周为民
- 作品数：64 被引量：299H指数：9
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 痘病毒科不同病毒属特异的PCR检测方法的建立
- 2010年
- 目的:建立可准确、快速地鉴别诊断可感染人的不同属痘病毒的特异PCR方法。方法:设计针对正痘病毒属、副痘病毒属和传染性软疣病毒属的多对特异引物,并制备相应的DNA模板,针对不同的模板优化引物与反应条件,分别进行检测筛选,建立病毒属特异的单独与多重PCR方法。结果:单一模板的PCR扩增反应中,正痘病毒的检测敏感性可达101拷贝/μL(引物为OPEaL-F1880/OPEaL-R2057),副痘病毒的检测敏感性可达101拷贝/μL(引物为PP2/PP3),传染性软疣病毒的检测敏感性为100 pg/μL体系(引物为MCV1/MCV2);混合模板的PCR扩增反应中,各属特异的引物均可获得预期大小的特异片段。结论:我们建立的PCR诊断方法,可用于痘病毒科不同病毒属感染的实验室特异快速鉴别诊断。
- 周为民王慧娟张陵林谭文杰董小平阮力
- 关键词：PCR检测
- BSL-3实验室医疗废弃物专用包装袋的封口方式及层数对高压灭菌效果的影响被引量：5
- 2019年
- 目的对感染性废物的包装给出一个合理的包装层数和封口方式,在指定的高压灭菌程序下,达到更好的高压灭菌效果。方法在指定的高压程序P4、P9下,针对医疗废弃物专用包装袋采用不同的包装层数和封口方式(包装层数分别为单层、双层、三层;封口方式分别是轻微折叠、高压胶带、尼龙扎带封口);通过用生物指示剂对内部感染性废物的上部、中部、底部进行检测,评价不同组合方式下的高压灭菌效果。结果1)在P4高压程序下,三层医疗废弃物专用包装袋包装封口方式按轻微折叠、高压胶带、尼龙扎带封口,内部感染性废物上部、中部、下部的生物指示剂的阴性率分别为上部是100%、0%、0%,中部是45%、0%、0%,底部都是0%。二层医疗废弃物专用包装袋包装封口方式按轻微折叠、高压胶带、尼龙扎带封口,内部感染性废物上部、中部、底部的生物指示剂的阴性率分别为上部是100%、85%、0%,中部是67%、20%、0%,底部是10%、0%、0%。一层医疗废弃物专用包装袋包装封口方式按轻微折叠、高压胶带、尼龙扎带封口,内部感染性废物上部、中部、底部的生物指示剂的阴性率分别为上部是100%、100%、0%,中部是70%、45%、0%,底部是12.5%、0%、0%。(2)在P9高压程序下,三层医疗废弃物专用包装袋包装封口方式按轻微折叠、高压胶带、尼龙扎带封口,内部感染性废物上部、中部、底部的生物指示剂的阴性率分别为上部均是100%,中部是100%、100%、70%,底部是100%、100%、30%。二层医疗废弃物专用包装袋包装封口方式按轻微折叠、高压胶带、尼龙扎带封口,内部感染性废物上部、中部、底部的生物指示剂的阴性率分别为上部均是100%,中部均是100%,底部是100%、100%、60%。一层医疗废弃物专用包装袋包装封口方式按轻微折叠、高压胶带、尼龙扎带封口,内部感染性废物上部、中部、底部的生物指示
- 甄维蔡琨史海月张靖韩卫芳周为民武桂珍
- 关键词：高压灭菌
- Epstein-Barr病毒膜抗原在昆虫细胞中的表达
- 1999年
- 目的 探索影响EpsteinBarr病毒膜抗原(EBVMA)在昆虫细胞中表达的因素。方法 携有截去穿膜区序列的EBVMA基因的重组昆虫杆状病毒感染不同生长阶段及生长条件的昆虫细胞,应用免疫打点法及MasterImagineVDS影像摄录分析系统测定目的蛋白的表达量。结果 重组病毒感染不同生长阶段的细胞,MA表达量不同。处于对数生长早期的细胞表达量明显高于处于对数生长晚期及静止期的细胞。将不同生长阶段的细胞补充新鲜培养液,MA的表达量在原基础上有所提高。进一步研究表明,在感染重组病毒之前,更换新鲜培养液,同时在感染过程中补充葡萄糖,L谷氨酰胺等营养物质,会大大提高MA表达量。结论 细胞培养液中营养物质的消耗和代谢产物的蓄积是影响EBVMA在昆虫细胞中表达的主要因素。
- 卢婧周为民谷淑燕
- 关键词：EB病毒昆虫细胞病毒抗原培养基
- 22例SARS感染愈后连续5年特异性IgG抗体随访分析
- 2010年
- 为分析SARS冠状病毒(SARS-CoV)IgG抗体在SARS感染康复者体内的持久性与变化,本研究自2004年3月开始,每年采集北京地区SARS感染康复者血清标本,采用商品化的冠状病毒(变异株)IgG抗体间接ELISA检测试剂盒,对其中22名SARS康复者中的SARS-CoVIgG抗体进行连续五年随访检测与分析。结果表明:在愈后第1年,所有血清SARS-IgG抗体皆为阳性。第2、3年处于平台期,滴度仍维持较高的水平。第4年抗体滴度有明显下降趋势。第5年IgG抗体基本转阴。研究发现SARS-CoVIgG抗体可维持3年以上,第4年之后明显下降。本研究为SARS感染诊断与防治、免疫应答及疫苗效力评价等提供了重要依据。
- 王慧娟张陵林谭文杰周为民严伟铮彭堃阮力
- 关键词：SARS-COVIGG抗体酶联免疫吸附实验
- 肠道病毒A组71型热力和常见3种化学消毒剂灭活效果的研究被引量：4
- 2020年
- 目的评价热力灭活和3种常见化学消毒剂对肠道病毒A组71型(enterovirus A71,EV-A71)的灭活效果,为肠道病毒二级生物安全实验室实验活动后的消毒工作提供基础数据。方法分别在不同温度和不同消毒剂浓度下,按照不同的作用时间处理一定滴度的EV-A71病毒,将灭活处理后的病毒接种于96孔细胞培养板中,逐日观察并记录细胞病变效应,最后计算病毒处理液的病毒滴度。结果EV-A71病毒在56℃加热灭活30 min后可被有效灭活(灭活对数值>6),在65℃加热灭活30 min、70℃加热灭活10 min后,无细胞病变效应发生;3种化学消毒剂在一定浓度和作用时间下可以有效灭活EV-A71病毒。结论EV-A71病毒的灭活效果与热力灭活温度、化学消毒剂浓度和处理作用时间等因素有关,对EV-A71的灭活曲线进行研究,有利于在不同灭活环境下灭活条件的选择。
- 李婕严冬梅张勇许文波祝双利周为民武桂珍
- 关键词：实验室生物安全
- 人冠状病毒NL63核壳蛋白和棘突蛋白的表达及其在血清学检测中的初步应用被引量：6
- 2010年
- 目的:重组表达人冠状病毒NL63(HCoV-NL63)的核壳蛋白(N蛋白)及棘突蛋白(S蛋白),用于检测血清中的相应抗体。方法:用原核表达系统表达HCoV-NL63的N蛋白,建立检测N抗体的Werstern印迹法;用真核表达系统表达HCoV-NL63的S蛋白,建立检测S抗体的间接免疫荧光(IFA)法。结果:经Werstern印迹检测,重组S蛋白和N蛋白表达正确;初步建立了N蛋白纯化方法。利用建立的检测方法,检测了100份正常成人血清,总阳性率为81%。其中S抗体阳性率为66%,N抗体阳性率为38%,S抗体和N抗体均为阳性的占总数的22%,双抗体均为阴性的占总数的19%;S抗体的检出率明显高于N抗体。结论:重组HCoV-NL63N蛋白及S蛋白表达成功;S抗体和N抗体共同检测可获得较好的检测结果,减少漏检。
- 周为民张陵林陆柔剑王慧娟谭文杰阮力
- 关键词：核壳蛋白血清学检测
- 北京地区成人呼吸道感染患者中HCoV-HKU1感染的初步分析与基因型确定被引量：2
- 2013年
- 目的：对北京地区成人呼吸道感染患者中人冠状病毒（HCoV）HKUl的感染状况进行初步分析，了解其流行分布、临床特点，并确定流行株的基因型别。方法：2011年1月～2012年1月从北京地区成人呼吸道感染患者中收集鼻咽拭子标本559份，利用靶向棘突蛋白S与核心蛋白N的2种巢式PCR方法进行HCoV—HKUl筛查，并对阳性片段进行序列测定，以确定其基因型别；同时，对阳性标本进行常见呼吸道病毒的共感染筛查，进而分析HCoV—HKUl感染的临床表现和流行病学特点。结果：559份鼻咽拭子标本中检出HCoV—HKUl阳性9例（1．61％），其中3例合并HCoV-0C43感染；感染患者临床表现为急性呼吸道症状，以发热（88．9％）、咽痛（66．7％）、寒颤（68％）、流涕（55．6％）和咳嗽（44_4％）为主，其中1例有系统性红斑狼疮史；阳性基因片段系统进化分析发现这9例感染均为HCoV—I-IKUlB型。结论：北京地区近年成人呼吸道感染患者中HCoV—HKUl感染率较低（1．61％）。其流行株基因型为B型。
- 段希洁陆柔剑俞晓燕彭堃王文周为民张陵林王仲谭文杰
- 关键词：人冠状病毒呼吸道感染成人基因型
- 甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白单抗杂交瘤细胞株的制备与初步鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的:建立具有高特异、高效价的甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白(HA)单抗的杂交瘤细胞株。方法:以纯化的昆虫杆状病毒表达的甲型H1N1流感病毒HA蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,通过有限稀释法筛选阳性克隆,经ELISA和Western blot分析单抗的特性和特异性。结果:获得6株甲型H1N1流感HA抗原特异单克隆抗体杂交瘤细胞株,抗原肽库ELISA检测结果表明其中3株(1E12,3F12,1C11)单抗只与甲型H1N1流感HA抗原肽库反应,不与H5N1病毒HA抗原肽库反应;Western blot分析表明,单抗1B3只特异识别甲型H1N1流感HA抗原,而与其他季节性甲流病毒(H1,H3)及人禽流感H5N1病毒不反应。结论:所获杂交瘤细胞株特异性强,效价高,分泌抗体性能稳定,为分析甲型H1N1流感病毒抗原性位点、建立诊断试剂奠定了基础。
- 王慧娟张陵林周为民谭文杰许洪林王文玲周剑芳舒跃龙阮力
- 关键词：单克隆抗体
- 人偏肺病毒TaqMan-MGB探针实时定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用被引量：7
- 2008年
- 目的:建立人偏肺病毒(hMPV)核酸特异的快速、敏感的TaqMan-MGB探针实时定量RT-PCR检测方法。方法:分别设计hMPV特异的引物与荧光标记探针,合成hMPV绝对定量RNA模板,建立实时荧光定量PCR方法,并与常规RT-PCR平行比较,对其灵敏性、特异性和可重复性,以及用于临床样本的适用性等进行评价。结果:本方法可对hMPV进行特异性诊断,检测灵敏度可达10拷贝/25μL,检测线性范围至少可达101～106拷贝/反应,且实验重复性好,初步应用于北京地区采集的158份临床鼻咽拭子标本,定量RT-PCR检出31份标本阳性,明显高于常规RT-PCR方法(22/158)。结论:建立了人偏肺病毒TaqMan-MGB探针定量RT-PCR检测方法,并初步证实可用于临床鼻咽拭子标本的检测,为开展hMPV的流行监测及临床早期诊断提供了技术手段。
- 陆柔剑张陵林谭文杰周为民王仲彭堃阮力
- 关键词：人偏肺病毒TAQMAN-MGB探针实时定量PCR
- 2012年发现的新冠状病毒分子检测方法的建立与探针优化被引量：3
- 2012年
- 目的建立2012年确定的新冠状病毒的分子检测方法，并筛选优化引物与探针。方法依据最先发表的208bp长的新冠状病毒1b片段核酸序列，比对分析后设计合成常规RT—PCR引物1对及荧光定量RT—PCR引物1对与TaqMan探针2条（TZl，TZ2），同时合成锁核酸修饰的TaqMan探针2条（LNA-TZl，LNA-TZ2）。建立检测新冠状病毒感染的常规RT—PCR方法与4种荧光定量RT—PCR，分析比较其灵敏度与特异性，同时参照欧洲发表的2种荧光定量RT—PCR引物与探针对（upE，ORFlb）建立相应方法，以合成的阳性模板比较6对荧光定量RT—PCR引物与探针的检出灵敏度。结果所合成的常规RT—PCR与荧光定量RT—PCR引物与探针皆有较好特异性，不能扩增其他人冠状病毒模板及常见呼吸道病毒模板，检出下限达50～500拷贝／反应。锁核酸修饰TaqMan探针可改善荧光定量PCR检测方法的反应性能，经锁核酸修饰的TaqMan探针与常规TaqMan探针相比，检出率提高10倍左右，其中LNA—TZl与upE探针对具最佳反应性能。结论本研究所建立的常规RT—PCR与荧光定量RT—PCR可用于新冠状病毒的分子检测，并推荐使用LNA—TZl与upE探针对。本研究为新冠状病毒分子检测方法应用与改进奠定了基础。
- 周为民陆柔剑耿合员李辉段希洁杨扬谭文杰
- 关键词：冠状病毒属分子诊断技术核酸类
