孙明颢
- 作品数：2 被引量：8H指数：2
- 供职机构：武汉大学生命科学学院病毒学研究所更多>>
- 发文基金：武汉市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 丙型肝炎病毒E2基因DNA免疫实验动物研究被引量：2
- 2002年
- 将编码丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ２蛋白４１７～７５０位氨基酸的ＤＮＡ片段 克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ ３．１（－）中的ＣＭＶ ＩＥ启动子下游，构建成ＨＣＶ Ｅ２重组真核表达质粒 ｐｃＥ２。ＥＬＩＳＡ法检测ｐｃＥ２ ＤＮＡ免疫兔血清中的Ｅ２抗体变化和维持规律，结果显示免疫２０ｄ已有 抗体产生，３０ｄ后开始进入高峰，４０ｄ时达到最高值，至第９０ｄ抗体水平保持平稳，抗体滴度 达到１∶１６００左右。流式细胞计数仪（ＦＡＣＳ）检测ｐｃＥ２ ＤＮＡ免疫鼠ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞变 化情况，与注射空载体ｐＣＤＮＡ３．１（－）的阴性鼠相比，ＣＤ４＋淋巴细胞水平略有上升，ＣＤ８＋ 细胞水平有较大升高，增幅达３５．４６％。免疫组化检测结果显示注射ｐｃＥ２的小鼠组织中有明显 的阳性着色，而注射ｐｃＤＮＡ３．１（－）的对照组小鼠免疫组化结果为阴性。以上结果表明：ｐｃＥ２ 在实验动物内表达出的ＨＣＶ Ｅ２蛋白可以引起免疫动物的体液免疫应答和细胞免疫应答，尤其 是ＭＨＣ－１限制性杀伤性ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞水平的提高对清除 病毒是十分有利的，因此ＨＣＶ Ｅ２ ＤＮＡ免疫有可能成为预防和治疗ＨＣＶ感染的一条新途径。
- 刘源洁叶林柏徐进平郜金荣冯磊孙明颢李江吴正辉
- 关键词：丙型肝炎病毒HCVDNA免疫E2基因实验动物
- 乙型肝炎病毒全长PreS蛋白基因在酵母中的表达被引量：6
- 2003年
- 应用直接提取法从武汉地区乙型肝炎病人患者阳性血清中提取HBV基因组,以此作为模板,用引物PCR方法获得全长preS基因,该片段的DNA大小1 203bp.克隆到pUCm-T载体中,应用M13通用引物进行序列测定,与中国HBV标准株序列比较,证实基因型为Adr亚型。有24个核苷酸不同,preS基因包含3个起始密码ATG分别为preS1,preS2,和S的翻译起点。然后将preS基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,将Sal I线性化的pPIC9K-preS质粒用电击法导入巴斯德—毕赤酵母GS115His-中。通过MD-G418平板筛选和5AOX1和3AOX1引物PCR鉴定获得稳定重组HBV全长preS基因的His+Mut+酵母工程菌株。此酵母菌株在合适的培养条件和甲醇诱导下高效表达产生全长PreS蛋白并可分泌到培养液中,SDS-PAGE显示培养液中含有分子量约为48kDa的带;微孔ELISIA法证实表达并分泌到培养液中的PreS蛋白能够与HBV抗体阳性血清发生特异性反应。
- 孙明颢叶林伯郜金荣贺石汉吴正辉
- 关键词：乙型肝炎病毒ADR亚型疫苗毕赤酵母表达系统
