罗佳
- 作品数：10 被引量：6H指数：1
- 供职机构：广西大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区科技攻关计划北京市自然科学基金更多>>
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- 猪APOBEC3F基因克隆及真核表达载体的构建与鉴定被引量：4
- 2011年
- 目的克隆猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(apolipoprotein B mRNA editing enzyme,catalyticpolypeptide 3F,APOBEC3F)基因,构建真核表达载体实现其在体外表达与鉴定。方法分离4头21周龄,体质量25～30kg的雌性健康五指山猪的外周血单个核细胞,Trizol法提取细胞总RNA,RT-PCR特异性扩增目的基因,目的基因插入真核表达载体pDsRed1-N1及改造的pCDNA3-Flage载体构建表达质粒并在PK-15细胞中进行表达。激光共聚焦显微镜及Western blot鉴定目的基因的表达。结果克隆的目的基因与公布的基因序列同源性达99%;激光共聚焦显微镜显示目的基因在PK-15细胞表达,且表达产物定位于细胞质内;Western blot检测示表达的目的蛋白大小与预期相符。结论成功构建了猪APOBEC3F真核表达载体。
- 孙宇罗佳马玉媛章金刚
- 关键词：克隆真核表达载体
- 猪D型产毒素多杀性巴氏杆菌毒素分段基因的原核表达
- 2010年
- 根据GenBank已发表的产毒素多杀性巴氏杆菌(T+Pm)toxA基因序列(AF240778)设计1对引物,从猪源D型T+Pm中扩增出toxA基因片段(3858 bp),再根据toxA基因序列设计3对引物,分别扩增出ZQ(1084 bp)、ZH(1092 bp)、HM(906 bp)3个分段基因,将其克隆至原核表达载体pET32a,转入大肠杆菌BL21中进行融合表达。经SDS-PAGE和West-ern blotting检测分析,发现ZQ、HM基因的表达产物以包涵体形式存在,大小分别为75、50 kDa,ZH基因不表达。动物试验结果表明,HM重组蛋白具有良好的免疫原性、反应原性及一定的生物学活性,而ZQ重组蛋白没有免疫原性、反应原性及生物学活性。通过间接ELISA的方法检测抗毒素的阳性猪血清,结果表明,HM重组蛋白较天然蛋白具有更高的特异性。
- 黄百花刘文娟李志勇谭春萍周松峰谭颖翌罗佳陆芹章
- 关键词：毒素基因原核表达
- 猪APOBEC3F基因克隆及真核表达载体的构建与鉴定
- 目的：克隆猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(apolipoproteiIl B mRNA editing cnzymc,catalyticpolypeptide 3F,APOBEC3F)基因,构建真核表达载...
- 孙宇马玉媛罗佳章金刚
- 关键词：基因克隆真核表达载体体外表达
- 反转录病毒载体介导的猪APOBEC3F在猪源细胞PK15中的表达
- 2012年
- 目的：利用反转录病毒载体构建猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白（APOBEC）3F重组质粒,并实现其在猪肾细胞PK15中的表达。方法：用RT-PCR方法扩增五指山猪来源的外周血淋巴细胞APOBEC3F基因,将其定点插入反转录病毒载体pMSCV neo中,同时于插入位点两侧分别添加FLAG和GFP标签,构建重组质粒pMSCV-FLAG-A3F-GFP,并进行酶切、测序鉴定;将鉴定正确的重组质粒与pVSV-G、pGag-Pol共转染包装细胞HEK293T,分别于转染后48~72 h收集细胞的培养上清以获得假型病毒粒子;用该假型病毒感染猪源细胞PK15,通过PCR、Western印迹检测目的基因的整合及表达。结果：PCR扩增到1254 bp的猪APOBEC3F基因,重组质粒pMSCV-FLAG-A3F-GFP经酶切、测序,结果无误;3质粒共转染HEK293T细胞包装出的假型病毒感染PK15细胞后观察到GFP表达;从感染假型病毒的PK15细胞基因组中扩增到1254 bp的猪APOBEC3F基因,Western印迹检测到78.1×103的猪APOBEC3F蛋白的表达。结论：实现了反转录病毒载体介导的猪APOBEC3F在猪源细胞PK15中的整合与表达,为深入研究该分子对猪内源性反转录病毒（PERV）的抑制作用奠定了基础。
- 罗佳张念孙宇吴健敏陆芹章马玉媛章金刚
- 关键词：反转录病毒载体真核表达
- 应用RNAi方法沉默猪内源性反转录病毒及效果评价
- 目的：尝试RNAi(RNA interference)方法沉默猪源细胞系PK-15细胞中的PERV(Porcineendogenous retrovirus)，并通过反转录酶活性及pol基因QPCR检测评价沉默效果。方法...
- 孙宇马玉媛罗佳章金刚
- 关键词：RNAI技术基因沉默
- 猪APOBEC3F在PK15细胞内的稳定表达及其对PERV的突变抑制作用研究
- 载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白(apolipoprotein B mRNA editing enzyme,catalytic polypeptide,APOBEC)是一种机体固有免疫抗病毒因子,其主要的生物学功...
- 罗佳
- 关键词：APOBEC猪内源性反转录病毒
- 文献传递
- 大花序桉心材形成与木质部薄壁细胞生理代谢变化研究
- 大花序桉（Eucalyptus cloeziana）生长速度快，心材比例大，色泽优美，耐腐、稳定性好，可用于制作实木家具和地板等。为了解大花序桉心材形成与木质部薄壁细胞生理代谢变化，本文采用树干解析法分析了边材和心材变异...
- 罗佳
- 关键词：大花序桉化学成分代谢途径
- 猪AOPBEC3F在PK15细胞内的稳定表达及其对PERV的突变抑制作用研究
- 载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白(apolipoprotein BmRNA editing enzyme，catalytic polypeptide，APOBEC)是一种机体固有免疫抗病毒因子，其主要的生物学功能...
- 罗佳
- 关键词：猪内源性反转录病毒
- 文献传递
- 广西猪支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及药敏试验被引量：1
- 2010年
- 为掌握广西猪传染性萎缩性鼻炎(AR)发病情况、猪支气管败血波氏杆菌(Bb)流行血清型及耐药情况,分别从广西南宁、上林、贵港、武鸣等地4个规模化猪场和1个屠宰场采集到247份猪鼻腔分泌物样品,径常规细菌分离获得57株Bb可疑菌株,以生理生化试验和PCR鉴定等方法对可疑菌株进行鉴定,并根据O、K抗血清凝集试验进行分型。结果表明,57株可疑菌株均确定为Bb,其中6株为I相Bb、14株为II相Bb、37株为III相Bb,且I相Bb毒力较II相、III相Bb毒力强;药敏试验结果表明,大多数Bb对复方新诺明、阿米卡星、新霉素、庆大霉素和环丙沙星等高度敏感,对阿莫西林、青霉素、痢特灵、氨苄青霉素、呋喃妥因、头孢氨苄、林可霉素、头孢噻吩、恩诺沙星、万古霉素和利福平等不敏感。
- 吴其彪谭春萍罗佳施佳露陆芹章
- 关键词：支气管败血波氏杆菌药敏试验
- 应用RNA干扰沉默猪内源性反转录病毒被引量：1
- 2012年
- 目的:尝试应用RNA干扰(RNAi)沉默猪源PK-15细胞中的猪内源性反转录病毒(PERV),并通过反转录酶活性及pol基因相对荧光定量PCR检测沉默效果。方法:依据GenBank公布的PERV pol基因序列,采用Invitro-gen公司的BLOCK-iT RNAi Designer软件设计Stealth小干扰RNA(siRNA)序列;将合成的siRNA转染PK-15细胞,72 h后检测细胞上清PERV反转录酶活性及细胞内pol基因拷贝数并评价沉默效果。结果:反转录酶活性及pol基因拷贝数检测结果表明,设计的3条Stealth siRNA序列中,位于pol基因3272～3296 bp的序列能有效沉默PERV。结论:RNAi方法可有效使猪源PK-15细胞中的PERV沉默,为进一步研究天然抗病毒分子与PERV的相互作用提供了实验基础,同时也为猪源异种移植研究中去除PERV提供了一种可供尝试的方法。
- 孙宇马玉媛罗佳章金刚
- 关键词：RNA干扰基因沉默猪内源性反转录病毒
