袁凤媚
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 供职机构：暨南大学生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：广东省重大科技专项广州市重大科技专项计划项目广东省教育部产学研结合项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- HEK293F细胞瞬时表达PDGFR-β/Fc蛋白的条件优化被引量：3
- 2015年
- 为优化HEK293F细胞瞬时转染条件,提高PDGFR-β的蛋白表达量,采用聚乙烯亚胺(Polyetherimide,PEI)为转染试剂,将质粒p XLG-PDGFR-β/Fc与PEI混匀聚合后加入到细胞悬液,37℃,φ=6%CO2,180 r/min悬浮振荡培养,培养7 d后收集样品,ELISA检测PDGFR-β蛋白的浓度。对细胞密度、DNA浓度和m(DNA):m(PEI)、聚合时间以及添加物(丙戊酸钠、葡萄糖和蛋白胨)进行优化。结果显示,HEK293F细胞瞬时转染的最佳条件为:细胞密度4×106cells/m L、DNA浓度2.0μg/106cells、m(DNA):m(PEI)为1:2、聚合时间5 min。同时,48 h内添加3 mmol/L丙戊酸钠,第3天补加葡萄糖和1 g/L的蛋白胨TN1可使PDGFR-β/Fc的蛋白表达量明显提高。实验表明,经过对HEK293F细胞瞬时表达PDGFR-β的转染条件的优化,蛋白表达量可达55 mg/L,为更大规模瞬时转染生产PDGFR-β/Fc蛋白奠定了基础。
- 洪坡袁凤媚黄嘉慧刘东晨张途谢秋玲
- 悬浮培养昆虫细胞SF9瞬时表达重组蛋白的条件优化(英文)
- 2014年
- 瞬时基因表达(TGE)是一种省去筛选高表达细胞株步骤,快速获得重组蛋白质的技术。昆虫细胞作为一种广泛使用的蛋白表达系统,在国内外关于它的瞬时基因表达的研究比较少。这篇文章进行了以昆虫SF9细胞在悬浮培养条件下进行瞬时表达eGFP和肿瘤坏死因子受体融合蛋白(TNFR-Fc)的条件优化,以期为外源蛋白在昆虫细胞中瞬时表达打下基础。经优化后,转染效率达到37%,重组TNFR-Fc达到700μg/mL。
- 袁凤媚郭欣泳汪才坤卢加谢秋玲
- 关键词：质粒DNA聚乙烯亚胺转染绿色荧光蛋白
- CHO-DG44细胞瞬时转染条件的优化被引量：2
- 2013年
- 目的优化CHO-DG44细胞瞬时转染的条件。方法采用TubeSpin一次性生物反应器,以绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)为报告基因,氯醚酰亚胺(Polyether imide,PEI)为转染试剂,将质粒pIRESneo3-eGFP瞬时转染CHO-DG44细胞,优化瞬时转染的基本条件[细胞密度、DNA浓度和DNA:PEI比例(w/w)]以及其他条件(换液、渗透压和温度),采用优化的条件转染质粒pIRESneo3-eGFP,流式细胞术检测细胞转染效率,生物发光仪检测相对荧光强度。结果 CHO-DG44细胞瞬时转染的最佳条件为:采用XLG-P8培养基进行转染,细胞密度为2×106个/ml,DNA浓度为6.25μg/5 ml,DNA∶PEI(w/w)比例为1∶5;转染后4 h更换新鲜培养基,添加30 mmol/L NaCl,并于31℃继续培养。在此条件下,CHO-DG44细胞的瞬时转染效率可达81.45%,相对荧光强度可达9×105RFU/106cells。结论优化了CHO-DG44细胞瞬时转染的条件,为下一步药物蛋白的研发奠定了基础。
- 黎美香陈先金王晓慧王亚玉袁凤媚汪才坤谢秋玲
- 关键词：转染
