吴文燕
- 作品数：4 被引量：14H指数：3
- 供职机构：中国中医科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 丹参ERF转录因子SmERF1基因的表达分析和亚细胞定位被引量：6
- 2013年
- 目的:对前期已经克隆的丹参SmERF1基因进行聚类分析,分析SmERF1基因在不同诱导子处理后不同时间的表达情况;并对其进行亚细胞定位分析。方法:利用MEGA5软件对SmERF1基因及拟南芥ERF基因家族进行聚类分析;利用半定量RT-PCR方法,分析SmERF1基因在不同诱导子处理后不同时间的表达情况;将SmERF1与GFP融合,在洋葱表皮瞬时表达,以确定SmERF1蛋白表达部位。结果:丹参SmERF1属于ERF家族第Ⅶ亚族;YE+Ag+诱导对SmERF1基因的表达没有影响,ABA和MeJA可以抑制该基因的表达,而水杨酸诱导会出现先抑制,后随处理时间加长,SmERF1基因表达又恢复;亚细胞定位确定SmERF1基因在细胞核内特异表达。结论:SmERF1是一个AP2/ERF转录因子,属于AP2/ERF家族第Ⅶ亚族,其表达受ABA,SA,MeJA等激素调节控制。
- 吴文燕蒋喜红刘春生黄璐琦申业
- 关键词：丹参ERF转录因子亚细胞定位
- 转化次丹参酮二烯酿酒酵母全细胞催化体系的构建被引量：4
- 2013年
- 丹参酮是中药丹参的重要活性成分之一,其代谢途径尚未明确。快速筛选和鉴定丹参酮生物合成途径相关基因具有重要意义。铁锈醇作为丹参酮代谢途径中间产物,其产量相对较低,为得到大量铁锈醇用来作为下游P450功能鉴定的底物进行下游途径解析,迫切需要建立高效转化次丹参酮二烯至铁锈醇的体系。本文以酿酒酵母为宿主,构建了含有催化次丹参酮二烯生成铁锈醇的CYP76AH1及P450还原酶SmCPR1全细胞催化体系,并在DNA及mRNA水平对其进行了表征。通过透性剂处理,实现了一步生物转化合成铁锈醇,转化效率达到了69.9%。该研究证实含有CYP76AH1及来源于丹参的细胞色素还原酶SmCPR1的酿酒酵母能够将次丹参酮二烯转化为铁锈醇,研究结果不仅为生物转化生产铁锈醇提供了一个有效平台,还可以用于鉴定丹参酮下游合成的其他CYP450的功能。
- 蔡媛郭娟周雍进朱志伟吴文燕黄璐琦陈敏赵宗保
- 关键词：丹参酿酒酵母全细胞催化
- 丹参转录因子SmWRKY1蛋白的表达和纯化条件优化研究被引量：3
- 2014年
- WRKY转录因子是一类含有高度保守的WRKY结构域的锌指蛋白，是植物所特有的转录因子家族。该研究将已克隆的 SmWRKY1 cDNA构建到原核表达载体pET28a上，转化大肠杆菌BL21（DE3）进行诱导表达，SDS-PAGE结果显示该蛋白的大小约36 kDa，与预测的蛋白相对分子质量一样，说明该基因在大肠杆菌中成功表达。对影响蛋白表达的4个因素：诱导时间、诱导温度、IPTG浓度及诱导前菌液的浓度进行优化，结果表明在大肠杆菌BL21（DE3）中，当A600达到约1.0~1.5时，加入0.2 mol·L-1的IPTG，在20 ℃诱导培养12 h后SmWRKY1蛋白的表达量较高。原核表达产物SmWRKY1蛋白以包涵体的形式存在，采用尿素提取包涵体蛋白，用Ni2＋亲和色谱法纯化表达蛋白，纯化后蛋白的质量浓度为2.454 g·L-1。经蛋白质印迹检测，His-Tag单克隆抗体可以特异性的识别SmWRKY1蛋白，进一步证实丹参SmWRKY1蛋白在大肠杆菌中成功表达。本研究为进一步开展 SmWRKY1 基因的表达与丹参酮类等化合物的生物合成相关研究奠定了工作基础。
- 刘玉忠申业荣齐仙吴文燕李瑞博吴志刚陈敏
- 关键词：丹参包涵体蛋白蛋白质印迹
- 丹参SmJAZ1蛋白原核表达及条件优化被引量：2
- 2012年
- 目的:在前期克隆丹参SmJAZ1基因的cDNA全长基础上,为研究丹参SmJAZ蛋白的功能,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达丹参SmJAZ1蛋白,并对其表达条件进行优化。方法:利用分子克隆的方法将丹参JAZ1基因构建到原核表达载体pET32a上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中进行诱导表达。结果:对影响重组蛋白表达的4个因素,即诱导温度、诱导时间、IPTG浓度、及IPTG添加时间进行优化,确定丹参SmJAZ1重组蛋白最适表达条件。IPTG浓度对目的蛋白的表达量没有显著影响;随诱导时间和诱导温度增加,SmJAZ蛋白的表达量增加;而IPTG添加时间对蛋白的表达量有明显影响。结论:丹参JAZ1蛋白在30℃温度条件下,重组菌生长2 h(A600=0.9),加入0.1 mmol.L-1浓度的IPTG,诱导20 h后,表达条件最合适。
- 张利华吴文燕黄璐琦申业
- 关键词：丹参原核表达
