洪坡
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
- 供职机构：暨南大学生命科学技术学院广东省生物工程药物重点实验室更多>>
- 发文基金：广东省重大科技专项广东省战略性新兴产业核心技术攻关项目“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 重组抗HER2人源化单克隆抗体的瞬时表达及其抗肿瘤活性被引量：2
- 2016年
- 利用HEK293F细胞瞬时表达重组抗HER2人源化单克隆抗体(rh HER2-m Ab),优化转染条件,并初步鉴定纯化后的抗体抗肿瘤活性。分别构建rh HER2-m Ab重、轻链表达载体(p CMV-HC和p CMV-LC),采用聚乙烯亚胺(PEI)为转染试剂,共转染重、轻链质粒到HEK293F细胞中进行表达。采用Protein A亲和色谱纯化抗体,以WST-8法检测其体外抗肿瘤效果。经优化后,HEK293F细胞瞬时表达rh HER2-m Ab的最佳条件为:细胞接种密度4×106 cells/ml,DNA浓度2.0?g/106 cells,DNA∶PEI为1∶2,重链∶轻链为1∶1,抗体表达量可达73.0 mg/L,抗体纯度大于98%。rh HER2-m Ab对高表达HER2的乳腺癌BT-474细胞抑制率为(72.3±2.0)%,对中表达HER2的乳腺癌SK-BR-3细胞抑制率约(32.1±1.2)%,但对低表达HER2的乳腺癌MCF-7细胞无显著抑制作用。细胞凋亡试验结果表明,相对于对照组,rh HER2-m Ab对BT-474细胞的凋亡率约25%,对SK-BR-3细胞则近15%。
- 刘东晨洪坡詹显龙夏倩坤谢秋玲
- 关键词：抗肿瘤活性
- HEK293F细胞瞬时表达PDGFR-β/Fc蛋白的条件优化被引量：3
- 2015年
- 为优化HEK293F细胞瞬时转染条件,提高PDGFR-β的蛋白表达量,采用聚乙烯亚胺(Polyetherimide,PEI)为转染试剂,将质粒p XLG-PDGFR-β/Fc与PEI混匀聚合后加入到细胞悬液,37℃,φ=6%CO2,180 r/min悬浮振荡培养,培养7 d后收集样品,ELISA检测PDGFR-β蛋白的浓度。对细胞密度、DNA浓度和m(DNA):m(PEI)、聚合时间以及添加物(丙戊酸钠、葡萄糖和蛋白胨)进行优化。结果显示,HEK293F细胞瞬时转染的最佳条件为:细胞密度4×106cells/m L、DNA浓度2.0μg/106cells、m(DNA):m(PEI)为1:2、聚合时间5 min。同时,48 h内添加3 mmol/L丙戊酸钠,第3天补加葡萄糖和1 g/L的蛋白胨TN1可使PDGFR-β/Fc的蛋白表达量明显提高。实验表明,经过对HEK293F细胞瞬时表达PDGFR-β的转染条件的优化,蛋白表达量可达55 mg/L,为更大规模瞬时转染生产PDGFR-β/Fc蛋白奠定了基础。
- 洪坡袁凤媚黄嘉慧刘东晨张途谢秋玲
