杜文俊
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肝癌细胞上清液对成纤维细胞表达α-平滑肌肌动蛋白、环氧合酶-2和肝细胞生长因子的影响
- 2014年
- 目的观察小鼠肝癌细胞上清液对成纤维细胞增殖及表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)的影响。方法制备小鼠成纤维细胞,并分别用普通培养液、小鼠肝癌细胞上清液的条件培养液及含转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的培养液培养成纤维细胞。采用MTT法检测3种培养液培养的成纤维细胞的增殖活力;RT-PCR和免疫组织化学法检测3种培养液培养的成纤维细胞中α-SMA、COX-2、HGF基因mRNA的转录水平及蛋白的表达情况。结果条件培养液及含TGF-β1的培养液对成纤维细胞的增殖均有促进作用,但条件培养液的促进作用更强。普通培养液培养的成纤维细胞在第5天时α-SMA基因mRNA的转录水平最高,含TGF-β1的培养液及条件培养液培养的成纤维细胞在第3天时α-SMA基因mRNA的转录水平最高,且明显高于普通培养液在第5天时的转录水平,第3天以后转录水平稳定;普通培养液培养的成纤维细胞中无COX-2和HGF转录;条件培养液及含TGF-β1的培养液培养的成纤维细胞在第5天时COX-2和HGF基因mRNA的转录水平最高,第5天后无明显下降。不同培养液培养的成纤维细胞中α-SMA蛋白在胞浆、胞膜均有不同程度的表达;普通培养液培养的成纤维细胞中COX-2和HGF蛋白不表达,而含TGF-β1的培养液及条件培养液培养的成纤维细胞中COX-2和HGF蛋白为阳性表达,表达部位均为胞浆。结论小鼠肝癌细胞上清液能有效、稳定地将成纤维细胞激活为稳定表达COX-2和HGF的肌成纤维细胞,其有望成为在细胞移植中促进移植细胞存活及血管重建的细胞。
- 杜文俊李德卫谢言
- 关键词：成纤维细胞肌成纤维细胞Α-平滑肌肌动蛋白环氧合酶-2肝细胞生长因子
- 肌成纤维细胞促进小鼠胚胎肝干细胞的增殖和分化
- 2014年
- 移植细胞的增殖和分化需要微环境支持。作为最重要的微环境成分,肌成纤维细胞在肿瘤的生长过程中发挥着重要作用。该实验Hepa1-6肿瘤细胞上清液在体外激活成纤维细胞分化为肌成纤维细胞,探讨肌成纤维细胞上清对小鼠胚胎肝干细胞(embryonic hepatic stem cells,EHSCs)HP14.5增殖和分化的影响。实验将EHSCs HP14.5分为三组:DMEM培养液处理组(DMEM组)、成纤维细胞上清液处理组(CMFb组)及肌成纤维细胞上清液处理组(CMAFb组)。MTT法绘制三组HP14.5细胞生长曲线图,免疫荧光法及Real-time PCR法检分别测白蛋白(albumin,ALB)、甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、细胞角蛋白18(cytokeratin 18,CK18)的蛋白及mRNA表达情况,PAS染色法检测糖原合成状况。MTT法检测显示,CMAFb组胚胎肝干细胞增殖明显速度较其他两组快。免疫荧光染色及Real-time PCR结果显示,HP14.5培养5 d后,CMAFb组ALB和CK18的蛋白及mRNA表达水平以及糖原合成水平显著高于CMFb组及DMEM组,而AFP蛋白和mRNA表达水平明显降低。该实验表明,Hepa1-6激活的成纤维细胞能促进胚胎干肝细胞的增殖以及分化为有功能的成熟肝细胞。
- 谢言杜文俊李德卫
- 关键词：肌成纤维细胞白蛋白细胞角蛋白18甲胎蛋白
- 经颈动脉途径肝动脉插管及脾内注射肝细胞移植治疗急性肝衰大鼠的疗效比较被引量：3
- 2012年
- 目的:建立SD大鼠颈动脉途径肝动脉插管肝细胞移植的动物模型;探讨肝动脉与脾脏直接注射2种途径肝细胞移植治疗急性肝衰竭(Acute hepatic failure,AHF)大鼠的疗效。方法:经D-氨基半乳糖(D-galactosamine,D-gal)诱导大鼠AHF 24 h后,65只大鼠经颈动脉途径肝动脉插管,60只成功后分为3组,Ⅰ组(n=20)经脾脏直接注射约2×107个肝细胞、肝动脉注射0.4ml Hank’s液;Ⅱ组(n=20)经脾脏直接注射0.4 ml Hank’s液、肝动脉注射2×107个肝细胞;Ⅲ组(n=20)经脾脏直接注射0.4 mlHank’s液、肝动脉注射0.4 ml Hank’s液。观察每组大鼠的生存率及肝功能变化情况,追踪经肝动脉移植荧光示踪剂CFDA SE标记的肝细胞,HE染色观察脾内肝细胞病理变化和免疫荧光观察白蛋白分泌作用。结果:Ⅰ组14 d存活率显著高于Ⅱ组(P=0.031,<0.05),Ⅱ组14 d存活率也高于Ⅲ组(P=0.048,<0.005);Ⅰ、Ⅱ组都能明显改善AHF大鼠的肝功能,尤其以Ⅰ组最为显著;Ⅱ组CFDA SE荧光标记的肝细胞肝动脉移植24 h后,受体大鼠肝脏可以看到散在绿色荧光分布;Ⅰ组移植30 d后,白蛋白共焦免疫荧光结果表明,脾内有肝细胞白蛋白绿色荧光信号;Ⅰ组移植7 d后,HE染色可以看到肝细胞在脾脏红髓中簇集在一起并定植下来。结论:经大鼠颈动脉途径肝动脉插管肝细胞移植能提高AHF大鼠的存活率和改善其肝功能;脾脏直接注射肝细胞移植改善AHF大鼠生存率和肝功能更优于肝动脉途径。
- 冯渊李德卫杨晓波陈睿杜文俊樊斌
- 关键词：肝动脉插管肝细胞移植
- 肝癌细胞上清液促进成纤维细胞表达COX-2和HGF的研究
- 目的:观察小鼠肝癌细胞上清液对成纤维细胞转分化、增殖的影响及环氧合酶-2(COX-2)、肝细胞生长因子(HGF)表达水平变化的影响。探讨成纤维细胞是否可以用来解决移植后肝细胞长期生存率低这一难题。 方法:MTT法检测普...
- 杜文俊
- 关键词：肝细胞移植肌成纤维细胞环氧合酶-2肝细胞生长因子
