于红
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 供职机构：重庆大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划“十一五”国家科技支撑计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 柑橘溃疡病菌快速诊断胶体金速测卡的研制被引量：2
- 2012年
- 将制备并提纯的抗Xcc单克隆抗体、多克隆抗体及重组抗体,采用间接ELISA方法对比其效价和特异性,筛选用于胶体金速测卡的最优抗体;采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗Xcc单抗Xcc-2D8,固定于金标垫上;利用双抗夹心原理,将单抗Xcc-2D6和羊抗鼠抗体分别固定于硝酸纤维素膜上,作为检测线(T线)和质控线(C线),经试验条件优化,组装胶体金速测卡密封干燥保存。对Xcc菌悬液及柑橘样本浸泡液进行检查。结果表明ELISA方法筛选出2株特异性强、稳定性好的抗体(Xcc-2D8效价为1:128 000倍、Xcc-2D6效价为1:256 000倍),应用于胶体金速测卡的研发;所研制速测卡对Xcc菌悬液的最低检测下限为1×103～1×104 cfu/mL,对多个地区的206份柑橘样本进行实际检测所得结果与qPCR方法所得结果具有较高一致性(kappa值=95.15%),混杂的柑橘组织液对检测结果无影响,检测时间控制在10min以内,检测常见细菌及植物病菌显示特异性良好,各批次速测卡无批间差异,速测卡保存方便稳定性良好。
- 殷幼平吴瑜佳于红李蒙王中康
- 关键词：胶体金单克隆抗体免疫层析
- 抗柑橘溃疡病菌三结构域稳定性重组抗体(sc-dsFv)的研制与原核表达
- 以鼠源抗柑橘溃疡病表面脂多糖的二硫键稳定性抗体dsFv为模板,利用重叠延伸PCR在重链可变区VH和轻链可变区VL之间引入一条人类抗体重链恒定区1(CH1)5’端12个氨基酸的序列作为连接肽,成功构建了单链二硫键稳定重组抗...
- 李蒙殷幼平于红吴瑜佳王中康
- 关键词：柑桔溃疡病菌复性BIACORE
- 文献传递
- 鼠源抗柑橘溃疡病菌Fab抗体库的构建
- 柑橘溃疡病/(citrus bacterial canker disease, CBCD/)是由黄单胞菌属的柑橘黄单胞柑橘亚种/(Xanthomonas citri subsp. citri,简称Xcc/)引起的一种危害...
- 于红
- 关键词：柑橘溃疡病菌噬菌体抗体库FAB抗体
- 文献传递
- 柑橘溃疡病菌二硫键稳定Fv抗体基因的构建及表达产物的生物学活性分析被引量：3
- 2009年
- 【目的】构建鼠源抗柑橘溃疡病菌二硫键稳定Fv抗体(dsFv)片段基因,原核表达并将其复性为具有免疫活性的dsFv抗体。【方法】采用PCR定点突变的方法构建dsFv重链(VH)及轻链可变区(VL)基因,分别将其连接入表达载体中,于E.coliBL21(DE3)中诱导表达,表达产物溶解后稀释入复性缓冲液中使其重折叠为dsFv抗体并纯化。SDS-PAGE及Western-blot分析表达及复性产物,BIAcore检测dsFv与Xac-LPS的亲和力,ELISA验证dsFv的特异性及稳定性。【结果】测序结果表明在VH的44位和VL的100位成功引入了半胱氨酸突变位点,实现了高效的原核表达,表达产物主要以包涵体的形式存在。SDS-PAGE分析显示VH和VL的大小为23kD,并将其成功复性,复性后大小为46kD。BIAcore分析表明dsFv对Xac-LPS保持了很高的亲和力,亲和常数(KD)达到3.40×10-10M。ELISA证明dsFv具有较高的抗原特异性并且热稳定性较scFv提高近20℃。【结论】成功表达并复性了dsFv抗体,为柑橘溃疡病菌的免疫诊断提供了高效优质的重组抗体。
- 王中康李泮志袁青于红李蒙殷幼平
- 关键词：柑橘溃疡病菌包涵体复性
