余斌
- 作品数：92 被引量：180H指数：7
- 供职机构：浙江省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 副猪嗜血杆菌CDT三顺反子的表达、组装及生物学活性
- 2024年
- 副猪嗜血杆菌是猪的常见病原菌,以异源三聚体形式分泌到胞外环境的细胞致死性膨胀毒素(CDT)是该菌重要的毒力因子,制备完整的重组CDT对于其功能研究至关重要。本研究构建了可用于同时表达CDT 3个亚基的三顺反子重组质粒,优化了完整毒素三聚体的体外组装及纯化方法,并验证了重组三聚体毒素的生物学活性。结果显示,CDT 3个亚基以CdtA/CdtB/CdtC-his方式组合时,按0.1 g/L等体积混合,在PBS中以尿素浓度梯度透析时组装效果最好。构建的重组三顺反子质粒在大肠杆菌中可以同时表达出比例相当的3个CDT亚基,并且均以包涵体形式存在,经包涵体离心粗纯化后,即可用于重组三聚体CDT的组装。组装的三聚体CDT经亲和层析及分子筛层析纯化,得到高纯度的完整毒素。完整毒素可以引起Marc145细胞体积明显膨胀,且分裂周期停滞于G2/M期的细胞比例显著增加。结果表明,本研究建立了一种简单有效的副猪嗜血杆菌重组CDT完整毒素制备方法,所制备的CDT具有良好的生物学活性。
- 李军星余斌徐丽华苏菲叶十一袁秀芳
- 关键词：副猪嗜血杆菌
- 共表达猪细小病毒VP2蛋白和猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其鉴定被引量：8
- 2012年
- 为研制猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)3联苗,本研究将PPV VP2基因和PCV2 Cap基因通过口蹄疫病毒2A基因串联得到VP2-2A-Cap(V2C)基因,将其插入pEP-CMV-in转移载体构建pEP-V2C-in重组表达质粒,再通过Red/ET两步重组法在大肠杆菌中构建了pPRV-V2C-ΔgE和pPRV-ΔgE突变体,该突变体用磷酸钙法转染BHK-21细胞获得重组病毒rPRV-V2C-ΔgE和rPRV-ΔgE。Western blot分析表明rPRV-V2C-ΔgE能够在BHK-21细胞内表达融合蛋白VP2-2A-Cap,而且目的蛋白能够被2A蛋白裂解为64 ku和28 ku两个片段。重组病毒生长曲线和噬斑大小测定结果显示rPRV-V2C-ΔgE在BHK-21细胞中的增殖滴度与亲本株rPRV无显著差异,表明外源基因的插入不影响rPRV的增殖。本研究为PRV、PPV和PCV2 3联重组活载体疫苗的研制奠定了基础。
- 邓晓辉陈柳叶伟成李军星崔尚金余斌云涛崔言顺孙元仇华吉张帅张存
- 关键词：细菌人工染色体猪细小病毒猪圆环病毒2型
- 猪繁殖与呼吸综合征二价重组腺病毒疫苗及其制备方法
- 本发明公开了猪繁殖与呼吸综合征二价重组腺病毒疫苗及其制备方法，属于生物疫苗制备技术领域。该疫苗可通过在PRRSV GP5和M蛋白之间插入一具有自我裂解的FMDV 2A基因相连接，构建成GP5－2A－M融合蛋白基因，并与腺...
- 刘光清云涛倪征余斌陈柳华炯钢李双茂
- 文献传递
- 鉴别基因I型与II型鸭呼肠孤病毒的引物及方法
- 本发明公开了一种鉴别基因I型与II型鸭呼肠孤病毒的引物及方法。所述引物包括引物对1和引物对2，引物对1为：上游引物：5’-CTGACGCTTTTGAAGTCCACT-3’，下游引物：5’-AACACTGTATCCTGGA...
- 云涛张存华炯钢叶伟成余斌陈柳倪征
- 文献传递
- 鸭Ⅰ型肝炎病毒研究进展
- 鸭Ⅰ型肝炎病毒(Duck Hepatitis Virus typeⅠ,DHV-Ⅰ)是引发雏鸭的一种高度致死性病毒性传染病的病原。该病的特征是发病急、病程短、死亡率高。临床症状以痉挛、抽搐和角弓反张等神经症状为主要特征,病...
- 倪征云涛余斌陈柳华炯钢李双茂
- 文献传递
- 一种重组Mh-DnaK蛋白及其在检测猪源嗜血支原体中的应用
- 本发明公开一种重组Mh‑DnaK蛋白及其在检测猪源嗜血支原体中的应用。本发明首先公开了氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的重组Mh‑DnaK蛋白。本发明进一步公开了以上述重组Mh‑DnaK蛋白作为包被抗原的酶标板的猪...
- 付媛石团员孙洪超袁秀芳王德前徐丽华李军星苏菲余斌闫文朝齐萌李天恩刘鑫邓金华
- 表达鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭瘟病毒及其构建方法和应用
- 本发明公开了一种表达鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭瘟病毒及其构建方法和应用，该重组鸭瘟病毒的基因组中插入有鸭坦布苏病毒E蛋白基因，所述鸭坦布苏病毒E蛋白基因的核苷酸序列如SEQ？ID？NO.9所示。所述构建方法包括：(1)将...
- 陈柳张存倪征叶伟成余斌云涛华炯钢
- 文献传递
- 一种抗原蛋白及其编码基因与应用
- 本发明公开了一种抗原蛋白及其编码基因与应用，该抗原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，本发明抗原蛋白为非全病毒抗原、安全性好，不含无关杂蛋白，只与血清中兔病毒性出血症病毒(RHDV)抗体特异结合，不与家兔其它疫...
- 余斌刘光清云涛倪征陈柳华炯钢李双茂梁华丽
- 文献传递
- 浙江省猪源产肠毒素大肠杆菌分子流行病学调查
- 2023年
- 本研究旨在调查浙江省猪源产肠毒素性大肠杆菌的流行情况和毒力基因特征。采用标准细菌学方法对大肠杆菌进行分离,并用聚合酶链反应(PCR)方法检测大肠杆菌的毒力基因。2014-2021年共分离到137个携带ETEC黏附素或肠毒素基因的大肠杆菌菌株,其中禁抗后平均每年分离到的菌株数量是禁抗前的2倍。肠毒素基因检测结果表明,STb(129/137,94.2%)最常见,其次是STa(64/137,46.7%)和LT(62/137,45.3%);黏附素基因以F18(56/137,40.9%)最占优势,其次为K88(28/137,20.4%),未检测到K99和987P及F41等黏附素。上述137个临床分离株中共检测到16种不同的毒力因子模式,平均每8.6个菌株产生一种不同的毒力因子模式;其中39.4%的菌株仅携带肠毒素基因,检测不到经典的黏附素基因,而1.5%的菌株则与之相反。共有81株菌同时检测到肠毒素和黏附素基因,占检出总数的59.1%。在所有被检测的生长阶段,肠毒素STb均为检出率最高的肠毒素,且随着日龄增加检出率逐渐降低。黏附素F18随着仔猪日龄的增加检出率不断提高;K88黏附素在各个生长阶段均能检出,尤其在产房仔猪中检出率最高。口腔灌服不同毒力因子模式ETEC菌株对小鼠的致死率介于0~40%,攻毒7 d后不同组的小鼠肠内容物中攻毒菌株的带菌率介于0~100%。综上所述,饲料禁抗后浙江省腹泻猪群中ETEC分离率明显上升,所携带的肠毒素以STb为主,黏附素以F18为主。菌株的毒力因子模式复杂,对小鼠的致病力及在小鼠体内的持续存活能力有明显差异,说明小鼠作为猪源ETEC的传播媒介作用在不同菌株间存在较大差异。
- 陈怡洁袁秀芳徐丽华余斌苏菲叶十一卢碧凯蒋利明张晖李军星
- 关键词：肠毒素基因
- 鸭坦布苏病毒基因组全长cDNA克隆构建与分析
- 2015年
- 根据鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)ZJ-407株全基因组序列设计并合成4对特异的Infusion引物,应用RT-PCR技术分4段扩增了DTMUV全基因组c DNA。通过In-fusion技术将扩增的c DNA重叠片段A,B,C和D片段分别克隆到载体p BluescriptⅡKS(+)中,获得了DTMUV全长基因组c DNA克隆p SK-T7-DTMUV。在扩增5'末端时,引入T7启动子序列;在基因组3'末段引入SmaⅠ酶切位点,以供c DNA模板的线性化之用。核酸序列分析表明,DTMUV毒株基因组全长为10 990个核苷酸,与DTMUV ZJ-407 DF-1细胞分离株的同源性为99.9%;全长基因组中有9个核苷酸发生突变,其中7处为沉默突变,2处导致相对应的氨基酸发生改变,且这两处均位于非结构蛋白NS5。结果表明,本研究成功构建了DTMUV ZJ-407株基因组全长c DNA,为其感染性c DNA的拯救奠定基础。
- 云涛陈柳张存倪征华炯钢余斌叶伟成
- 关键词：全长CDNA克隆感染性克隆
