马晓春
- 作品数：7 被引量：13H指数：2
- 供职机构：山东农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金山东省自主创新成果转化重大专项项目更多>>
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- 猪波形蛋白对PRRSV感染Marc-145细胞的抑制作用被引量：3
- 2012年
- 为了研究波形蛋白在介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染细胞过程中的作用,利用RT-PCR方法从PRRSV非易感细胞系猪肾细胞系PK-15细胞中扩增目的基因,克隆入pET-28a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。表达的重组猪波形蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定和纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用病毒抑制试验检测重组猪波形蛋白及多克隆抗体在PRRSV感染Marc-145细胞过程中的作用。结果表明,成功扩增猪波形蛋白基因并克隆入pET-28a载体,经诱导后得到高效表达,纯化后免疫兔子产生高价血清抗体(105)。病毒阻断结果表明,猪波形蛋白及多克隆抗体均能阻断PRRSV感染Marc-145细胞。这为以波形蛋白为基础的PRRSV受体阻断抑制剂的研究提供了实验依据。
- 马晓春孔宁高继明王彤彤黄柏成赵钦肖一红周恩民
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒波形蛋白病毒抑制受体阻断
- PRRSV GP5蛋白抗独特型单链抗体的构建表达及鉴定被引量：1
- 2011年
- 为制备只包含抗体可变区片段(Fv)的MAb2-5G2单链抗体(scFv),本研究从分泌MAb2-5G2的杂交瘤细胞中提取总RNA,反转录制备cDNA作为模板扩增重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因。以VH-linker-VL的形式通过重叠PCR制备scFv基因,构建重组表达质粒pEasy-scFv,并在大肠杆菌中获得正确表达。通过western blot和间接免疫荧光鉴定表明scFv蛋白能够被兔抗MAb2-5G2的抗体(Ab3)识别,复性后的scFv蛋白能够特异性结合Marc-145细胞。该研究结果为进一步明确MAb2-5G2结合Marc-145细胞功能区域奠定了物质基础。
- 于颖王刚宋腾飞孔宁马晓春姚永红肖一红周恩民
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征抗独特型抗体单链抗体
- 敲低非肌肉肌球蛋白IIA表达对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞的影响
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染宿主细胞是通过易感细胞上不同的病毒受体介导完成的。目前关于PRRSV细胞上受...
- 高继明马晓春孔宁张冲王向鹏周恩民
- 文献传递
- Marc-145细胞CD151蛋白主要抗原表位区的表达及其与猪繁殖与呼吸综合征病毒感染关系的研究
- 2012年
- 为研究CD151与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的关系,根据GenBank中已发表的CD151蛋白的基因序列设计并合成一对特异性引物,从Marc-145细胞中扩增出294bp的CD151基因片段并克隆入pGEX4T-3载体,转化入大肠杆菌用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定。表达蛋白纯化后用于免疫小鼠制备抗CD151蛋白血清,用ELISA和IFA检测抗血清的效价及特异性。将抗CD151蛋白血清与Marc-145细胞孵育后再感染PRRSV,观察细胞CPE验证该血清对PRRSV的阻断效果。结果表明成功构建了pGEX4T-3-CD151,获得了相对分子质量为37ku的重组CD151蛋白。制备的抗血清特异性结合Marc-145细胞并有效阻断PRRSV感染Marc-145细胞。这些研究结果为进一步阐明CD151与PRRSV感染的关系提供一定的理论基础。
- 肖一红王伟伟张璐高继明马晓春周恩民
- 关键词：CD151MARC-145细胞PRRSV
- 稳定表达猴源波形蛋白的BHK-21细胞系的建立
- 2012年
- 为建立稳定表达猴源波形蛋白的BHK-21细胞系,采用RT-PCR方法从非洲绿猴肾细胞(Marc-145)中扩增波形蛋白基因,并将其与EmGFP基因、IRES基因共同克隆到pcDNA3.1/V5-His A载体中,成功构建重组质粒pcDNA3.1-GIV。通过非脂质体转染将其转染至BHK-21细胞中,经G418加压筛选,单克隆挑取,获得稳定表达猴源波形蛋白的细胞系BHK-21-GIV。经Western-blot和RT-PCR检测,证明外源波形蛋白成功得到表达。本研究建立的稳定表达猴源波形蛋白的细胞系BHK-21-GIV,为研究波形蛋白的生物学功能及与猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞的关系提供了有利的工具。
- 马晓春高继明孔宁高丽丽王彤彤肖一红周恩民
- 关键词：波形蛋白稳定细胞系BHK-21细胞猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 波形蛋白对PRRSV感染细胞的作用研究
- 猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndro...
- 马晓春
- 关键词：繁殖与呼吸综合征病毒波形蛋白BHK-21细胞稳定细胞系
- 波形蛋白介导猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞作用的初步研究被引量：9
- 2011年
- 为了研究波形蛋白在介导PRRSV感染过程中的作用,根据GenBank中已发表的波形蛋白序列,设计特异性引物,利用RT-PCR方法从Marc-145细胞中扩增目的基因,克隆入pET-28a,转化表达菌BL21(DE3)中进行诱导表达,用SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物,将表达产物纯化后免疫BALB/c小鼠制备血清,用病毒阻断实验验证PRRSV与波形蛋白及其抗体的关系。用ELISA方法确定了重组波形蛋白与PRRSV结构蛋白N蛋白和囊膜蛋白GP5蛋白之间的关系。结果表明,成功的从Marc-145细胞中扩增出全长的波形蛋白基因,将其克隆入pET-28a,诱导后得到高效表达,表达蛋白纯化后免疫小鼠抗体效价达到105,病毒阻断实验表明波形蛋白能部分阻断PRRSV感染,其抗血清能完全阻断PRRSV感染。ELISA结果表明波形蛋白能与N蛋白结合而不与GP5蛋白结合。此结果为PRRSV感染的细胞的受体机制增添了新的内容,为PRRSV感染过程中受体间的相互作用关系研究奠定基础。
- 王伟伟张璐马晓春高继明肖一红周恩民
- 关键词：波形蛋白N蛋白
