高晓龙
- 作品数：10 被引量：36H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- B型流感病毒B/Yamagata/16/88反向遗传操作平台的搭建及BALB/c小鼠感染模型的建立被引量：1
- 2015年
- 目的利用基因工程技术全基因合成B型流感病毒B/Yamagata/16/88的8个基因节段,并利用反向遗传技术从体外拯救B型流感病毒B/Yamagata/16/88,同时建立BALB/c小鼠感染模型,为下一步研究B型流感病毒致病机制、传播机制以及开发新型疫苗奠定基础。方法通过基因合成和反向遗传技术体外拯救B型流感病毒B/Yamagata/16/88。全基因组测序验证拯救病毒基因组序列与Genbank序列的一致性。将拯救病毒以105EID50的攻毒剂量人工感染BALB/c小鼠,通过体重变化、生存率、肺脏病毒复制等方面进行致病性分析,建立小鼠感染模型。结果成功从体外拯救出B型流感病毒B/Yamagata/16/88,命名为B-S9。全基因组测序结果表明,B-S9基因组序列与Genbank公布序列一致。B-S9能够人工感染BALB/c小鼠,但不致死,对BALB/c小鼠呈现低致病性;攻毒后第3天,B-S9感染小鼠体重出现下降,攻毒后第8天,小鼠体重开始回升;攻毒后第3天和第6天,B-S9感染小鼠的肺脏内均能检测到病毒复制,且攻毒后第3天的小鼠肺脏病毒滴度比攻毒后第6天的小鼠肺脏滴度高132倍。结论成功搭建B型流感病毒B/Yamagata/16/88反向遗传操作平台,并建立BALB/c小鼠感染模型。目前国内外对B型流感病毒的研究比较少,该反向遗传操作平台的建立为B型流感病毒致病机制和传播机制的研究奠定了基础,同时也为包括B型流感病毒减毒活疫苗在内的新型疫苗的研制开辟了新途径。
- 孙伟洋于志君李雪陈强高晓龙国娇张坤李元果王铁成杨松涛黄耕赵永坤高玉伟夏咸柱
- 关键词：B型流感病毒反向遗传操作BALB/C小鼠
- 7株野鸟源新城疫病毒F基因和HN基因遗传变异分析被引量：5
- 2015年
- 目的了解野生鸟类新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）感染情况,分析NDV的基因型与遗传变异特点。方法采用HA试验和RT-PCR检测野生鸟类新城疫病毒感染情况,对新城疫病毒分离株的融合蛋白基因（F基因）和血凝素-神经氨酸酶基因（HN基因）进行遗传进化分析,了解F和HN基因相关分子特性。结果 7株NDV的F基因序列分析表明显示其编码区核苷酸为1 662bp,编码553个氨基酸。F基因碱性裂解位点序列为112G-K/RQ-G-R-L117,均符合新城疫弱毒特征,与Ⅱ类NDV代表株核苷酸同源性为93.5%~99.9%。M46与M52为Ⅱ类Ⅱ亚型,其余5株为Ⅱ类Ⅰ亚型。HN基因序列分析显示,M46、M52编码区核苷酸为1 734bp,编码577个氨基酸,其余5株编码区氨基酸为1 851bp,编码616个氨基酸,与Ⅱ类代表毒株核苷酸同源性为92%~99.6%。结论分离的7株新城疫病毒在基因上均符合弱毒特点。其中有5株为Ⅱ类Ⅰ型,2株为Ⅱ类Ⅱ型。
- 李胜楠王海军高晓龙李元果国娇陈迪王铁成于志君高玉伟夏咸柱王全凯
- 关键词：新城疫病毒融合蛋白基因
- H9N2亚型AIV HA蛋白第226位点氨基酸多样性分析及3株病毒受体结合能力检测被引量：2
- 2014年
- 目的了解目前我国家禽业中流行的H9N2亚型AIV的HA蛋白第226位氨基酸残基的多样性,并用固相糖链ELISA方法检测实验室保存的3株H9N2亚型AIV病毒的受体结合能力。方法从NCBI数据库中下载我国分离的H9N2流感病毒的HA氨基酸序列,对其第226位(参照H3亚型HA位点)氨基酸残基的种类进行统计分析,并利用固相糖链ELISA方法对3株H9N2亚型AIV的受体结合能力进行检测。结果与H9N2流感病毒受体结合能力相关的HA226位点已呈现出多样性,分别为HAL226、HAQ226、HAM226和HAF226,其占有比率分别为81.85%、17.57%、4.81%和0.11%;进一步统计分析表明,我国近几年分离的H9N2流感病毒以HAL226为主。受体结合能力检测显示,CK/JN/3(HAL226)只具有结合人样受体的能力,CK/JL/06(HAQ226)只具有结合禽样受体的能力,而CK/JN/2(HAF226)则具有双受体结合特性,其中与人样受体结合能力稍高。结论当前我国家禽中流行的H9N2亚型AIV中以具有HAL226位点特征的毒株占优势,而这一位点特征与病毒结合人样受体有关。因此,H9N2亚型AIV具有突破种间屏障并引发新的流感大流行的潜在威胁。
- 王爱荣桑晓宇高晓龙李元果张坤于志君王铁成杨松涛夏咸柱高玉伟柴同杰
- 关键词：H9N2亚型AIV多样性
- 中国首株H13N6亚型禽流感病毒遗传进化分析及致病性和传播性评估被引量：3
- 2015年
- 为了解我国首次分离的H13N6亚型禽流感病毒(AIV)生物学特性,本研究对该分离株进行全基因序列测定和分析,并对其进行BALB/c小鼠和SPF鸡致病性试验以及豚鼠传播试验。序列分析表明HA碱性裂解位点序列为PAISNR↓G,为低致病性AIV。遗传进化分析表明NA基因属于北美谱系,其余7个基因均属于欧亚谱系;其中NA、NP、M、NS基因来源于鸥类,而HA、PB2、PB1、PA基因来源于野鸭类。动物致病性和传播试验结果显示,该病毒株在鸡和小鼠体内不能进行有效复制,在豚鼠和鸡体内也不能进行排毒和有效传播。基因序列分析结合致病性和传播性试验表明H13N6亚型AIV分离株可能是通过候鸟迁徙而传入我国的新型重组AIV,但该病毒株仍只能感染野生水禽尚未获得跨越种间屏障感染陆生家禽和人的能力,尚不具备哺乳动物间和家禽间的传播能力。
- 高晓龙范胜涛李胜楠国娇王爱荣孙伟洋李雪虞一聪王铁成李元果桑晓宇于志君张坤高玉伟夏咸柱
- 关键词：致病力小鼠
- H4N6亚型禽流感病毒分离与氨基酸序列测定被引量：6
- 2015年
- 目的对候鸟类流感病毒进行主要氨基酸位点变化分析和HA、NA遗传进化分析。方法在上海自然保护区采集候鸟粪便标本337份,采用PCR检测H4N6核酸;同时将粪便标本接种SPF鸡胚分离病毒;收集72h尿囊液做血凝试验,阳性标本进行全基因测序,并做主要氨基酸位点和遗传进化分析。结果共分离出2株流感病毒,经测序鉴定为H4N6亚型,HA裂解位点序列为NIPEKASR/G,且均未发生Q226L、G228S变异;NA序列存在117T、198N、314S等氨基酸变异。遗传进化分析显示2株H4N6亚型分离株HA和NA基因属于欧亚谱系的不同进化分支,亲缘关系较远。结论分离自上海自然保护区候鸟粪便的2株H4N6亚型流感病毒均属于低致病性禽流感病毒,奥司他韦类NA抑制剂存在一定耐药性,对其传播风险应予以关注。
- 解林红高晓龙耿海东耿海东李元果徐钰吴长江高玉伟夏咸柱
- 关键词：候鸟血凝抑制禽流感病毒
- 虎源伪狂犬病毒的鉴定及gB基因分析被引量：7
- 2014年
- 目的对不明原因死亡虎进行病毒感染检测,并对病毒部分保守基因序列进行分析。方法采集不明原因病死虎肺组织,研磨后提取总DNA,使用特异性引物对伪狂犬病毒gB基因、gD基因进行PCR扩增、测序并构建进化树;经负染法染色后用电子显微镜观察病毒形态结构;取研磨组织液接种家兔,观察病毒的致病力。结果 PCR扩增组织样品为gB基因、gD基因阳性,基因序列经blast比对伪狂犬病毒。将gB基因通过序列测定分析并与GenBank中近4年公布的9株伪狂犬病毒gB基因比对,同源性为99.5%-100%。进化树分析该病毒与2012年北京家猪分离株属同一进化分支。组织研磨液置电镜观察,见病毒呈圆形,直径100nm左右,有囊膜,为具有典型特征的疱疹病毒样病毒粒子。家兔接种组织研磨液后出现啃咬接种部位,抽搐,嘶叫等伪狂犬病症状。结论本研究在病死虎体内检测到伪狂犬病毒,表明濒危野生动物虎已受到伪狂犬病毒病的威胁。
- 李元果高晓龙桑晓宇王海军张成林王爱荣于志君任志广郑学星冯娜王铁成杨松涛黄耕高玉伟夏咸柱胡永浩
- 关键词：伪狂犬病毒PCR鉴定GB基因进化分析
- 吉林省汉坦病毒宿主动物携带病毒的遗传进化分析被引量：7
- 2014年
- 目的对吉林省汉坦病毒（Hantavirus，Hv）宿主动物携带病毒进行遗传进化分析。方法采集吉林省不同地区鼠肺样品，应用间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence assay，IFA）鉴定出HV感染的阳性样本，利用Trizol试剂提取病毒RNA，RT-PCR法扩增阳性样本中M和S片段基因，并进行测序，应用DNASTAR软件对M和S片段基因的核苷酸同源性进行分析，并与汉城病毒（Seoulvirus，SEOV）参考株进行比较；利用MegAligh软件进行蛋白序列中氨基酸差异性分析；利用MEGA5.0软件进行系统发生分析。结果共捕获719只啮齿动物，其中褐家鼠（R.norvegicus）555只，黑线姬鼠（A.agrarius）74只，小家鼠（胍m12sclzllzs）90只，HV抗原阳性率为1.39％（10／719）；10份阳性样本中，7份来自褐家鼠，2份来自小家鼠，1份来自黑线姬鼠。用全长s引物扩增得到的10株病毒全长s基因片段，经同源性分析比较发现，各序列间的核苷酸同源性在92.8％～95.1％之间，与其他SEOV核苷酸同源性在90.2％～94.7％之间；用M引物扩增得到的部分基因片段，经同源性分析比较发现，各序列间的核苷酸同源性在96.5％～99.5％之间，而与其他SEOV核苷酸同源性在91.5％～97.7％之间；10株病毒全部属于SEOV。黑线姬鼠G蛋白365～769位点问有5个氨基酸差异位点（V494L、C546S、Y626C、M630L和V637I），小家鼠G蛋白365～769位点问主要有5个氨基酸差异位点（C378G／R、F420L、Q436P／R、E535G／A和C589G／W），但同种间在378、436、535和589位点也有差异；黑线姬鼠N蛋白1～430位点间存在P298L变异；小家鼠N蛋白变异位点较多，主要在M24K／N、A37D、1140M、M173K、D192E、L219V、P229A、D237E、H265Y、V284L、T333S、A389G和V425E变异。分离得到的10株病毒根据不同的来源地可分为两个不同的进化分支。结论研究表明吉林省宿主动物携带的HV仍以SEOV为主，其遗传进化呈现多
- 范胜涛高晓龙李元果应瑛国娇张钊伟刘红吴静杨松涛赵永坤秦川高玉伟夏咸柱
- 关键词：汉坦病毒进化
- A型流感病毒通用型人源化抗体的构建及初步鉴定被引量：5
- 2014年
- 目的制备A型流感病毒通用型人源化抗体并进行鉴定。方法通过文献检索、蛋白质序列数据库(Swissprot)、蛋白质结构数据库(PBD)等获得抗流感抗体的序列信息,经计算机分析软件InsightⅡ分析抗体结构,采用分子模拟、分子对接等方法分析抗体的轻、重链可变区基因结构,用昆虫细胞偏嗜密码子优化氨基酸序列,合成抗流感病毒抗体轻、重链可变区基因;对合成氨基酸序列中的轻、重链可变区基因作酶切鉴定,将轻链可变区基因与杆状病毒表达载体PAC-κ-CH3连接,构建PAC-κ-L-CH3,酶切合成的重链可变区基因与PAC-κ-L-CH3连接,构建PAC-κ-L-H-CH3重组表达载体,鉴定正确后,同杆状病毒DNA共转染至昆虫细胞(sf9)中,于27℃用无血清培养基培养,收集上清,应用各亚型流感病毒株灭活后进行血凝抑制试验和ELISA试验,检测制备的抗体对流感病毒的通用性;通过荧光抗体试验检测抗体在细胞中的表达。结果重组杆状病毒表达载体转染sf细胞后,传代上清中检测到抗体;血凝抑制试效价为1︰2;ELISA结果显示有3株制备的抗体对3种流感病毒呈阳性反应,1株对实验用的流感病毒株没有反应;转染后传代细胞的荧光抗体鉴定结果显示有阳性抗体表达。结论成功采用计算机筛选合成抗流感病毒抗体基因,初步获得A型流感病毒通用型抗体。
- 王铁成任志广桑晓宇于志君张坤高晓龙孙伟洋李元果郑学星高玉竹耿海东徐钰解林红吴长江张晓田孙贺廷初冬赵永坤杨松涛王化磊高玉伟夏咸柱
- 关键词：人源化抗体流感病毒可变区
- 两株野鸭源新城疫病毒分离株F基因和HN基因的分子特性分析被引量：3
- 2014年
- 为了分析从湖南长沙分离到的野鸭源新城疫病毒（NDV）融合蛋白基因（F基因）和血凝素-神经氨酸酶基因（HN基因）分子特性,采用RT-PCR方法对分离自野鸭粪便的2株NDV的F基因和HN基因进行了扩增和遗传进化分析。F基因序列分析表明,编码区核苷酸为1 662bp,编码553个氨基酸,F基因碱性裂解位点序列为^112E-R-Q-E-R-L^117,符合NDV弱毒特征,与ClassⅠ类NDV代表毒株核苷酸同源性在92.3%-93.8%之间。HN基因序列分析表明,编码区核苷酸为1 851bp,编码616个氨基酸,与ClassⅠ类NDV代表毒株核苷酸同源性在91.6%-93.9%之间。根据F基因和HN基因遗传进化分析表明,此次分离到的2株NDV同属于ClassⅠ类Genotype 3型。
- 徐钰解林红耿海东高晓龙王海军范胜涛李元果王铁成吴长江张晓田孙贺廷初冬高玉伟
- 关键词：新城疫病毒F基因HN基因
- 吉林省部分地区野禽携带新城疫病毒情况调查
- 2014年
- 为调查吉林省候鸟迁徙路线中野禽类携带新城疫病毒情况,对吉林省七个地区野禽新鲜环境样品或泄殖腔拭子进行样品采集。对采集的821样品进行新城疫病毒携带的检测,其中有32份阳性样品,阳性分离率为3.9%。经GenBank序列比对32株均为弱毒ClassⅠ群基因3型。本次对吉林省新城野禽携带新城疫病毒调查结果中未见新城疫强毒株。
- 耿海东解林红徐钰高晓龙李元果王海军范胜涛孙贺廷王铁成吴长江张晓田初冬高玉伟
- 关键词：野禽新城疫病毒
