否具备临床应用水平。方法用含有促进细胞生长的谷氨酰胺、转铁蛋白、生物素、硒酸纳的无血清纯化液纯化嗅鞘细胞,胰蛋白酶消化收集细胞,制成单细胞悬液。采用台盼蓝染色法进行活性测定,P75NGFR和S-100双标免疫荧光染色鉴定,以Hoechst复染鉴定OECs的纯度。结果可见比较典型的嗅鞘细胞:双极或梭形、多突起形和扁圆形,主要以梭形和多突起形细胞为主。细胞活性大于95%,纯度大于90%。结论实验建立的人胚胎嗅球嗅鞘细胞原代培养的方法可行,细胞活性大于95%,纯度和均一性已达到临床应用水平。
- 任玉水闫军浩王洪美陈琳黄红云周长满姜晓荣田国忠
- 关键词：嗅鞘细胞细胞培养纯化免疫荧光人胚
- 成人鼻腔嗅区黏膜细胞的分离培养与免疫学特点被引量：1
- 2010年
- 目的探讨成人鼻腔嗅区黏膜细胞的分离培养方法及嗅鞘细胞(OECs)的免疫学特点。方法通过手术取成人嗅区黏膜7例,将其消化为单个细胞后采用差速贴壁法除去成纤维细胞。倒置显微镜下行形态学观察,并利用p75、S100、GFAP抗体对嗅鞘细胞进行免疫荧光化学染色,共焦显微镜下进行各种抗体阳性率的统计。结果共焦显微镜下可见嗅黏膜细胞中S100和p75阳性细胞多见,GFAP阳性细胞在嗅黏膜细胞中较少见。一般在同一细胞上可见S100和p75共同表达,而GFAP与S100、p75未见有共同表达现象;p75阳性细胞胞体大小和形态也大不相同。经统计S100和p75阳性细胞的平均百分率为(35.0±8.3)%。结论成功进行了成人鼻腔嗅区黏膜细胞的分离培养。
- 王洪美任玉水田国忠姜晓荣曹敬丽刘婧媛周长满黄红云
- 关键词：嗅鞘细胞P75S100细胞移植
- 人骨髓基质细胞培养、纯化和鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的：介绍一种为临床细胞学治疗提供自体骨髓基质细胞（BMSCs）的分离纯化方法。方法：采用红细胞沉降和密度梯度离心相结合的分离纯化方法从骨髓血中分离BMSCs。台盼蓝染色实验测定BMSCs活力；对BMSCs进行CD44、CD34抗体免疫荧光显色，激光共聚焦显微镜观察。结果：BMSCs活性大于95％，纯度大于85％，细胞的纯度和均一性均符合中国卫生部第三类医疗技术的要求，已达到临床应用标准。结论：本细胞制备方法简单易行，可批量获得BMSCs，满足临床治疗的需要。
- 田国忠闫军浩黄红云周长满陈琳王洪美姜晓荣任玉水
- 关键词：骨髓基质细胞纯化免疫荧光
- 胚胎嗅鞘细胞和中脑腹侧细胞移植对帕金森病SD大鼠纹状体神经元存活和分化的影响
- 2010年
- 目的观察胚胎嗅球嗅鞘细胞(OECs)和胚胎中脑腹侧细胞(VMCs)联合移植对帕金森病(PD)SD大鼠纹状体神经元存活及分化的影响。方法 12只PD模型SD大鼠随机平均分成两组:单独VMCs组(在脑立体定位仪下将VMCs植入PD大鼠模型毁损侧纹状体内)和联合移植组(在脑立体定位仪下将OECs和VMCs植入PD大鼠模型毁损侧纹状体内)。OECs来源于5～7d绿荧光鼠的嗅球嗅鞘,VMCs来源于孕13～14d绿荧光胎鼠中脑腹侧的脑组织。于移植后4、14周灌注取脑,切片后做酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学染色,检测胚胎中脑腹侧细胞的存活及分化状况。结果移植4周后单独VMCs组及联合移植组纹状体区都可检测到TH免疫阳性神经元,数量无统计学差异(P>0.05)。移植14周后联合移植组纹状体区TH免疫阳性神经元数量比单独VMCs组明显增多(P<0.05)。结论胚胎中脑腹侧细胞联合嗅鞘细胞移植入帕金森病大鼠纹状体促使纹状体神经元分化为多巴胺能神经元。
- 任玉水陈琳黄红云周长满刘佳肖娟王洪美郗海涛田国忠
- 关键词：嗅鞘细胞帕金森病酪氨酸羟化酶SD大鼠
