张庭瑛
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：温州医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 表达人冠状病毒NL63棘突蛋白不同片段的重组痘苗病毒的制备与表达分析被引量：1
- 2011年
- HCoV-NL63是新近发现的人冠状病毒,对其外膜糖蛋白-棘突蛋白的表达及功能的研究仍有待深入。本研究利用天坛株痘苗病毒载体,克隆构建可表达HCoV-NL63棘突蛋白四个片段(N端棘突蛋白:S1;C端棘突蛋白:S2;受体结合区大片段:RL;受体结合区小片段:RS)的重组痘苗病毒(vJSC1175-S1;vJSC1175-S2;vJSC1175-RL;vJSC1175-RS),酶切测序证实表达载体构建正确,免疫荧光分析(IFA)各重组痘苗病毒中棘突蛋白不同片段的表达与定位,Western-Blot分析表明各种重组蛋白表达正确。分析结果显示:4种重组蛋白均能有效表达,S1、RL及RS蛋白的荧光主要分布在细胞膜上,而S2蛋白的荧光则主要分布于细胞浆,各个片段的分子量大小与文献报道相同,并可进行正确的翻译修饰(糖基化)。本研究首次采用痘苗病毒天坛株载体构建制备了表达HCoV-NL63棘突蛋白不同片段的重组痘苗病毒,为进一步分析人冠状病毒HCoV-NL63棘突蛋白的结构功能及探索其抗原性和免疫原性奠定了基础。
- 赵国霞周为民陆柔剑王惠娟赵敏张庭瑛邓瑶高基民谭文杰
- HCV免疫学诊断抗原与链亲和素融合蛋白的制备及应用研究
- 2011年
- 目的 制备带有链亲和素（SA）标签的丙型肝炎病毒（HCV）融合蛋白,并初步探讨其在抗-HCV ELISA检测中的应用.方法 构建了HCV诊断抗原与链亲和素融合蛋白重组表达质粒pET-11d-C44P-SA,在大肠埃希菌BL21（DE3）中表达,并用Western Blot进行鉴定,表达的融合蛋白经镍金属螯合（Ni-NTA）层析柱进行纯化,透析复性后分别包被生物素化以及普通酶联板,进行人血清抗-HCV检测.结果 成功构建了带有SA标签的重组表达质粒,其在大肠埃希菌BL21（DE3）中实现高效表达,制备的融合蛋白纯度可达90%以上.建立ELISA法进行人血清抗-HCV检测显示：融合蛋白包被生物素化酶联板检测灵敏度与特异性明显高于普通酶联板.结论 构建的融合蛋白作为包被抗原,结合利用SA标签与生物素化酶联板,明显提高了抗-HCV检出的灵敏度与特异性,该策略为进一步提高抗-HCV检测试剂的质量打下了基础.
- 张庭瑛鲁健赵敏赵国霞邓瑶毕胜利高基民谭文杰
- 关键词：肝炎病毒属抗原
- HCoV-NL63 N蛋白不同片段的表达纯化及血清学检测应用分析被引量：2
- 2011年
- 将HCoV-NL63核衣壳蛋白N端（Np1~154aa）、C端（Cp141~306aa）基因片段克隆到原核表达载体pET30a（＋）上进行原核表达,制备相应的纯化蛋白Np、Cp蛋白,利用Np、Cp蛋白建立基于Western-Blot条带印迹的HCoV-NL63抗体检测法,并与基于全长N蛋白（Nf）的HCoV-NL63抗体检测法相平行筛查了50份成年体检血清。结果显示：50份成年体检血清中,采用Nf、Np、Cp分别检出25、27、36份HCoV-NL63抗体阳性血清,检出率分别为50%、54%、72%。不同N蛋白与血清反应抗体阳性谱存在差异,其中Np与Nf检出一致率为64%,Cp与Nf检出一致率为54%,而Np与Cp检出一致率为54%。本研究表明人冠状病毒NL63在我国人群中感染常见,N蛋白C端（Cp）检出率比全长N（Nf）及N端（Np）要高,Nf、Np、Cp在抗体检测上存在不一致性。这为HCoV-NL63血清学试剂研发及免疫学研究提供了依据与实验基础。
- 赵敏张庭瑛周为民赵国霞张陵林高基民谭文杰
- 关键词：HCOV-NL63原核表达核衣壳蛋白血清学检测
