吴异健
- 作品数：103 被引量：186H指数：8
- 供职机构：福建农林大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金国家自然科学基金福建省科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生轻工技术与工程生物学更多>>
- 番鸭呼肠孤病毒σNS蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：7
- 2015年
- 为制备番鸭呼肠孤病毒(MDRV)YB株σNS蛋白的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了σNS基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-YB-σNS。将其转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示成功高效表达出分子质量约为58ku的融合蛋白。该融合蛋白以包涵体和可溶性蛋白两种形式存在,表达时的最佳诱导时间、IPTG诱导浓度、诱导温度分别为4h、1mmol/L和37℃。通过对包涵体和可溶性蛋白进行尿素洗涤纯化和(或)Ni 2+柱亲和层析纯化,得到了高纯度的重组蛋白。分别对纯化前、后的重组蛋白进行Western-blot分析,结果显示两者均可以与MDRV阳性血清发生特异性反应,表明它们具备良好的反应原性。将纯化后的可溶性σNS蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体ELISA效价达1∶32 000。上述研究结果为后续MDRVσNS蛋白功能研究奠定了基础。
- 朱二鹏崔龙萍吕小婷余深翼周五朵吴异健吴晓平吴宝成
- 关键词：番鸭呼肠孤病毒原核表达纯化多克隆抗体
- 鉴别滑液囊支原体MS-Y田间株与MS-H疫苗株多重PCR方法的建立
- 2023年
- 为了建立一种快速准确鉴别滑液囊支原体MS-Y分离株和活疫苗MS-H的方法,根据滑液囊支原体ppm和deoD基因的2个碱基突变位点序列,运用错配扩增突变分析(MAMA)PCR方法,设计了2对特异性引物和1对通用引物,用于扩增目的基因,通过优化反应条件,建立一种能同时鉴别出MS-Y和MS-H的多重PCR检测方法,并检测了该方法的特异性和敏感性。结果显示,利用特异性引物的多重PCR方法能同时鉴别滑液囊支原体MS-H活疫苗株和滑液囊支原体MS-Y分离株的DNA,分别扩增出相应的特异目的条带,检测MS-H株的最低敏感度为4.21×10^(5)copies/μL,检测MS-Y株的最低敏感度为6.47×10^(5)copies/μL;而利用通用引物对检测滑液囊支原体DNA的最低浓度为2.18×10^(3)copies/μL,检测MS-H DNA的浓度下限均为1×10^(5)CCU/mL,检测MS-Y DNA的最低浓度为1×10^(3)CCU/mL。本研究建立了一种能同时快速鉴别滑液囊支原体MS-H活疫苗株和MS-Y分离株的多重PCR方法。
- 张立根李娜赵妍黄宝钦罗忠宝吴异健
- 关键词：滑液囊支原体
- 鸡传染性法氏囊病病毒DK株VP2基因序列分析及其对SPF雏鸡的致病力被引量：2
- 2019年
- 为探究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)DK分离株的致病性和遗传变异情况,本研究测定了该分离株的鸡胚半数致死量(ELD50)、对SFP雏鸡的致病力以及扩增病毒的VP2基因并分析其序列。结果显示,DK分离株对鸡胚的ELD50为104.5/0.2mL,以2×10^3ELD50剂量感染SFP雏鸡出现典型IBD的临床症状、剖检和组织学病变;实验鸡发病率为100%,致死率为44.4%;DK株VP2基因序列与参考株的同源性为93.1%~97.0%、氨基酸序列同源性为93.6%~97.5%,其基因序列和氨基酸序列均与Cu-1wt参考株(经典株)同源性最高;DK株VP2氨基酸序列的七肽区SASWSGS及249Q、253Q、279D、284A、290M、313V、330S氨基酸位点均与强毒株的氨基酸位点一致;但其222P、256V、299N3个氨基酸不符合IBDV超强毒株的特征;而其第222、249位氨基酸为P和Q,与抗原变异株(vIBDV)的T和K也不相同。结果表明:IBDVDK株为中等偏强毒力病毒。本研究为IBD的防控提供参考依据。
- 雷赟赟林绍青刘秉珲于高博武琦周五朵黄宝钦吴异健
- 关键词：鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因克隆
- 鸡新城疫、传染性法氏囊病二联灭活疫苗免疫效果研究被引量：1
- 2017年
- 为了观察鸡新城疫(Newcastle disease,ND)、传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)二联灭活疫苗免疫效果,使用鸡新城疫、传染性法氏囊病(HQ株)二联灭活疫苗免疫1日龄SPF鸡与商品蛋鸡,分别于免后第7~91天,每隔1周采血1次,监测传染性法氏囊病毒中和抗体,同时进行传染性法氏囊病毒强毒攻毒,观察免疫后的法氏囊中和抗体消涨情况及不同日龄的攻毒保护情况。结果表明:SPF鸡组免疫后IBD抗体快速上升,免疫后2周法氏囊抗体达到10 lb左右,免疫后4周达到14 lb以上,抗体维持到免疫后第91天,从免疫后5周开始到7周攻毒保护率达到100%。而商品蛋鸡组IBD母源抗体在免疫后2周下降至10 lb左右,在免疫后4周抗体达到13 lb;免疫5周后攻毒保护率达到80%以上。说明鸡新城疫、传染性法氏囊病二联灭活疫苗免疫要在免后4周才能达到较好的保护效果。
- 江兴华林晓荣星东包松英吴异健王全溪
- 关键词：SPF鸡商品蛋鸡攻毒保护
- 猪圆环病毒2型2d基因型毒株的全基因组序列分析被引量：3
- 2017年
- 根据Gen Bank中猪圆环病毒2型(PCV 2)基因序列,设计特异性引物,用PCR方法从福州郊区某猪场疑似PMWS仔猪病料处理后接种育传三代的PK-15细胞中扩增1个分离毒株的全基因组,并将其克隆到p MD-18T载体上,对鉴定为阳性的重组质粒送检测序。对该分离株的基因全序列及其开放阅读框2(ORF2)进行同源性分析及遗传进化关系分析。PCR鉴定结果显示,本试验中分离到的病毒属于PCV2,命名为PCV2-FZ株。全基因组序列分析显示,分离株全基因组大小为1 767 bp,含有11个开放性阅读框,其中ORF2大小为705 bp,共编码234个氨基酸。PCV2-FZ株与参考毒株基因全序列的核苷酸同源性为94.3%~99.4%,与SD毒株同源性最高,为99.4%;与DK1980PMWSfree和DK1990PMWSfree毒株同源性最低,为94.3%。分离株与参考毒株ORF2核苷酸同源性为89.2%~99.4%,其中与SD毒株同源性最高,为99.4%,与DK1980PMWSfree毒株和DK1987PMWSfree毒株同源性最低,均为89.2%。全基因组与ORF2序列遗传进化树分析均表明,PCV2-FZ株属于PCV2d基因型。本研究从福建省首次分离并鉴定了1株PCV2d型毒株,这对PCV2流行病学研究和遗传变异分析具有重要意义。
- 吴异健陈强陈强叶财旺张英扬张英扬刘立荣李鸿文朱二鹏吴宝成
- 关键词：猪圆环病毒2型全基因序列
- 番鸭呼肠孤病毒YB株NS基因的序列分析及原核表达被引量：1
- 2017年
- 为实现番鸭呼肠孤病毒(MDRV)YB株NS非结构基因的克隆分析及原核表达,首先经RT-PCR扩增NS基因的完整编码序列(CDS),并将其克隆到p ET-32a(+)载体中。测序后对获得的NS基因进行核苷酸及氨基酸序列分析。将重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,进行IPTG诱导表达及条件优化。对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western-blot分析。测序结果显示,成功构建了包含MDRV-YB株NS基因的原核重组质粒p ET-YB-NS,并获取了NS基因序列。序列分析结果显示,MDRV-YB NS基因的CDS大小为1 908 bp,编码635个氨基酸;该基因核苷酸序列与传统MDRV的同源性为98.2%~99.4%。遗传进化树分析显示,MDRV-YB株处于传统型MDRV分支上。该蛋白氨基酸序列中并不含有潜在的信号肽序列,但是含有2个潜在的N-糖基化位点以及61个磷酸化位点。经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析显示,成功高效表达出分子质量约为88.7 ku的融合蛋白(p-NS),表达时IPTG最佳诱导时间、浓度和温度分别为5 h、0.4 mmol/L和36℃。Western-blot结果显示,表达的p-NS蛋白能特异性识别MDRV阳性血清,表明表达产物具备良好的反应原性。上述结果表明,MDRV NS非结构基因的克隆分析及其蛋白表达的实现,为进一步研究MDRV NS蛋白功能奠定了基础。
- 蔡栋灵张英扬陈强朱二鹏林琳刘珍妮骆钰黄烨敏李烨吴异健
- 关键词：番鸭呼肠孤病毒原核表达
- 我国番鸭呼肠孤病毒研究文献统计分析被引量：2
- 2019年
- 为了更好地认识我国番鸭呼肠孤病毒研究的现状,对2018年11月前中国知网数据库的177篇番鸭呼肠孤病毒研究文献的发表时间、发表刊物、研究机构、作者信息以及研究主题等进行统计分析。结果表明:目前番鸭呼肠孤病毒研究文献发表期刊整体质量较高,研究机构和作者以福建农林大学及福建省农业科学院畜牧兽医研究所占优势,对病原学、致病机理及分子流行病学等方面研究不够深入,对免疫学和防控技术的研究较为欠缺。
- 潘书磊黄一帆吴异健
- 关键词：番鸭呼肠孤病毒统计分析
- 放养土鸡非典型新城疫的病因分析及防控对策被引量：1
- 2015年
- 低发病率、低死亡率、高淘汰率、散发性的非典型新城疫是放养土鸡的主要疫病之一,其流行病学、临床症状、剖检病变等不同于传统典型新城疫,易被误诊,给土鸡养殖业造成巨大的经济损失。文中对放养土鸡非典型新城疫的流行特点、成因及防控措施等进行概述,以期为土鸡养殖业者提供参考。
- 高婷周五朵吴异健
- 关键词：放养土鸡非典型鸡新城疫发病原因
- 猴头菇多糖对MDRV感染番鸭血清中细胞因子及激素水平的影响被引量：5
- 2017年
- 为研究猴头菇多糖(HPS)对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)感染番鸭血清中的细胞因子及激素的影响,以探讨HPS对MDRV感染雏番鸭所致免疫抑制免疫调节作用。本试验借助已建立的MDRV自然感染模型进行HPS防治MDRV感染的试验,采用放射免疫测定方法检测试验番鸭血清中部分细胞因子和激素含量的动态变化。结果显示,MDRV感染能抑制番鸭机体分泌IL-1、IL-2、IL-4、生长激素(GH)、促肾上腺皮质激素(ACTH),在感染中后期促进试验番鸭机体分泌糖皮质激素(GC),引起免疫应答下降或停止;HPS预防用药可以促进MDRV感染番鸭分泌IL-1、IL-2和IL-4;维持ACTH含量的相对稳定,抑制MDRV感染番鸭GC含量的急剧升高,促进GH的分泌,调节神经-内分泌-免疫系统。研究表明,HPS预防用药可通过调节MDRV感染番鸭部分细胞因子和激素的分泌量,参与机体免疫调节的过程,缓解MDRV感染番鸭的临床症状及病理变化,降低死亡率,促进免疫抑制番鸭的康复,为HPS在临床上防治MDRV的研究提供理论依据。
- 郑玲红吴异健廖加磊蔡栋灵张英扬朱二鹏周五朵吴宝成黄一帆
- 关键词：番鸭呼肠孤病毒细胞因子激素
- 猴头菇多糖对MDRV感染RAW264.7细胞TLR3/TRIF诱导表达及病毒复制的影响被引量：1
- 2021年
- 试验旨在探究猴头菇多糖(HEP)预处理RAW264.7细胞对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)复制的影响及其机制,从Toll样受体3/β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TLR3/TRIF)信号通路解析HEP在调节MDRV所致的雏番鸭机体免疫抑制中的作用机制并提供体外试验参考。试验设空白对照组(BCG)、病毒感染对照组(VCG)、HEP对照组(HCG)和HEP预防病毒感染组(HPG),RAW264.7细胞在MDRV感染12和24 h后,通过Western blotting检测各组细胞中TLR3、TRIF和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)的蛋白表达量;病毒感染24 h后,用ELISA法检测各组细胞培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)、IL-6、IL-1β、干扰素-β(IFN-β)的含量。TCID50检测结果表明,MDRV病毒的TCID50为103.46。病毒感染后12 h,细胞未出现明显变化;病毒感染后24 h,细胞变圆;病毒感染后36 h,细胞大量死亡。MDRV在RAW264.7细胞中的复制结果显示,在感染病毒12~24 h内,σNS的表达量呈现上升趋势;在24~36 h,σNS的表达量维持在较高水平。Western blotting结果显示,与空白对照组相比,VCG组细胞TLR3、TRIF和TRAF6蛋白的表达量在感染后12和24 h均显著升高(P<0.05),HCG组TRIF蛋白的表达量均显著升高(P<0.05);与感染组相比,HPG组的σNS、TLR3、TRIF和TRAF6蛋白表达量在病毒感染12和24 h均显著降低(P<0.05)。ELISA检测结果显示,与空白对照组相比,VCG组细胞培养液中TNF-α、IL-6、IL-1β和IFN-β的含量均显著升高(P<0.05);与感染组相比,HPG组细胞培养液中TNF-α、IL-6、IL-1β含量均显著降低(P<0.05),IFN-β的含量显著升高(P<0.05)。结果表明,HEP可调节MDRV感染诱导RAW264.7细胞TLR3信号转导通路活化,抑制TLR3信号转导通路下游产物TNF-α、IL-10、IL-6和IL-1β的过度表达,同时上调IFN-β的表达,从而抑制MDRV在RAW264.7细胞中的复制。
- 严萍林绍青李明慧孙雪宁李健黄一帆黄一帆
- 关键词：番鸭呼肠孤病毒TOLL样受体3病毒复制
