周继文
- 作品数：23 被引量：163H指数：5
- 供职机构：解放军第302医院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 戊型肝炎病人血清抗-HEV IgG与IgM和HEV RNA的动态变化被引量：21
- 1998年
- 利用酶联免疫试验（ＥＩＡ）及逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），检测了２１０份急性非甲非乙非丙肝炎患者血清和４０例戊型肝炎（戊肝）病人系列血清。在急性非甲非乙非丙肝炎血清中，抗－ＨＥＶＩｇＧ、抗－ＨＥＶＩｇＭ和ＨＥＶＲＮＡ阳性率分别为６２．８６％、４５．２３％和４０．４８％。在戊肝系列血清检测中，抗－ＨＥＶＩｇＧ阳性率发病１个月内为９２．５％，发病２～６个月１００％，１２个月９４．７％，２４个月４８．６％。抗－ＨＥＶＩｇＭ阳性率发病１个月内为８０％，发病２个月５２．５％，６个月５％。抗－ＨＥＶＩｇＧ出现早，持续时间长，阳性率高。尽管大部分抗－ＨＥＶＩｇＭ阳性血清抗－ＨＥＶＩｇＧ也呈阳性，但也确有少数抗－ＨＥＶＩｇＧ为阴性的。结果表明，抗－ＨＥＶＩｇＧ检测是诊断戊肝感染最重要的方法。
- 戎广亚孙杰周继文任继明杨守纯
- 关键词：抗-HEVIGG抗-HEVIGM
- 抗SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备和初步应用被引量：6
- 2005年
- 目的:研制抗SARSCoVN蛋白的单克隆抗体(mAb)。方法:以纯化的GSTN免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗SARSCoVN蛋白mAb;用免疫双扩散鉴定Ig亚类;Westernblot和免疫组化鉴定mAb的特异性;间接ELISA检测mAb的腹水效价、相对亲和常数。结果:获得1株可分泌特异性mAb的抗SARSCoVN蛋白的杂交瘤细胞系3E10H,Ig亚类为IgG2b;其腹水效价为8×10-5;其相对亲和力1.725×10-10mol/L,Westernblot和免疫组化阳性。结论:获得特异性抗SARSCoVN蛋白的mAb,为进一步用于临床诊断和实验研究创造了条件。
- 孙杰文翠容戚扬李靖汪莉亚周继文程云
- 关键词：N蛋白单克隆抗体
- 新型戊型肝炎诊断试剂盒的研制及其应用被引量：7
- 1998年
- 用ＨＥＶＯＲＦ３合成肽及ＯＲＦ２重组抗原研制成新型ＨＥＶＥＩＡ诊断试剂盒。与ＧｅｎｌａｂｓＨＥＶＥＩＡ检测比较，灵敏度和特异性均达１００％（６０／６０）。三批试剂精密性测定均＜１０％。该试剂盒置４℃８个月或３７℃４ｄ保持稳定。检测不同肝炎患者ＨＥＶ抗体，发现急性非甲非乙非丙肝炎中有６３．２％，甲肝有１３．４％，乙肝有８．３％，丙肝有６．６％，正常人群为２．９％。所研制的戊型肝炎诊断试剂盒，灵敏度高，特异性强，精密性好，稳定性合格。
- 戎广亚孙杰周继文任继明张芳
- 关键词：戊型肝炎病毒试剂盒
- 人IL-10基因的克隆表达及表达产物活性的初步鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的:构建含人IL-10全基因序列的原核表达载体,并进行表达及产物活性的鉴定。方法:利用RT-PCR方法,从人肝癌细胞系HepG2的总RNA中扩增IL-10的全长编码序列。编码序列经测序验证后,将其克隆入表达载体PET-28 a(+),构建IL-10基因的重组原核表达载体。在大肠杆菌中诱导表达目的蛋白,表达产物采用Western blot和ELISA进行鉴定。结果:表达产物主要位于包涵体内。经Western blot分析和ELISA检测显示,表达产物的相对分子质量(Mr)同预期的结果相符,有结合抗体活性。结论:成功地扩增人IL-10全基因序列,并构建了含该基因序列的原核表达载体,在大肠杆菌中高效表达的表达产物具有抗原活性,为下一步制备抗IL-10的单克隆抗体(mAb)提供了必要的前提。
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- 关键词：IL-10克隆原核表达
- 重组抗原在戊型肝炎病毒感染诊断中的应用被引量：2
- 1997年
- 目的探讨重组抗原在戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）感染诊断中的应用。方法用ＨＥＶ重组抗原建立酶免疫试验（ＥＩＡ）检测肝病患者和健康人群血清中抗戊型肝炎病毒抗体（抗－ＨＥＶ）。结果５５份用新加坡ＤＢＬ公司抗－ＨＥＶ诊断试剂盒检测为抗－ＨＥＶ阳性的肝炎患者血清中，５３份（９６．４％）用本方法检测也为阳性；４５份ＤＢＬ试剂盒检测为抗－ＨＥＶ阴性的血清中，本法检测有３份为抗－ＨＥＶ阳性。检测甲、乙、丙型肝炎患者血清各３０份，抗－ＨＥＶ阳性率分别为１３．３％（４／３０）、１３．３％（４／３０）和１０．０％（３／３０）。健康人抗－ＨＥＶ阳性率为５．０％（８／１６０）。重组抗原与合成肽抗原混合用于ＥＩＡ，可以检出两种抗原单独阳性的抗－ＨＥＶ。结论以重组抗原为基础的ＥＩＡ特异性强、灵敏度高、快速简便。
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- 关键词：戊型肝炎HEV重组抗原
- 戊型肝炎病毒(HEV)合成肽及基因重组抗原免疫反应性研究被引量：1
- 1998年
- 用ＯＲＦ２、ＯＲＦ３合成肽抗原（１～１０号）及基因工程重组的ＯＲＦ２抗原（１和２号）分别建立了酶联免疫方法（ＥＩＡ），检测６０份戊型肝炎病人血清中ＨＥＶＩｇＧ及ＩｇＭ１０个合成肽抗原（Ｓｐ１－Ｓｐ１０）及２个重组抗原（Ｒｅ１、Ｒｅ２），均和ＨＥＶ阳性血清发生特异反应，但阳性率和反应强度差别很大。以Ｒｅ１（ＯＲＦ２，４０２～６６０）检测的抗体阳性率最高，为９６．７％（５８／６０）；Ｓｐ６（ＯＲＦ３，８８～１２３）次之，为９３．３％（５６／６０）；以上两种抗原混合使用阳性率为１００％（６０／６０）。Ｓｐ６、Ｒｅ１及这两种抗原混合使用检测抗ＨＥＶＩｇＭ，阳性率分别为１８．３％（１１／６０）、６６．７％（４０／６０）和６６．７％（４０／６０）。研究结果表明：合成肽６号（Ｓｐ６）及重组抗原１号（Ｒｅ１）是制备戊肝抗体诊断试剂的理想抗原。
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- 关键词：戊型肝炎病毒合成肽重组抗原免疫反应
- 重组抗原检测戊型肝炎病毒IgM抗体及其意义被引量：1
- 1997年
- 用戊型肝炎病毒(HEV)重组抗原建立酶联免疫吸附试验(ELISA)，检测肝炎患者和健康供血人群血清中抗戊型肝炎病毒IgM类抗体(抗-HEV IgM)，并评价其检测意义。在与合成肽抗原比较检测的77份急性戊型肝炎患者血清中，有54份(70.1%)由重组抗原捡测抗-HEV IgM阳性。其阳性率明显高于台成酞抗原(21/77,27．3％)。15例戊型肝炎患者双份血清用重组抗原ELISA检铡，急性期血清有11份抗-HEV IgM阳性，恢复期血清仅1份阳性。抗-HEV IgG阳性的健康供血者(8人)和甲、乙、丙型肝炎患者(11例)无1例IgM抗体阳性。结果表明，抗-HEV IgM可以作为戊型肝炎病毒新近感染的标志。HEV重组抗原检铡抗-HEV IgM敏感性高，特异性强，有助于戊型肝炎病毒感染的早期诊断。
- 周继文戎广亚孙杰任继明李红梅梁克为杨守纯
- 关键词：重组抗原抗-HEV戊型肝炎病毒IGM抗体IGM阳性
- 抗HBV Pres2单链抗体基因的构建、克隆、表达及鉴定
- 1997年
- 3B9是一株分泌HBV Pres2抗原的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞系。为了构建基因工程抗体并从分子水平分析3B9株McAb,我们用分子生物学技术提取3B9杂交瘤细胞总RNA,经反转录和聚合酶链式反应(PCR)技术分离获得了3B9McAb的轻、重链可变区基因(VL/VH)。
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- 关键词：重链可变区基因杂交瘤细胞系高效表达载体单链抗体基因
- 戊型肝炎病毒结构区基因的克隆表达及其在诊断中的初步应用被引量：2
- 1998年
- 目的研制戊型肝炎病毒诊断试剂。方法利用融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－３Ｘ表达了戊型肝炎病毒第二读码框区（ＯＲＦ２４０２～６６０）优势抗原表位。表达抗原溶于水，可利用商品化的谷胱甘肽Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ亲合层析柱得到纯化的抗原。结果经应用发现，此基因重组抗原作为酶联免疫试剂的抗原，用于检测血清中抗戊型肝炎病毒抗体，与新加坡进口试剂盒有高度的一致性，和血清中抗体反应性更强。结论预示该基因抗原可能具有较好的反应谱。
- 戎广亚孙杰周继文赵桂兰任继明王雪飞张芳王志杰杨守纯
- 关键词：戊型肝炎病毒基因表达
- 抗乙型肝炎病毒Pre S2 3B9单克隆抗体轻链可变区基因的扩增及序列分析被引量：2
- 1995年
- 为了构建基因工程抗体并从分子水平分析抗乙型肝炎病毒ＰｒｅＳ２３Ｂ９单克隆抗体，我们利用分子生物学技术快速分离３Ｂ９杂交瘤细胞总ＲＮＡ，经反转录，ＰＣＲ扩增，分离获得了３Ｂ９单抗轻链可变区基因，并用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术及双脱氧核苷酸链末端终止法对该可变区基因的全部３２７ｂｐ核苷酸序列进行了测定。结果表明，３Ｂ９单抗轻链隶属小鼠免疫球蛋白Ｋａｐｐａ轻链第Ⅱ亚组，ＪＫ１微基因重排。
- 程云周继文杨守纯罗清华韩风连戎广亚乔小江张建宗曹阳
- 关键词：乙型肝炎病毒单克隆抗体
