蔡晓萍
- 作品数：14 被引量：42H指数：5
- 供职机构：南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划江苏省重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 日本血吸虫副肌球蛋白T细胞表位的预测和鉴定被引量：8
- 2004年
- 目的鉴定日本血吸虫副肌球蛋白的T细胞表位。方法用SYFPEITHI软件预测日本血吸虫(中国大陆株)副肌球蛋白的T细胞表位,候选表位分别命名为P20、P21、P22、P23、P24。设计并合成候选表位的编码核苷酸,定向克隆入融合表达载体pET-32c(+),经酶切及测序鉴定出重组克隆。阳性克隆经IPTG诱导表达,表达产物以Ni2+-NTA柱亲和层析及透析纯化。纯化后的硫氧还蛋白(Trx)融合蛋白体外刺激C3H/HeJ及C57BL/6小鼠腹股沟淋巴结或脾脏单个核细胞,3H-TdR掺入法检测其增殖。结果候选表位中P20、P21、P22、P23能有效刺激C3H鼠致敏淋巴细胞细胞增殖,P20、P22能刺激C57鼠致敏淋巴细胞增殖。结论P20和P22可能是日本血吸虫副肌球蛋白的通用性T细胞表位。
- 王新军张兆松王勇吴海玮张蕾李光富季旻珺朱翔蔡晓萍刘丰苏川吴观陵
- 关键词：日本血吸虫副肌球蛋白表位
- Sj28GST基因克隆和高效表达产物的纯化被引量：4
- 2004年
- 目的 从日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库中克隆 2 8kDa谷胱甘肽 -S -转移酶 (Sj2 8GST)基因 ,获得用于疫苗和T细胞表位研究的高纯度重组融合蛋白 2 8GST -TRX。方法 应用引物特异性PCR技术 ,从日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库中扩增Sj2 8GST基因 ,经琼脂糖凝胶电泳结合碱基序列分析鉴定后 ,采用定向克隆技术构建Sj2 8GST -TRX融合蛋白重组表达载体并诱导其在大肠杆菌BL2 1(DE3)的表达 ,用Western -blotting测定以融合蛋白方式表达的Sj2 8GST的免疫原性 ,通过包涵体纯化结合Ni+柱亲和层析获得高纯度重组融合蛋白。结果 Sj2 8GSTPCR产物为约 6 4 0bp ,其碱基序列 (6 33bp)和推导的氨基酸序列 (2 11aa)与GenBank报道一致 ;获得了Sj2 8GST -TRX重组质粒 ;2 8GST -TRX融合蛋白在大肠杆菌以包涵体形式高效表达 ;在分子量为约 4 3kDa处有一能与羊抗Sj2 8GST抗体产生特异性反应的含 2 8GST融合蛋白条带 ;包涵体纯化法结合Ni+ 亲和层析可获得高纯度的重组融合蛋白。结论 获得到了日本血吸虫中国大陆株 2 8GST分子的全长基因和高纯度重组 2 8GST -TRX融合蛋白 ,该融合蛋白具有天然Sj2 8GST免疫原性。
- 李光富张兆松王新军李春玲王勇季旻刘丰蔡晓萍朱翔
- 关键词：基因克隆纯化日本血吸虫
- CpG寡核苷酸的筛选及其对rSj28GST的免疫佐剂作用被引量：6
- 2004年
- 目的 研究 Cp G寡核苷酸 (Cp G ODN)对日本血吸虫重组 2 8k Da GST(r Sj2 8GST)抗原分子的免疫佐剂作用和诱导 Th1型反应的效应。方法 用淋巴细胞增殖试验筛选对鼠有良好免疫刺激作用的 Cp G ODN;用基因工程方法生产 r Sj2 8GST抗原分子 ;EL ISA检测小鼠抗 r Sj2 8GST的同型抗体 Ig G1 、Ig G2 a水平。结果 筛选出的 Cp G ODN如 182 6、2 0 0 2、182 6 4、2 10 2等具有良好的免疫刺激活性 ,其 SI>2 ;纯化的 r Sj2 8GST抗原分子 ,呈单一电泳条带 ;以 Cp G ODN为 r Sj2 8GST免疫佐剂 ,其免疫小鼠产生的抗体滴度显著高于对照组 ,且同型抗体 Ig G2 a与 Ig G1 比值也明显升高。结论 Cp G ODN182 6 4是一种良好的免疫佐剂 ,并可显著诱导
- 李光富张兆松朱鸿飞王勇朱翔王新军季旻珺刘丰蔡晓萍吴海玮吴观陵
- 关键词：CPG寡核苷酸日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶免疫佐剂
- 趋化因子在日本血吸虫感染模型中的表达特征被引量：1
- 2003年
- 目的 研究日本血吸虫感染模型中趋化因子(chemokine)在CD_4^+T细胞中的表达概貌,并探讨其与Th细胞极化和免疫病理的相关性。方法 采用高密度寡核苷酸芯片(Affymetrix芯片)技术,从基因水平获得日本血吸虫不同感染时期CD_4^+T细胞表达的趋化因子概貌,并用反转录PCR(RT-PCR)凝胶成像半定量技术验证嗜酸性粒细胞趋化因子(ECF-L)的表达水平。同时观察趋化因子表达与病理的的关联。结果 日本血吸虫虫卵沉积前,MIG、RANTES明显增强;感染6周IP-10、MIP-2、MIP-1α、MIP-1β、ECF-L升高,持续到感染13周;GRO、Lymphotactin、MCP-1、RANTES在感染13周显著增强。RT-PCR半定量验证ECF-L表达模式与基因芯片结论一致。结论 日本血吸虫人工感染小鼠的CD_4^+T细胞表达大量趋化因子,它们共同参与Th1/Th2免疫应答,影响免疫病理状态;改变趋化因子格局可能影响疾病的自然转归。
- 蔡晓萍季旻珺李光富苏川朱翔王新军张兆松吴观陵
- 关键词：日本血吸虫CD4^+T细胞趋化因子基因芯片RT-PCR
- CDC对胰岛β细胞中COX-2表达及PGE2生成的影响
- 2007年
- 目的观察12/15脂氧合酶抑制剂CDC对大鼠胰岛β细胞中环加氧酶2(COX-2)的表达及前列腺素E2(PGE2)生成的影响,并初步探讨其机制。方法体外培养大鼠胰岛β细胞系INS-1细胞,加入细胞因子IL-1β诱导COX-2蛋白的表达,然后采用Western印迹的方法观察12/15脂氧合酶抑制剂cin-naminyl-3,4-dihydroxy-α-cyanocinnamate(CDC)对COX-2蛋白表达的影响;借助萤光素酶报告基因技术检测CDC对COX-2启动子转录活性的影响,最后用放射免疫法了解CDC对胰岛β细胞中PGE2生成的抑制作用。结果细胞因子IL-1β能够在大鼠胰岛β细胞系INS-1中诱导COX-2基因的表达,而12/15脂氧合酶抑制剂CDC能够呈剂量依赖抑制IL-1β所诱导的COX-2蛋白的表达。结论12/15脂氧合酶抑制剂能够明显抑制炎性因子IL-1β所诱导的胰岛β细胞中COX-2的表达和炎性介质PGE2的生成。
- 朱云霞蔡晓萍王林涛凌家俭
- 关键词：环加氧酶2前列腺素E2胰岛B细胞
- Sj43B基因编码蛋白的日本血吸虫虫体组织定位
- 2005年
- 目的确定Sj43B基因编码蛋白在日本血吸虫成虫体内组织及亚细胞水平定位。方法取新鲜日本血吸虫成虫标本,按电镜生物样品制备方法常规固定、包埋,制成超薄切片,与鼠源纯化的抗重组Sj43B基因编码蛋白的IgE抗体(对照组试验为正常鼠血清)反应,再与大鼠抗小鼠IgE的IgG抗体结合,最后与蛋白A-胶体金连接,透射电镜下观察胶体金颗粒的分布。结果用正常鼠血清处理虫体切片,从皮层、肌层到皮层细胞体,未见有明显的电子致密的胶体金颗粒分布。用特异性IgE抗体处理的样品上,胶体金颗粒分布较广泛,见于皮层、肌层、胞质、核膜和核质内。结论Sj43B基因编码蛋白在血吸虫成虫体内的分布无组织和亚细胞结构特异性。
- 蔡晓萍王勇苏川张兆松刘丰季旻珺吴观陵
- 关键词：免疫电镜
- 日本血吸虫感染过程中抑制性因子的表达特征
- 2005年
- 目的立足于基因组水平考察日本血吸虫慢性感染小鼠CD_4^+ T应答中抑制性因素的参与及可能的调控作用。方法采用高密度寡核苷酸芯片(Affymetrix芯片)对日本血吸虫感染0、3、6、13周小鼠脾脏中的CD_4^+ T细胞进行全基因组分析,获得相关抑制性因子的基因表达谱。结果基因芯片结果显示日本血吸虫感染从急性期至慢性期过程中抑制性因子的表达基因表达逐步上调,呈现基本一致的变化,包括抑制性细胞因子、阻断抗体、细胞凋亡、负调控分子的高表达等。结论从胞内信号转导通路至细胞凋亡的整体水平,多层次因素参与了日本血吸虫感染宿主免疫应答的负调控机制。
- 季旻珺苏川王勇吴海玮朱翔蔡晓萍张兆松吴观陵
- 关键词：日本血吸虫CD4^+T细胞
- 研究生分子生物学实验带教有感
- 笔者总结了个人带教体会，分子生物学技术日新月异，业己渗透到基础医学和临床医学的各个学科，为顺应医学发展的需要，培养高素质的医学人才。为了保证本课程的教学质量，我们在教学实践中，不断总结经验，改进教学方法，通过学生的实践活...
- 蔡晓萍德伟
- 关键词：分子生物学实验带教研究生教育实验课程学位论文
- 文献传递
- 日本血吸虫22.6kDa抗原T细胞表位的重组、表达及初步鉴定被引量：12
- 2003年
- 目的 鉴定日本血吸虫中国大陆株 2 2 .6kDa抗原 (Sj2 2 .6 )的T细胞表位。 方法 用计算机软件预测Sj2 2 .6分子的T细胞表位 ,设计并合成其编码核苷酸 ,定向克隆入融合表达载体pET 32c( + ) ,转化大肠杆菌BL2 1感受态细胞 ,经酶切及测序鉴定出重组克隆。阳性克隆经IPTG诱导表达 ,表达产物用NTA柱纯化。用纯化后的表位肽融合蛋白体外刺激C3H小鼠脾单个核细胞 ,3 H TdR掺入法检测其增殖。 结果 用计算机软件预测获得Sj2 2 .6抗原的 4个候选表位肽 ,并成功克隆入pET 32c( + )。其重组体均可表达分子量约 2 0kDa的融合蛋白 ,用NTA柱纯化后经 1 2 %聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)显示单一条带。其中P4、P5、P6融合蛋白能有效刺激小鼠脾单个核细胞增殖。 结论 从Sj2 2 .6抗原中初步鉴定出P4、P5、P6
- 王新军张兆松李光富王勇刘丰季旻珺朱翔蔡晓萍吴观陵
- 关键词：日本血吸虫T细胞表位血吸虫病克隆
- CD4～+CD25～+调节性T细胞涉及日本血吸虫感染免疫调节的细胞学证据
- 当前，血吸虫病防治面临的棘手问题之一是宿主缺乏有效的抗再感染免疫力而造成再感染率居高不下。因此，能否控制化疗后再感染问题已经成为血吸虫病防治中的核心问题。人群流行病学和动物模型研究均提示，随着日本血吸虫感染的慢性化进程，...
- 蔡晓萍
- 关键词：日本血吸虫慢性感染FOXP3CTLA-4
- 文献传递
