马文斌
- 作品数：6 被引量：25H指数：3
- 供职机构：宁夏医科大学检验学院更多>>
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- ABCA1、ACAT1 DNA甲基化在Hcy致THP-1单核源性泡沫细胞胆固醇流出中作用研究被引量：9
- 2014年
- 目的探讨ABCA1、ACAT1 DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)致THP-1单核源性泡沫细胞胆固醇流出中的作用。方法复制泡沫细胞模型,用50、100、200、500μmol·L-1Hcy和100μmol·L-1Hcy+叶酸+维生素B12(100+F+V)干预,并设对照组(0μmol·L-1Hcy)。油红O染色观察泡沫细胞形成,巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测ABCA1、ACAT1 DNA甲基化水平,并分析两者比值变化;ELISA-like法检测DNA甲基转移酶(DNMTs)活性;化学比色法分析细胞内胆固醇含量。结果成功复制了泡沫细胞模型;给予不同浓度Hcy刺激后,ABCA1 DNA甲基化改变呈上升趋势,ACAT1 DNA甲基化改变呈下降趋势,给予100+F+V干预后可逆转上述变化,其中ABCA1 DNA甲基化改变更明显;同时,不同浓度Hcy可使泡沫细胞内DNMTs活性和胆固醇含量增加。结论 ABCA1和ACAT1 DNA甲基化的改变参与了Hcy致THP-1单核源性泡沫细胞胆固醇流出,DNMTs可能起关键调控作用。
- 杨安宁王磊周龙霞赵丽王艳华蔡欣曹成建杨程陈久凯马文斌姜怡邓
- 关键词：酰基辅酶ADNA甲基化胆固醇流出
- 高同型半胱氨酸血症通过内质网应激抑制ApoE敲除鼠肾脏CFTR的表达被引量：1
- 2015年
- 目的探讨高同型半胱氨酸血症通过内质网应激抑制载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)鼠肾脏囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR)的表达。方法实验分组:正常对照组(n=6):选择健康5周龄雄鼠(SPF级C57BL/6J),饲以正常饮食。另选5周龄雄性纯合子Apo E-/-鼠(SPF级近交系c57BL/6)18只,随机分为3组,每组6只:Apo E-/-对照组、高蛋氨酸组、干预组,分别给予正常饮食、高蛋氨酸饮食、高蛋氨酸饮食加0.006%叶酸及0.0004%维生素B12。喂养14周后眼球取血,分离血清,用酶联免疫吸附法检测血清同型半胱氨酸水平;实时定量荧光PCR检测小鼠肾脏CFTR、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、活化转录因子6(ATF6)、蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、C/EPB同源蛋白(CHOP)mRNA的表达以及免疫组织化学法检测小鼠肾脏CFTR蛋白的表达。结果Apo E-/-对照组、高蛋氨酸组及干预组中血清同型半胱氨酸水平均增加,其中以高蛋氨酸组增加最显著(P<0.01)。实时定量荧光PCR结果显示,高蛋氨酸组CFTR mRNA的表达较正常对照组和Apo E-/-对照组显著降低(P<0.01,P<0.05),干预组CFTR mRNA的表达较高蛋氨酸组显著增加(P<0.01);免疫组织化学法检测CFTR蛋白的表达与其mRNA的表达变化一致。高蛋氨酸组GRP78、ATF6、PERK、CHOP mRNA的表达较正常对照组和Apo E-/-对照组显著增加(P<0.01),干预组GRP78、ATF6、PERK、CHOP mRNA的表达较高蛋氨酸组显著降低(P<0.01)。小鼠肾脏GRP78、ATF6、PERK、CHOP mRNA表达与CFTR mRNA表达的相关系数分别为:r=-0.7192,P<0.01;r=-0.5501,P<0.01;r=-0.7772,P<0.01;r=-0.6785,P<0.01。结论高同型半胱氨酸血症可能通过内质网应激抑制Apo E敲除鼠肾脏CFTR的表达。
- 马文斌张辉赵丽周龙霞陈久凯王艳华杨晓玲田珏张鸣号徐华姜怡邓
- 关键词：高同型半胱氨酸血症内质网应激
- ERO1α及其 DNA 甲基化在同型半胱氨酸抑制肝细胞增殖中的作用被引量：4
- 2014年
- 目的探讨内质网氧化还原酶-1α(endoplasmic reticulum oxidoreductin 1-α,ERO1α)及其DNA甲基化在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)抑制肝细胞增殖中的作用。方法以0μmol·L-1Hcy为正常对照组(NC group),以100μmol·L-1Hcy为干预组(Hcy group),干预肝细胞48h后,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测肝细胞增殖活力的变化;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western blot分别检测ERO1αmRNA和蛋白表达水平;构建ERO1α真核表达质粒,转染肝细胞后,荧光显微镜下观察转染效率并以qRTPCR及Western blot验证ERO1α是否过表达,后用MTT法检测肝细胞增殖活力的变化;巢式降落式甲基化特异性PCR(nt MS-PCR)检测ERO1αDNA甲基化水平。结果与正常对照组相比,Hcy干预组肝细胞内ERO1αmRNA及蛋白表达水平降低,且细胞增殖活力减弱(P<0.01)。测序结果证明ERO1α重组质粒构建成功,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白大量表达,qRT-PCR及Western blot验证结果显示ERO1α过表达(P<0.01),而MTT法结果表明ERO1α过表达可缓解Hcy导致的肝细胞增殖抑制(P<0.01)。Hcy刺激后ERO1αDNA甲基化水平升高(P<0.05)。结论 Hcy通过下调ERO1α表达抑制肝细胞增殖,而ERO1α启动子区DNA甲基化是其重要的调控机制。
- 赵丽曹成建刘现梅孔繁琪马文斌周龙霞陈久凯张鸣号焦运杨晓玲姜怡邓
- 关键词：同型半胱氨酸肝细胞增殖DNA甲基化
- THP-1单核细胞向泡沫细胞分化过程中FABP4表达量的变化
- 2015年
- 目的观察并检测脂肪型脂肪酸结合蛋白(FABP4)在THP-1单核细胞经巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中的表达改变及其DNA启动子区甲基化变化,探讨FABP4在单核源性泡沫细胞形成中的作用。方法体外培养THP-1单核细胞,分别经佛波酯(PMA)和氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导分化为巨噬细胞和泡沫细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测三种细胞中FABP4的mRNA和蛋白表达;巢式降落式甲基化特异性PCR(nt-MSP)法检测FABP4 DNA甲基化水平。结果 THP-1单核细胞经巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中,与单核细胞相比FABP4 mRNA表达量分别增加了3.87倍和2.08倍(P<0.01);蛋白表达量分别增加了1.21倍和0.69倍(P<0.01);各组之间FABP4甲基化水平无明显差异(P>0.05)。结论FABP4可能参与了THP-1单核细胞向巨噬细胞和泡沫细胞的分化过程,其机制可能与FABP4 DNA甲基化无关。
- 周龙霞陈久凯杨安宁张鸣号王艳华马文斌赵丽刘现梅姜怡邓曹军
- 关键词：单核细胞巨噬细胞泡沫细胞DNA甲基化
- NO水平下降通过氧化应激引起人胎盘滋养细胞凋亡被引量：10
- 2014年
- 目的探讨一氧化氮(NO)水平下降诱导人胎盘滋养细胞凋亡的可能机制。方法体外培养人胎盘滋养细胞株(HTR-8),分别加入10、100、500、1 000μmol·L-1L-NAME,并设置对照组(0μmol·L-1L-NAME),孵育48 h;四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测L-NAME对细胞存活率的影响;采用硝酸还原酶法测定细胞中NO的含量;利用透射电镜、流式细胞术和Annexin-V FITC染色检测L-NAME对HTR-8细胞凋亡的影响;Fe3+还原比色法检测总抗氧化能力(T-AOC)、黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性及硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量。结果与对照组比较,100、500、1 000μmol·L-1L-NAME组细胞存活率及NO水平明显降低(P<0.05,P<0.01);Annexin-V FITC染色和流式分析均显示L-NAME能诱导细胞凋亡,并且呈剂量依赖性;NO水平与细胞凋亡数呈负相关(r=-0.5210);透射电镜结果显示:与对照组比较,实验组细胞核形态不规则,核膜固缩呈不规则状,染色质凝集或边集,线粒体肿胀或浓缩、嵴断裂或溶解,甚至消失,形成空泡,尤其在100μmol·L-1L-NAME组可见凋亡小体;同时,HTR-8细胞内T-AOC、SOD水平明显降低(P<0.05),MDA的含量明显升高(P<0.05);细胞凋亡数与T-AOC(r=-0.3212)、SOD(r=-0.2779)水平均呈负相关,与MDA(r=0.2807)含量呈正相关。结论氧化应激在NO水平降低引起的人胎盘滋养细胞凋亡中起重要作用。
- 王艳华张慧萍田珏周龙霞陈久凯马文斌孔繁琪赵丽刘现梅韩学波杨晓玲姜怡邓
- 关键词：一氧化氮N-硝基-L-精氨酸甲酯凋亡氧化应激妊娠期高血压疾病
- 宁夏回族动脉粥样硬化患者外周血LCAT基因DNA甲基化与血脂水平的关系被引量：1
- 2015年
- 目的探讨宁夏回族动脉粥样硬化(AS)患者外周血中卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)基因启动子区甲基化水平及与血脂的关系。方法选择经颈部多普勒超声确诊的AS患者35例及正常者42例作为对照组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测外周血LCAT mRNA的表达,巢式降落式甲基化特异性PCR(nt-MSP)检测外周血LCAT基因DNA启动子区甲基化程度,全自动生化分析仪检测血脂水平。结果 AS组血清TC、TG和LDL水平显著高于对照组(P<0.001,P<0.001,P<0.05);HDL水平低于对照组;与对照组相比,AS组外周血LCAT mRNA表达降低了61.2%(P<0.01),同时LCAT基因甲基化程度升高了1.3倍(P<0.05)。结论回族AS患者外周血中LCAT DNA高甲基化与AS的发生发展和血脂变化相关。
- 陈久凯周龙霞王艳华马文斌赵丽刘现梅杨晓玲姜怡邓
- 关键词：卵磷脂胆固醇酰基转移酶DNA甲基化动脉粥样硬化血脂
