郭敏卓
- 作品数：24 被引量：59H指数：4
- 供职机构：北京出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家质检总局科技计划项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 抗肠道病毒EV71型外壳蛋白VP1单克隆抗体的制备和鉴定被引量：3
- 2009年
- 目的制备具有中和活性的抗肠道病毒EV71型外壳蛋白VP1的单克隆抗体。方法人工合成SP55和SP70（分别包含VP1的第163～177，208—222位氨基酸）两段VP1的多肽，分别免疫BALB／c小鼠，常规杂交瘤技术进行细胞融合，用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）筛选阳性杂交瘤细胞并测定效价。用分泌的单抗和EV71病毒在RD细胞上进行中和试验以检验其中和活性。结果得到2株能稳定分泌抗肠道病毒EV71型VP1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，2株单抗的中和效价分别为1：8和1：16。结论成功制备出2株具有中和活性的抗肠道病毒EV71型VP1蛋白单克隆抗体，为其下一步应用打下基础。
- 伊瑶郭敏卓沈心亮余陶贾志远毕胜利李秀玲陈斯勇
- 关键词：肠道病毒属酶联免疫吸附测定
- 乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）基因点突变对HBsAg抗原性的影响
- 论文小结:(1)获得了HBV adr和adw2亚型的S基因片段和前S1(21-47aa)基因片段拼接基因的两种重组野毒株HBsAg真核表达质粒:pSS1adw2及pSS1adr.(2)在真核细胞COS-7细胞中瞬时转染了...
- 郭敏卓
- 关键词：乙型肝炎病毒乙型肝炎表面抗原基因变异抗原性
- 文献传递
- 诊断用丁肝抗原的基因优化及其蛋白表达、纯化和鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的获取有生物活性的丁肝抗原蛋白，探讨其作为诊断试剂的应用价值。方法经密码子优化，合成人工编码的丁肝抗原基因序列；以M48作为表达载体，构建带有硫氧还蛋白的重组表达质粒；在大肠埃希氏菌中经IPTG诱导表达；以亲和层析纯化并以ELISA鉴定该蛋白。结果酶切鉴定构建的质粒正确；SDS—PAGE结果显示表达和纯化的外源蛋白与预期相对分子质量大小一致；ELISA鉴定该蛋白有与丁肝抗体特异性结合的活性。结论成功获得有生物活性的可供诊断用的丁肝抗原蛋白，为丁肝诊断试剂的研发奠定了基础。
- 丁军颖郭敏卓伊瑶苏秋东卢学新邱丰毕胜利
- 关键词：基因硫氧还蛋白
- b型流感嗜血杆菌D蛋白原核可溶性表达研究被引量：1
- 2013年
- 目的通过原核表达系统可溶性表达重组D蛋白，为多糖结合疫苗的制备提供蛋白载体。方法将HibCMCC株基因组DNA中去除信号肽的hpd基因片段插入pET43．1a表达质粒，转化人感受态大肠埃希菌BL21（DE3），IPTG诱导表达。表达的重组蛋白，经过硫酸铵沉淀和DEAE阴离子交换柱层析纯化后，用WesternBlot的方法鉴定其免疫反应原性。结果表达的重组蛋白以可溶性形式存在，表达量约占菌株总蛋白的44％，经过初步纯化后的重组蛋白可以和Hib抗血清发生特异性反应。结论成功构建了D蛋白重组表达质粒，并在原核细胞中以可溶性形式表达出具有良好免疫反应原性的D蛋白。
- 尹梦梦苏秋东郭敏卓寸怡娜普元倩贾志远杨景然汤洋廖国阳伊瑶毕胜利李卫东
- 关键词：蛋白质
- 自发生物素化风疹病毒重组诊断抗原的制备被引量：4
- 2016年
- 目的 获取原核表达过程中自发生物素化的风疹病毒（Rubella Virus,RV）重组抗原E1（RV-E1）,并初步评价其抗原性.方法 将2×BirA酶底物（BSP）插入到RV-E1抗原优势表位区域aa 148-295的羧基端,硫氧还蛋白（Thioredoxin,TRX）插入到RV-E1的氨基端,密码子优化后全基因合成;在大肠埃希进行表达,并利用亲和层析和离子交换层析纯化获取生物素化的RV-E1抗原;利用Western Blotting技术对目的蛋白进行鉴定,并建立风疹病毒IgM抗体检测方法,初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力.结果 获取高度均质的生物素化的可溶性RV-E1抗原,WB实验表明目的蛋白不但可以被RV-E1抗原和TRX抗原单克隆抗体识别,而且可以被标记HRP的链霉亲和素所识别.分别对50份风疹病毒感染阳性血清、阴性血清和健康人血清进行检测,发现一致性优异.结论 RV-E1诊断抗原携带BSP,可以在大肠埃希菌表达过程中自发共价结合生物素分子,并可以作为新型诊断抗原应用于生物素-亲和素ELISA血清学检测中.
- 苏秋东郭敏卓邱丰贾志远卢学新孟庆玲田瑞光高燕毕胜利伊瑶
- 关键词：原核表达
- 人白细胞介素12在哺乳动物细胞中的稳定表达及其生物活性的研究被引量：2
- 2007年
- 目的采用遗传基因工程方法获得具有生物活性的人白细胞介素12，探索其治疗肿瘤和慢性肝炎的可行性。方法采用已克隆的国人IL-12基因序列，利用内部核糖体切人位点（IRES）完成IL-12P35、P40双亚基共表达载体的构建，通过转染CHODHFR缺陷细胞，双抗夹心ELISA法筛选阳性克隆，MTX加压扩增，PCR检测其基因整合，T淋巴细胞增殖和诱生γ干扰素实验检测其生物活性。结果获得了稳定高效表达人IL-12的工程细胞系，表达产物为70×10^3左右的糖蛋白。结论本研究得到的基因重组人IL-12具有良好的生物活性，有强的诱导产生γ干扰素的能力和诱导活化T淋巴细胞增殖能力。
- 焦宏远詹美云郭敏卓伊瑶丛郁田瑞光张文英毕胜利
- 关键词：白细胞介素12细胞系哺乳动物重组蛋白质类
- 常见乙型肝炎病毒表面抗原突变体的抗原性分析被引量：21
- 2003年
- 目的 研究乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原突变株和野毒株对表面抗体结合能力的差异 ,探讨免疫漏检基因变异株的机制及对策。方法 应用基因重组技术构建HBsAg常见基因突变株和野毒株表达质粒 ,分别在COS 7细胞中瞬时表达 ,定量后用常规HBsAg免疫诊断试剂盒检测 ,观察重组抗原与不同抗 HBs的结合能力。结果 T 12 6S变异与单克隆抗体的结合力增高 ,G 145R ,K 141E和 2株三位点同时变异株则明显下降 ,对M 13 3T变异与单克隆抗体的结合力影响不大。变异株与多克隆抗体的结合力也有变化 ,但仍能检测到大部分变异株抗原。结论 “a”抗原决定簇氨基酸的置换影响了HBsAg与抗 HBs的结合能力 ,并且氨基酸的置换位置和特性对抗原性的影响各有不同。因此 ,建议应用HBsAg多克隆抗体或开发研制“免疫逃逸突变株”的特异性抗体 ,以完善HBsAg免疫诊断试剂的抗体组成 。
- 白玉夏国良贾志远丛郁王晓黎郭敏卓詹美云
- 关键词：乙型肝炎乙型肝炎表面抗原病毒免疫学试验
- 高效表达乙型肝炎病毒表面抗原的CHO细胞株的建立
- 2013年
- 目的探索乙型肝炎病毒表面抗原（s）基因在CHO无血清细胞培养系统中的高效表达。方法构建包含乙肝病毒s基因的质粒，转染CHO细胞，经MTX筛选后对培养液上清中的表达产物进行血清学检测以及形态学的观察。结果获得了能高效稳定表达HBsAg的CHO细胞株，电镜下可观测到小球型和管型颗粒，ELISA检测表达产物滴度达到1：5000。结论成功构建高效表达乙型肝炎病毒s蛋白的CHO无血清培养细胞株，表达的HBsAg具有良好的抗原活性。
- 伊瑶郭敏卓田瑞光苏秋东卢学新邱丰周文亭贾志远毕胜利
- 关键词：细胞培养
- 程序死亡蛋白1基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2008年
- 目的克隆人程序死亡蛋白（PD-1）基因并构建PD-1蛋白的原核表达质粒，在大肠埃希菌中进行表达。方法用RT-PCR的方法从慢性乙肝患者外周血淋巴细胞总RNA中逆转录得到PD-1基因的eDNA，构建PD-1基因的原核表达质粒，在大肠埃希菌BL21（DE3）中进行表达并纯化。用SDS-PAGE、DNA测序、氨基酸测序等方法对表达蛋白进行鉴定。结果克隆到PD-1基因编码区全长序列eDNA，经DNA测序与已报道的序列同源性达99.8％。构建得到PD-1的原核表达质粒，并在大肠埃希菌中表达，纯化获得纯度较高的PD-1蛋白。氨基酸测序证明表达蛋白的正确性。结论成功克隆人PD-1基因，在大肠埃希菌中获得表达，得到纯化的PD-1蛋白，为进一步研究PD-1蛋白的功能及应用打下基础。
- 陈斯勇关坤萍郭敏卓伊瑶贾志远余陶郭瑜毕胜利
- 关键词：逆转录聚合酶链反应基因克隆分子
- 乙型肝炎病毒表面抗原基因点突变对HBsAg抗原性的影响被引量：1
- 2008年
- 目的研究乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）常见基因点突变对HBsAg抗原性的影响，了解我国目前常用的HBsAg检测试剂对HBVS基因突变株的检测灵敏性，减少漏检，有效控制乙肝病毒（HBV）感染的传播。方法构建HBsAg重组野毒株和重组变异株表达质粒，分别将重组野毒株HBsAg表达质粒pSS1adw2及pSS1adr和重组变异株HBsAg表达质粒pSS1adw2-145Arg、pSS1ad-126Ser和pSS1adr-126Asn转染COS-7细胞，进行瞬时转染。采用市售HBsAg ELISA检测试剂盒对细胞上清进行抗原性检测。结果野毒株HBsAg和两种126位变异株HBsAg具有较好的抗原性；145位点突变后导致HBsAg的抗原性下降。结论推测是由于145位点变异影响了“a”抗原决定簇的空间结构，从而降低了其与抗-HBs的结合能力。
- 郭敏卓伊瑶陈斯勇白玉贾志远毕胜利
- 关键词：肝炎病毒乙型乙型抗原
