刘晓
- 作品数：10 被引量：23H指数：2
- 供职机构：第二军医大学附属长海医院消化内科更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市自然科学基金教育部长江学者奖励计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 稳定表达EGFP-LC3的AR42J细胞系的建立被引量：2
- 2015年
- 目的 建立稳定表达增强型GFP （EGFP）-LC3的AR42J细胞.方法 利用慢病毒过表达载体Lentiviral-EGFP-LC3包装成慢病毒,感染大鼠胰腺腺泡细胞AR42J.以Lentiviral-EGFP感染作为阴性对照.通过倒置荧光显微镜观察及流式细胞分析仪检测病毒感染效率,蛋白质印迹法检测稳定传代细胞株的LC3蛋白表达.用毒胡萝卜素处理细胞建立内质网应激模型,采用蛋白质印迹法检测应激的AR42J细胞的LC3、PERK蛋白表达.结果 AR42J细胞的Lentiviral-EGFP-LC3感染效率＞85％,并能稳定传代.Lentiviral-EGFP-LC3感染的AR42J细胞的LC3 mRNA表达量为未感染细胞的（9.14±0.32）倍;LC3蛋白阳性表达并有EGFP-LC3融合蛋白的表达.Lentiviral-EGFP感染的AR42J细胞的LC3 mRNA表达量为未感染细胞的（1.08 ±0.07）倍,无LC3蛋白表达,仅有GFP表达.与未感染组比较,EGFP-LC3组的LC3 mRNA表达显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）,而EGFP组的差异无统计学意义.结论 成功构建了稳定表达EGFP-LC3的大鼠胰腺外分泌细胞AR42J,为进一步研究急性胰腺炎与自噬的关系提供了新的细胞模型.
- 吴敏李洁刘晓李钦芳郭晓榕湛先保
- 关键词：慢病毒感染自噬细胞系
- 磁控胶囊内镜在体检人群胃部疾病诊断中的应用价值研究被引量：13
- 2017年
- 目的探讨磁控胶囊内镜在无症状体检人群中诊断胃部疾病的应用价值。方法回顾分析长海医院消化内镜中心2015年7月至2016年12月期间行磁控胶囊内镜胃部检查的211例无症状体检者临床资料，观察分析磁控胶囊内镜检查对受检者病变的检出情况，转胃镜检查情况，耐受度及安全性。结果211例受检者中，胃内局灶性病变检出率为9．5％（20／211），且男性受检者胃内局灶性病变检出率高于女性（P〈0．05）。受检者均顺利完成磁控胶囊内镜检查，无胶囊滞留及其他不良事件发生。结论磁控胶囊内镜作为一种新型非侵人性胃部检查方式，在无症状人群中的胃部病变检出率较高，且安全性高、耐受度好，可作为无症状体检人群胃部疾病筛查的常规检查手段。
- 朱曙光王家林钱阳阳周巍杨婷蔡晨张静峰李敏玉郑国栋刘晓安薇苏晓菊廖专李兆申
- 关键词：胶囊内镜胃疾病无症状人群
- 自身免疫性胰腺炎合并胰管结石一例并文献复习
- 2017年
- 自身免疫性胰腺炎（autoimmune pancreatitis，AIP）是由自身免疫介导的一种特殊类型的慢性胰腺炎（chronic pancreatitis，CP），约占所有CP的2％。AIP的组织学亚型分为1型和2型，以淋巴细胞及浆细胞浸润为主要病理特征，主要影像学特征包括局灶性或弥漫性胰腺增大、
- 孙晖辛磊王雷刘晓廖专李兆申
- 关键词：自身免疫性胰腺炎文献复习胰管结石组织学亚型浆细胞浸润免疫介导
- 雨蛙肽诱导的实验性急性胰腺炎细胞模型中酶噬的变化
- 2014年
- 目的 观察雨蛙肽诱导的实验性急性胰腺炎（AP）细胞模型中酶噬的变化.方法 培养AR42J细胞株（胰腺外分泌细胞）,将细胞接种于6孔板培养至90％融合,分为AP组与空白对照组,AP组加入终浓度为1×10-8 mol/L的雨蛙肽建立AP细胞模型,空白对照组加入1640培养液.在雨蛙肽处理后1、4、6、8、12、24 h收集细胞及培养上清液,以ELISA方法检测上清液中炎性因子IL-1、TNFα、淀粉酶及胰蛋白酶原活化肽（TAP）水平.取各组细胞,采用RT-PCR和Western印迹法检测LC3、Beclin-1mRNA和 LC3B蛋白的表达.透射电子显微镜观察各组细胞酶噬小体的变化.组间比较采用方差分析.结果 空白对照组上清液中的IL-1、TNFα、淀粉酶和TAP分别为（18.83±7.10） pg/mL、（14.20±3.79） pg/mL、（10.03±2.85）U/L、（39.48±8.62） pg/mL,AP组在1h时即显著升高至（62.13±11.25） pg/mL,（30.98±7.11） pg/mL、（25.06±6.82） U/L、（128.51±18.30） pg/mL,差异均有统计学意义（F=3.32、3.05、2.90、2.62,P＜0.05或0.01）在4或6h时达到高峰[IL-1在4h为（71.96±15.82） pg/mL,F=7.25,P＜0.01;TNFα在6h时为（39.92±8.94） pg/mL,F=4.93,P＜0.05;淀粉酶在4h时为（28.83±8.31） U/L,F=2.06,P＜0.05;TAP在4h时为（146.29±29.36） pg/mL,F=0.14,P＜0.01],之后逐渐下降趋于稳定,AP组细胞中第4、6h的LC3 mRNA含量为3.18±0.82、1.71±0.14,第1、4h时的Beclin-1 mRNA含量为2.44±0.34、4.13±0.30,较空白对照组（0.21±0.04、0.30±0.08）均明显上升（LC3 mRNA,F=0.79、0.06 ;Beclin mRNA,F=2.31、0.36,P均＜0.05）,其余时间点差异均无统计学意义（P均＞0.05）.电子显微镜下可见AP组自噬体和酶噬小体数目显著多于空白对照组.结论 雨蛙肽诱导AP细胞模型时伴有酶噬的发生,提示酶噬可能参与了AP的发病机制.
- 李洁刘晓吴敏郭晓榕湛先保
- 关键词：急性胰腺炎自噬胰蛋白酶原
- 超声内镜探头引导下乙醇瘤内注射治疗胰腺癌的实验研究被引量：4
- 2013年
- 目的探讨超声内镜探头引导下乙醇瘤内注射治疗胰腺癌的疗效。方法原位胰腺癌裸鼠20只随机表法随机分为2组，实验组行95％乙醇注射治疗，对照组注射生理盐水，比较治疗前及治疗后24h血清淀粉酶变化。分别于治疗前及治疗后第7天行超声内镜探头测量肿瘤大小，计算相对肿瘤体积和相对肿瘤增殖率。光学显微镜下观察治疗前及治疗1周后肿瘤组织病理改变。结果与治疗前相比，实验组治疗后24h血清淀粉酶出现轻度增高[（2873．5±958．9）U／L比（2004．3±402．0）U／L，P〉0．05]，但与对照组治疗后24h的[（2066．1±396．6）U／L]比较，差异无统计学意义（P=0．061）。实验组治疗后第7天相对肿瘤体积明显低于对照组[（0．45±0．08）比（1．25±0．06），P〈0．01）]，相对肿瘤增殖率为36％。治疗1周后实验组病理组织学显示肿瘤坏死变性严重，有大面积凝固性坏死；而对照组仅见少量坏死。结论95％乙醇瘤内注射可造成肿瘤坏死，在裸鼠原位胰腺癌模型中有一定的治疗效果。
- 张文颖吴红玉郭杰芳郭妍刘晓龚艳芳高军金震东李兆申
- 关键词：胰腺癌内窥镜超声检查乙醇注射动物实验
- 替普瑞酮对急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障保护作用的实验研究
- 2015年
- 背景:肠黏膜屏障功能损害是急性胰腺炎(AP)发生、发展的关键环节,与疾病预后密切相关。目的:探讨黏膜保护剂替普瑞酮对AP大鼠模型肠黏膜屏障的保护作用及其可能机制。方法:45只成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组(n=5)、AP模型组(n=20)和替普瑞酮治疗组(n=20)。造模大鼠腹部皮下注射雨蛙素,治疗组造模前后予替普瑞酮灌胃。以ELISA法检测血清白细胞介素-1(IL-1)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和淀粉酶水平,分别以光学显微镜和透射电子显微镜观察小肠黏膜组织病理学和超微结构变化,蛋白质印迹法检测紧密连接蛋白occludin、ZO-1表达。结果:AP模型组血清IL-1、IL-6、TNF-α和淀粉酶水平较正常对照组显著升高(P<0.05),小肠黏膜绒毛坏死脱落,上皮细胞间紧密连接明显增宽,occludin、ZO-1蛋白表达下调;替普瑞酮治疗组血清促炎细胞因子和淀粉酶水平较AP模型组显著降低(P<0.05),小肠绒毛仍较完整,紧密连接致密,occludin、ZO-1蛋白表达增强。结论:在AP大鼠模型中,替普瑞酮可能通过上调紧密连接蛋白表达对肠黏膜屏障发挥保护作用。
- 郭晓榕刘晓李洁吴敏湛先保
- 关键词：急性胰腺炎替普瑞酮肠黏膜屏障OCCLUDINZO-1
- 急性胰腺炎细胞的死亡方式
- 2012年
- 急性胰腺炎（acutepancreatitis，AP）腺泡细胞有3种死亡形式，即凋亡、自噬及坏死。凋亡有依赖半胱氨酸一天冬氨酸一特异性蛋白酶（Caspase）和非依赖Capase两种信号通路，其中以前者为主。依赖Caspase通路即通过线粒体外膜渗透作用和（或）细胞表面死亡受体通路激活Capase诱导腺泡形成凋亡小体并被吞噬细胞吞噬。非依赖Caspase通路则可能是通过溶酶体蛋白（如组织蛋白酶D，CatD）的活化而导致细胞死亡[1]。
- 张蓓蓓刘晓湛先保李兆申
- 关键词：急性胰腺炎CASPASE炎细胞CAPASE组织蛋白酶D凋亡小体
- 内质网应激对实验性急性胰腺炎时酶噬的影响
- 李洁郭晓榕刘晓湛先保李兆申
- 自噬在大鼠急性坏死性胰腺炎时的变化及其意义被引量：2
- 2015年
- 目的 探讨自噬在实验性急性坏死性胰腺炎（ANP）大鼠发病中的变化及其意义.方法 按随机数字法将18只SD大鼠随机分为对照组、ANP组、ANP＋雷帕霉素组.采用腹腔注射20％ L-精氨酸的方法制作大鼠ANP模型,造模后9h处死.ANP＋雷帕霉素组于造模前30 min按大鼠体质量1.2 mg/kg腹腔注射雷帕霉素.对照组予腹腔注射等量0.9％ NaCl溶液.ELISA方法检测各组大鼠血清胰蛋白酶原活化肽（TAP）、IL-1、IL-6、TNFα水平,进行胰腺组织病理评分,电子显微镜下观察大鼠胰腺腺泡细胞自噬相关结构,实时定量-PCR、Western蛋白印迹法及免疫组织化学检测大鼠胰腺组织自噬标志物微管相关蛋白轻链3（LC3）-Ⅱ及Beclin-1 mRNA和蛋白的表达.组间均数比较采用单因素方差分析.结果 成功建立大鼠ANP模型,胰腺病理评分显示ANP＋雷帕霉素组腺泡细胞坏死评分为2.19±1.38,高于ANP组（0.97±0.68）,差异有统计学意义（F=33.75,P＜0.05）.Western蛋白印迹法显示ANP组LC3-Ⅱ及Beclin-1蛋白表达（分别为35.25±2.68和49.40±5.28）明显高于对照组（分别为1.54±0.16和0.78±0.06）;而ANP＋雷帕霉素组LC3-Ⅱ及Beclin-1蛋白表达量（分别为123.53±3.21和76.41±3.80）比ANP组更高,差异均有统计学意义（F=2 045.54、326.87,P均＜0.01）.免疫组织化学法显示ANP＋雷帕霉素组LC3-Ⅱ及Beclin-1蛋白表达量（分别为7 570.63±4 357.67和3 418.09±2 035.78）明显高于ANP组（分别为1 926.53±1 414.44和536.11±403.10）,差异均有统计学意义（F=39.83、41.58,P均＜0.01）.Beelin-1 mRNA在ANP组的表达（107.12±29.10）较对照组（7.01±3.39）明显升高,差异有统计学意义（F=3.61,P＜0.05）,但在ANP＋雷帕霉素组的表达（97.63±65.38）与ANP组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.LC3-Ⅱ mRNA在ANP组的表达（1.76±1.59）与对照组（1.51±0.95）相比差异无统计学意义（P＞0.05）,但在ANP＋雷帕霉素组的表达（4.37±1.
- 刘晓郭晓榕张蓓蓓李洁吴敏湛先保
- 关键词：自噬胰蛋白酶原
- 自噬及其在急性胰腺炎中的研究进展被引量：2
- 2012年
- 自噬是广泛存在于真核生物中的生命现象，贯穿于正常细胞生长发育和生理病理过程中。该现象首先由Ashford和Porter于1962年在人肝细胞中观察到，并将其命名为autophagy。Scince于2005年将自噬列为科技领域的六大研究方向之一，次年Autophagy杂志成立，自噬近来已成为许多领域的研究热点。
- 刘晓湛先保
- 关键词：急性胰腺炎自噬生命现象真核生物病理过程人肝细胞
