何峰
- 作品数：25 被引量：24H指数：3
- 供职机构：首都儿科研究所更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金北京市优秀人才培养资助更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小干扰RNA在心肌细胞中对柯萨奇病毒B3复制的抑制作用研究被引量：2
- 2008年
- 目的通过在原代心肌细胞培养上研究小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）介导的基因干扰对病毒增殖的抑制和细胞内免疫清除作用，评价siRNA在治疗病毒性感染中的可能性。方法体外制备BALB／c乳鼠心肌细胞，利用脂质体和电穿孔转染方法转染siRNA后感染病毒，流式细胞术、中性红染色和病毒致细胞病变作用（CPE）保护实验评价转染效率和细胞生长状态，空斑形成减少实验、RT-PCR等方法检测抑制病毒程度。结果通过在HeLa细胞上的筛选，针对病毒不同区域的siRNA呈现出不同的抗病毒作用，靶序列位于2B区的siRNA-3753能显著抑制柯萨奇病毒B3（CVB3）感染。在原代培养的心肌细胞中，转染siRNA-3753后同样显示出很好的抗病毒效果，心肌的搏动、心肌细胞的生长状况保持着较好的状态。而病毒对照和非特异性siRNA-non感染24h后，细胞停止搏动，逐步变圆，皱缩死亡。测定培养上清和细胞内的病毒滴度，电转siRNA-3753对病毒抑制率可以达到98．1％，脂质体转染siRNA-3753对病毒抑制率为78.2％。电穿孔转染效率可以达到56.03％，脂质体为9.0％。结论针对CVB3基因组2B区的siRNA在保护心肌细胞抵抗CVB3病毒感染实验中具有抑制病毒复制作用。
- 刘哲伟任红雁姚海兰肖宗慧鲁杰何峰韩继生
- 关键词：小干扰RNA病毒性心肌炎心肌细胞
- 抑制Itk表达对Jurkat细胞分泌细胞因子的影响被引量：2
- 2010年
- 目的 研究在Jurkat细胞上敲减Itk蛋白的表达对细胞增殖及炎症相关的细胞因子产生的影响,为Itk作为小分子药物靶标提供可行性实验依据.方法 针对Itk基因设计合成三个shRNAs,通过与pEGFP-C1-hItk质粒共转染,观察其抑制Itk-GFP融合蛋白的表达情况,筛选有效序列包装成慢病毒颗粒.将慢病毒颗粒感染Jurkat细胞,观测Itk蛋白的表达水平、细胞增殖情况及细胞因子的变化.结果 Itk-shRNA1感染Jurkat细胞后Itk基因的mRNA水平与细胞对照组及感染shRNAnon的对照组相比,敲减率约55%,差异有统计学意义P＜0.05.Itk蛋白的敲减导致Jurkat细胞在受刺激时增殖降低,以未感染病毒的Jurkat细胞受刺激后酶标仪检测的A值为1,Itk-shRNA1感染组平均比值为0.54,shRNAnon对照组平均比值为0.83,两组差异有统计学意义,P＜0.05.Itk-shRNA1感染组中IL-2、IL-5、IL-10及IFN-γ等细胞因子水平均较shRNAnon对照组低,差异有统计学意义,提示Itk蛋白的表达减少导致Jurkat细胞产生细胞因子减少.结论 抑制Itk表达能有效降低淋巴细胞的增殖,同时减少与炎症相关细胞因子分泌.
- 姚海兰何峰肖宗慧韩继生张阳德黄伯云刘哲伟
- 关键词：蛋白质酪氨酸激酶RNA慢病毒属
- 纳米银薇乔线在小鼠皮内连续缝合线道周围近期抗炎疗效的观察研究
- 2023年
- 目的探索纳米银薇乔线用于小鼠背部皮内连续缝合线道周围炎性细胞和炎性蛋白的表达情况,分析其近期抗炎疗效。方法对4-0普通薇乔线采用化学涂层技术制备纳米银薇乔线。18只10~12周Balb/C小鼠随机分为3组(每组各6只),剃除小鼠背部毛发,纵行切开15 mm皮肤全层切口。分别采用4-0带针普通薇乔线、抗生素薇乔线、纳米银薇乔线行皮内连续缝合。术后5 d,以纵形切口为中心,取材全层皮肤组织。采用免疫组织化学染色方法比较线道周围中性粒细胞、巨噬细胞、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达水平,并计算平均光密度(mean optical density,MOD)。原位末端转移酶标记(mediated dUTP-biotin nick end labeling,TUNEL)染色了解线道周围细胞凋亡情况。Masson染色了解线道周围胶原蛋白沉积情况。统计学方法采用单因素方差分析和student’s t检验。结果免疫组织化学染色显示,普通薇乔线、抗生素薇乔线和纳米银薇乔线的中性粒细胞MOD值为0.523±0.137、0.412±0.122、0.229±0.079;巨噬细胞MOD值为1.125±0.126、0.585±0.142、0.209±0.078;IL-6的MOD值为1.137±0.168、0.652±0.131、0.227±0.086;TNF-α的MOD值为1.219±0.124、0.573±0.109、0.179±0.045,纳米银薇乔线线道周围炎性细胞浸润、IL-6和TNF-α的表达最轻微,普通薇乔线表达最明显,3组间比较差异均有统计学意义(P值均<0.001)。TUNEL染色显示,普通薇乔线、抗生素薇乔线和纳米银薇乔线凋亡细胞的MOD值为0.167±0.035、0.478±0.151、0.125±0.035,纳米银薇乔线线道周围凋亡细胞最少,抗生素薇乔线凋亡细胞最多,3组间比较差异均有统计学意义(P值均<0.001)。Masson染色显示,纳米银薇乔线线道周围胶原蛋白沉积显著,抗生素薇乔线线道周围未见胶原蛋白沉积。结论在小鼠皮内连续缝合模型上,纳米银薇乔线的近期抗炎疗效优于抗生素薇乔线
- 刘雪来何峰宋岩彪叶茂许坚吉魏延栋杜娟
- 关键词：纳米银薇乔线皮内连续缝合抗炎平均光密度
- TGF-β和IGF-1信号通路调控肾母细胞瘤细胞增殖机制探讨被引量：7
- 2017年
- 目的肾母细胞瘤是一种高发的儿童实体瘤,发病率占儿童恶性肿瘤8%~10%,多发生于<5岁儿童,有研究表明某些信号通路可调控其增殖过程。本研究探讨TGF-β和IGF-1信号通路是否共同参与调控肾母细胞瘤细胞的增殖过程。方法采用siRNA转染实验将TGFBR1-siRNA和IGF1R-siRNA转至肾母细胞瘤细胞株G401,以转染不同siRNA分为TGFBR1-siRNA组和IGF1R-siRNA组,siRNA无关序列(non-siRNA)转染组作为对照组,每组设6个复孔。MTS方法检测TGFBR1-siRNA和IGF1R-siRNA对细胞增殖率的影响,蛋白质印迹法检测TGF-β信号通路TGFBR1及下游蛋白p-ERK、SMAD2/3和p-AKT蛋白表达情况;蛋白质印迹法检测IGF-1信号通路IGF1R及下游蛋白p-AKT蛋白表达情况。ELISA法检测细胞上清中FGF9蛋白表达。结果抑制TGFBR1和IGF1R72和96h后,细胞的增殖率受到抑制,对照组增殖率设为100%。与其相比,转染TGFBR1-siRNA 72h后的实验组和对照组的增殖率分别为(80±14)%和(100±7)%,实验组低于对照组,P=0.034;转染IGF1R-siRNA 72h后实验组和对照组的增值率分别为(85±21)%和(100±7)%,实验组低于对照组,P=0.028。转染TGFBR1-siRNA 96h后的实验组和对照组的增殖率分别为(81±13)%和(100±11)%,实验组低于对照组,P=0.021;转染IGF1R-siRNA 96h后实验组和对照组的增殖率分别为(82±17)%和(100±11)%,实验组低于对照组,P=0.038。抑制TGFBR1后,与non-siRNA组相比,下游蛋白FGF-9、p-ERK、SMAD2/3和p-AKT明显受到抑制。TGFBR1-siRNA转染72h后,实验组细胞上清中FGF9蛋白表达量显著下降,实验组为(533.85±54.64)ρg/mL,对照组为(587.34±46.83)ρg/mL,P=0.041;96h后实验组FGF9蛋白表达量仍显著低于对照组,实验组为(495.03±59.26)ρg/mL,对照组为(605.34±49.28)ρg/mL,P=0.018。TGFBR1-siRNA转染48h后,p-ERK、SMAD2/3和p-AKT蛋白表达量出现降低;72h后,p-ERK和SMAD2/3蛋白表达量仍降低。与non-siRNA转染对照组相比,IGF1R-siRNA转染72和96h后,p-AKT蛋白表达量出现降低。�
- 刘卓何峰李媛媛欧阳胜荣曹丁丁常会波马斐斐吴建新
- 关键词：肾母细胞瘤信号通路IGF1R肿瘤增殖
- 小鼠外周血心肌特异性microRNAs的变化与病毒性心肌炎相关关系初探被引量：3
- 2012年
- 目的:通过识别病毒性心肌炎小鼠和正常小鼠血浆中miR-1,miR-133,miR-206表达量的差异,分析外周血中心肌特异性microRNAs的变化与病毒性心肌炎相关关系,为探索miRNAs作为病毒性心肌炎诊断的生物标志物提供可行性的研究资料。方法:在小鼠病毒性心肌炎模型的基础上,采用荧光定量PCR方法,检测病毒性心肌炎急性期小鼠组和正常小鼠组血浆中相关miRNAs含量,并进行统计学分析。再于病毒注射后1d,3d,5d,7d,9d,11d,分别处死病毒小鼠,观察血浆miRNAs的动态变化规律。同时用Elisa检测心肌肌钙蛋白的变化,对目的 miRNAs与心肌肌钙蛋白进行相关性分析。结果:急性期时三种miRNAs血浆含量显著上调。病毒注射后3d开始上升明显,并持续保持在较高水平到7d,于9d时开始下降。发病期间,血浆miRNAs含量与心肌肌钙蛋白呈现良好的正相关性。结论:小鼠外周血中心肌特异性microRNAs在病毒性心肌炎发病过程中的呈现明显上调并与病程和相应指标存在相关关系,为miRNAs作为病毒性心肌炎诊断的生物标志物提供了重要线索。
- 黄丽颖肖宗慧姚海兰何峰张庆华刘哲伟
- 关键词：病毒性心肌炎血浆MIRNAS实时定量PCR
- 心肌特异性microRNA修饰型CVB3病毒诱导小鼠免疫保护作用的研究
- 2016年
- 利用基因组中含肌肉特异性miRNA互补序列的修饰型CVB3病毒感染小鼠,研究修饰型病毒在小鼠体内的复制状况以及诱导小鼠免疫保护作用的能力。前期我们在CVB3m株病毒基因组中插入miRNA-133和miRNA-206的互补序列获得修饰型CVB3病毒,命名为CVB-3*T。以对照组(CVB-CON)和紫外灭活野生型CVB3m株病毒组(UV-CVB3-WT)作为对照,测定各组病毒对小鼠的LD50剂量、CVB-3*T对小鼠的致死率、感染小鼠心脏和胰腺的病毒滴度以及心脏病理损伤情况,并检测小鼠血清中炎性细胞因子及中和抗体表达水平以及免疫后小鼠抗病毒能力。结果显示,CVB-3*T对小鼠的LD50明显高于对照组;以相同剂量病毒感染小鼠,CVB-3*T可以明显改善小鼠的生存率,心肌部位的病毒量较对照组明显降低,心肌处病理损伤减轻,而胰腺部位的病毒滴度无明显改变;CVB-3*T组小鼠血清中IFN-γ和TNF-α的含量较UV-CVB3-WT组明显升高,IL-4含量无差异;免疫后,CVB-3*T可诱发机体产生高效价抗CVB3中和抗体,可提高小鼠抵抗病毒再次感染的能力。修饰型CVB3病毒感染可以降低病毒对心肌的亲嗜性,激发小鼠抗病毒免疫,还可以诱导小鼠产生抵抗病毒再次感染的能力。本研究为探索制备CVB3疫苗新途径提供了实验证据。
- 何峰肖宗慧刘卓姚海兰冯淼刘哲伟
- 关键词：CVB3小鼠中和抗体
- 辅助性T淋巴细胞22和白细胞介素-22在幼年特发性关节炎中的表达及与炎性因子水平的相关性被引量：1
- 2020年
- 目的探讨幼年特发性关节炎(JIA)患儿外周血中辅助性T淋巴细胞(Th)22及其功能分子白细胞介素(IL)-22的表达水平,分析其与JIA相关炎性因子水平的相关性。方法选取2018年11月至2019年12月在首都儿科研究所附属儿童医院风湿免疫科住院的JIA患儿30例为JIA组,选取同期来首都儿科研究所附属儿童医院体检的同年龄健康儿童12例为健康对照组。采用流式细胞术检测2组研究对象外周血中Th22细胞比例,酶联免疫吸附实验检测血浆中细胞因子IL-22、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-17、IL-10的表达水平。比较JIA组和对照组Th22细胞比例和IL-22表达水平的差异,对Th22细胞比例和IL-22表达水平与炎性因子IL-6、TNF-α、IL-17、IL-10水平进行相关性分析。结果 JIA组外周血中Th22细胞比例[(0.94±0.26)%]明显高于对照组[(0.46±0.29)%],差异有统计学意义(t=2.227,P<0.05);JIA组血浆中IL-22水平[(185.2±11.93) ng/L]显著高于健康对照组[(114.7±6.29) ng/L],差异有统计学意义(t=3.632,P<0.001)。JIA组Th22细胞比例与血浆IL-6(r=0.501,P<0.01)、IL-17(r=0.686,P<0.001)、IL-10(r=0.609,P<0.001)水平均呈正相关,血浆IL-22水平与IL-6(r=0.573,P<0.01)、IL-17(r=0.445,P<0.01)、IL-10(r=0.284,P<0.001)水平均呈正相关,JIA组Th22细胞比例及血浆IL-22水平与血浆TNF-α水平均无明显相关性。结论 JIA患儿外周血中Th22细胞比例及其功能分子IL-22水平显著增高,与炎性因子具有一定相关性,可能参与了JIA疾病的发生和进展。
- 冯淼朱佳何峰肖宗慧姚海兰
- 关键词：幼年特发性关节炎TH22细胞白细胞介素-22炎性因子
- 抑制Itk表达对人PBMC和病毒性心肌炎小鼠炎症性反应的影响
- 目的利用RNA干扰的方法抑制人PBMC(外周血单个核细胞)及病毒性心肌炎小鼠体内Itk基因的表达,探讨Itk受到抑制后人PBMC以及小鼠体内炎症性反应的变化。方法前期实验已针对人鼠Itk基因同源部分设计出siRNA序列,...
- 何峰韩继生肖宗慧姚海兰刘哲伟
- 文献传递
- 小鼠腹膜内外不可吸收线结诱导局部早期迟发型超敏反应的组织学研究
- 2024年
- 目的探索和比较采用两种不可吸收丝线在小鼠腹壁腹膜内、外打结后线结诱导局部早发迟发型超敏反应的差异。方法取7只10~12周BALB/c小鼠,每只腹壁左向右纵向剪开3个腹壁切口(5 mm长),从左向右依次经3个腹壁皮肤切口处采用4-0带针慕斯线荷包缝合腹壁肌深面壁层腹膜后打结于腹膜外间隙(慕斯线腹膜外打结组)、打结于壁腹膜(慕斯线腹腔内打结组),经腹壁切口采用4-0 Proline线荷包缝合腹壁后打结于壁腹膜(Proline线腹膜内打结组)。术后7 d取材3组打结部位腹壁标本。结果免疫组织化学和半定量检测显示,Proline线腹膜内打结组线结周围抗原肽-主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ/Ⅱ类分子复合物、CD4^(+)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、淋巴毒素(lymphotoxinβ,LTβ)表达少于慕斯线腹膜外打结组和慕斯线腹腔内打结组,但慕斯线腹膜外打结组和慕斯线腹腔内打结组比较差异无统计学意义。Masson染色结果显示,Proline线腹膜内打结组线结周围可见片状纤维胶原条索,胶原纤维排列相对均一;慕斯线腹膜外打结组和慕斯线腹腔内打结组仅见散在纤维胶原条索,排列松散。结论Proline线较慕斯线诱导小鼠腹壁线结周围早期迟发型超敏反应轻微。腹腔镜监视下闭合内环口时,采用Proline线腹腔内荷包缝合打结较慕斯线腹膜外缝合和腹腔内荷包缝合打结线结超敏反应轻,相对更理想。
- 刘雪来宋岩彪叶茂李旭何峰
- 关键词：腹腔内腹膜外超敏反应
- 多关节型幼年特发性关节炎患儿血浆微小RNA-766表达的意义被引量：3
- 2018年
- 目的探讨微小RNA（miR）-766在多关节型幼年特发性关节炎（poly-JIA）患儿血浆中的表达及临床意义。方法选取2014年11月至2016年9月在首都儿科研究所附属儿童医院风湿免疫科住院治疗的poly-JIA患儿23例为研究组，以同期收治的24例少关节型幼年特发性关节炎（oligo-JIA）和19例幼年强直性脊柱炎（JAS）患儿为病例对照组，以24例同年龄健康儿童为健康对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）方法测定各组研究对象血浆miR-766的表达水平。采用受试者工作特征曲线（ROC）分析miR-766表达水平的临床诊断价值。运用Pearson相关系数分析miR-766表达量与临床和实验室检查参数之间的相关性。结果miR-766在poly-JIA患儿血浆中的表达水平显著低于健康对照组（t＝6.897，P〈0.001）及oligo-JIA和JAS（t＝6.446、6.218，均P〈0.001）2个病例对照组，差异均有统计学意义。病例对照组患儿血浆miR-766表达水平与健康对照组儿童相比差异无统计学意义（P〉0.05）。与健康对照组相比，血浆miR-766水平预测poly-JIA的ROC下面积（AUC）为0.938（95%CI：0.872～1.000），当其截断值为6.083 pmol/L时，敏感度为87.0%，特异度为91.7%。与oligo-JIA和JAS患儿相比，AUC分别为0.908（95%CI：0.819～0.996）和0.927（95%CI：0.865～1.000）。相关性分析显示，poly-JIA患儿血浆中miR-766表达量与血红蛋白水平呈正相关（r＝0.651，P〈0.001），与28处关节疾病活动度评分（DAS28）和1型辅助性T淋巴细胞（Th1）百分比（Th1%）均呈负相关（r＝－0.434，P＝0.038；r＝－0.417，P＝0.008）。结论miR-766在poly-JIA患儿血浆中的表达水平显著降低，其表达水平对poly-JIA的诊断和鉴别诊断具有一定的参考价值。
- 冯淼姚海兰康闽吴凤岐何峰肖宗慧刘哲伟
- 关键词：儿童
