- 重组可溶性KDR及其抗体对内皮细胞的增殖抑制作用被引量：5
- 2002年
- 目的 :分析可溶性KDR(sKDR)及其抗体对内皮细胞增殖的抑制作用。方法 :通过ELISA分析大肠杆菌表达的sKDR纯化产物与VEGF16 5结合的能力 ;sKDR免疫家兔制备KDR2 6 2抗血清 ,Wensternblot分析该抗血清与KDR2 6 2蛋白结合的特异性 ;用3 H TdR掺入法 ,MTT法和细胞计数 3种方法分析重组sKDR及其抗体对内皮细胞的增殖抑制作用。结果 :sKDR蛋白可与VEGF16 5特异性结合 ,肝素可增强其结合能力。KDR2 6 2抗血清具有特异性识别KDR蛋白的能力 ,其滴度为 1∶2 0 0 0。用3 H TdR掺入法和MTT 2种方法分析sKDR蛋白及其抗体对内皮细胞的增殖抑制作用结果一致 ,sKDR蛋白浓度在 10 μg/ml,2μg/ml,0 .4μg/ml时对内皮细胞增殖抑制率平均为 5 6 %,44 %和 32 %;抗KDR2 6 2抗体在稀释度为 5 0 ,2 0 0和 80 0倍时对内皮细胞增殖的抑制率平均为 70 %,5 6 %和 43%。细胞计数法测定结果 ,sKDR及抗KDR2 6 2抗体组与VEGF16 5单独刺激组 ,GST和PBS对照组相比 ,内皮细胞增殖被明显抑制 ,随浓度增加抑制活性明显增强 ,但抗体的抑制活性比sKDR蛋白高。结论 :大肠杆菌表达的sKDR及其抗体对内皮细胞均具有明显的增殖抑制作用。
- 刘丽肖畅王烨曹颖
- 关键词：抗体内皮细胞血管内皮细胞生长因子抗血管形成细胞增殖
- shTNFR75在酵母细胞中分泌表达及表达产物的活性分析
- 2001年
- 赵显玲刘丽刘立忠石缨谢宝树王烨杨彦冷爱军曹颖
- 关键词：酵母细胞细胞因子分泌表达
- 可溶性人TNFR75的表达、纯化及活性鉴定被引量：1
- 2002年
- 将编码可溶性人TNFR75 (shTNFR75 )的cDNA与酵母整合载体pPICZαA重组 ,构建的重组质粒线性化后转染酵母细胞GS 115 ,获得了shTNFR75在酵母细胞中遗传性稳定表达酵母工程细胞 .甲醇诱导的pPICZαA shTNFR75 GS115重组酵母工程细胞培养上清 ,经CNBr活化的TNF Sepharose4B亲和层析柱纯化 ,纯化产物纯度为 92 % ;经Western印迹分析 ,可被TNFR75单克隆抗体特异性识别 ,分子量约为 31kD ;受体配体结合试验 ,shTNFR75纯化产物与rhTNFα和rhTNFβ的结合能力与其阳性对照基本相同 ;中和试验显示 ,该shTNFR75可完全阻断TNF对L92 9细胞的细胞毒活性 .表明酵母系统分泌表达的shTNFR75产物具有良好的结合TNF的能力 .
- 袁栎刘丽赵显玲王烨曹颖
- 关键词：纯化活性鉴定肿瘤坏死因子受体
- 以食高岭土作为判定大鼠发生运动病指标的有效性被引量：11
- 2003年
- 目的 改进用食高岭土作为判定大鼠发生诱发性运动病的方法。 方法 ①用 12 2只雄性SD大鼠观察自然条件下食高岭土的特点 ;②将 81只雄性SD大鼠分为用梯形旋转前庭刺激实验组和对照组做刺激前、后食高岭土情况的观察 ,根据大鼠在刺激前是否进食高岭土分别建立判定发生运动病的指标和计算大鼠运动病的发生率 ,同时与文献上常用的以进食高岭土为指标方法判定大鼠发生运动病情况进行比较。 结果 在自然饲养条件下未受前庭刺激的大鼠不只在适应期的前 2d进食高岭土 ,就是到第 6天 ,仍有 39.3%的大鼠进食高岭土 ,食否高岭土对饲料摄取量没有影响。用本研究提出的方法判定大鼠诱发性运动病发生率为 2 2 .5 % ,用其他文献中的方法判定的发生率或为 0 % ,或为 70 %。 结论 本研究提出的方法能区分大鼠运动病易感性的不同 ,可排除假阳性或假阴性结果 ,从而可提高用进食高岭土作为指标判定大鼠是否发生运动病的有效性。
- 付静宜于立身刘丽王烨曹颖
- 关键词：运动病高岭土
- 加速度反复暴露对前庭功能影响的分子生物学基础被引量：2
- 2001年
- 目的 :从基因水平上探讨加速度反复暴露对前庭功能影响的分子机制。方法 :通过地面模拟装置 ,豚鼠于 2G作用下 ,反复暴露 8d ,在 +10Gy作用下测试前庭功能。利用抑制性消减杂交 (SSH)技术 ,对反复暴露后前庭功能正常动物与未暴露动物小脑及脑干组织差异表达基因进行分析。结果 :共获得 19个有差异的cDNA片段 ,其中 6个测序后 ,在GenBank序列库中进行同源性比较 ,有 1个与人类 prefoldin1mRNA具高度同源性(99% ) ,其余 5个无同源序列。结论 :加速度反复暴露对豚鼠小脑和脑干基因表达有影响 。
- 梁雪清刘丽于立身纪桂英王烨曹颖罗超权
- 关键词：前庭分子生物学飞行员
- VEGF基因治疗靶向载体的构建及其特异性表达分析被引量：3
- 2002年
- 目的 :构建KDR启动子介导的VEGF逆转录病毒载体pLXSN D2 99 KDRp VEGF1 6 5,并对其内皮细胞特异性表达作用进行分析。方法 :将逆转录病毒载体 3’LTR的U3区缺失 2 99个碱基使其自身启动子失活 ,然后重组pLXSN D2 99 KDRp VEGF1 6 5载体。经PA317细胞包装 ,NIH3T3细胞测定其病毒滴度。用高病毒滴度细胞株产生的病毒上清分别感染ECV30 4人脐静脉血管内皮细胞和NIH3T3细胞 ,收集细胞培养上清经ELISA和westernBlot分析。结果 :VEGF1 6 5在内皮细胞ECV30 4中的表达量明显高于NIH3T3细胞。结论 :构建的pLXSN D2 99 KDRp VEGF载体 ,可在内皮组织细胞中特异性地表达VEGF。
- 贾晓晶刘丽王烨龚守良刘树铮
- 关键词：血管内皮生长因子逆转录病毒载体靶向基因治疗
- KDR启动子驱动的TNFR逆转录病毒载体构建及其靶向表达被引量：3
- 2002年
- 目的 :为进行TNFR的靶向基因治疗研究打基础。方法 :将人TNFR55和TNFR75基因序列分别与KDR启动子 (KDRp)及灭活自身启动子的逆转录病毒载体RV D2 99重组 ,构建RV D2 99 KDRp TNFR55及RV D2 99 KDRp TNFR75逆转录病毒载体 ,分别转染包装细胞PA31 7,获得稳定的产病毒细胞系。 结果 :获得的TN FR55和TNFR75产毒细胞系病毒滴度分别为 1× 1 0 5CFU ml和 2× 1 0 5CFU ml。感染RV D2 99 KDRP TNFR55病毒的ECV30 4细胞与TNF孵育后的培养上清 ,对L92 9细胞的细胞毒活性比相同条件下的NIH3T3细胞低约2 6倍 ,而感染RV TNFR55病毒的ECV 30 4与相同条件下的NIH3T3细胞无明显差异。结论 :建立了TNFR55和TNFR75逆转录病毒高产毒细胞系 ,构建的RV D2 99 KDRP TNFR55和RV D2 99 KDRP
- 袁栎刘丽孙晓文王烨曹颖
- 关键词：靶向表达肿瘤坏死因子逆转录病毒启动区
- PSP94-TNFα D11a融合基因直接注射的抗肿瘤作用被引量：1
- 2000年
- 目的 探讨人PSP94和肿瘤坏死因子α衍生物 11a(TNFαD11a)融合基因 (PSP94 TNFαD11a)直接注射的抗肿瘤作用。 方法 人前列腺癌裸鼠模型肌肉注射含PSP94 TNFαD11a融合基因的pcDNA PSP94 TNFαD11a质粒DNA ,剂量为 5 0 μg/只 ,同时设 pcDNA PSP94、pcDNA3 .0空载体、生理盐水和环磷酰胺对照组。注射后第 2 0d处死动物 ,称瘤重计算抑瘤率。 结果 pcD NA PSP94 TNFαD11a组抑瘤率为 2 3% ,为 pcDNA PSP94组的 1.4倍。以同样方式给药 ,pcDNA PSP94 TNFαD11a质粒DNA对小鼠Lewis肺癌的抑制率为 31% ,为pcDNA TNFαD11a组的 2 .1倍。结论 pcDNA PSP94 TNFαD11a质粒DNA的直接注射具有抗肿瘤作用。
- 刘丽刘立忠石缨谢宝树王烨冷爱军曹颖
- 关键词：前列腺肿瘤融合基因
- 离心机训练后+Gz耐力相关基因的分离与鉴定被引量：4
- 2003年
- 为探讨离心机训练提高正向加速度 (forwardacceleration ,+Gz)耐力的分子机制 ,应用抑制性消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)和斑点杂交技术筛选离心机训练 12d后测试高耐力组 (耐受 + 16Gz)与未训练对照组大鼠全脑的差异表达基因 .将获得的序列表达标签 (expressedsequencetag ,EST)进行特异性鉴定后 ,获得 7个上调EST ,其中 5个为已知基因的部分序列 ,2个为新EST ,它们的表达量均在训练 6d组最高 ,表明离心机训练可明显影响大鼠全脑特定基因的表达水平 ,这些基因表达水平的变化很可能与离心机训练提高机体
- 梁雪清罗超权刘丽刘建斌于立身王烨曹颖
- 关键词：基因离心机训练抑制性消减杂交斑点杂交技术基因差异表达
- 靶向表达TNFR75的逆转录病毒载体的构建及其产毒细胞系的建立被引量：1
- 2001年
- 将编码人 TNFR75的 c RNA与血管内皮细胞特异性启动子 (KDRp)及缺失自身启动子的逆转录病毒载体 p LXSN- D2 99重组 .重组质粒 p LXSN- D2 99- KDRp- TNFR75与脂质体共转染包装细胞 PA31 7,经抗生素 G41 8(60 0 mg/L)筛选 1 4d,获得 1 5个稳定的产病毒细胞克隆 .将各细胞克隆分别扩大培养收集所产病毒上清 ,并感染 NIH3T3细胞检测病毒滴度 ,其中 1个克隆滴度达 2×1 0 5CFU/ml.提取该克隆细胞总 RNA进行 RT- PCR分析 ,获得的 c DNA片段长度与目的基因一致 .结果提示 ,建立了 TNFR75反转录病毒产毒细胞系 .
- 孙晓文刘丽石缨刘立忠谢宝树王烨杨彦冷爱军曹颖
- 关键词：肿瘤坏死因子受体逆转录病毒基因载体建系
