刘君
- 作品数：20 被引量：49H指数：4
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- 前踝撞击征的姑息性手术治疗
- 目的：探讨姑息性手术对前踝撞击征的诊疗效果。方法：采用姑息性手术治疗，小切口切开，骨刀切除增生的骨赘及炎性滑膜组织，前踝撞击综合征12例，患者均伴有不同程度的踝关节骨关节炎，伴前踝关节大量骨赘形成，关节间隙狭窄，无法行关...
- 刘君
- 关键词：踝关节骨关节炎
- 重组人IL-1Ra与TGF-β1联合基因体外转染兔膝关节软骨细胞的研究被引量：2
- 2013年
- 背景:多基因联合转染具有增强功能基因协同效应、消除短板差异等作用,因而目前被受到广泛重视。目的:观察以逆转录病毒(RV)为载体,介导白介素-1受体拮抗蛋白(IL-1Ra)基因单独转染及其与转化生长因子-β1(TGF-β1)基因共同转染兔膝软骨细胞后的表达,及对其增殖代谢的影响。方法:构建逆转录病毒载体PLNCX2-IL-1Ra-GFP 与 PLNCX2-TGF-β1-RFP,将其转染至包装细胞 PT67,待形成阳性克隆后扩增培养,收集病毒上清,并计算病毒上清滴度。将体外培养的软骨细胞分为空白转染组、PLNCX2空载体转染组、IL-1Ra单基因转染组及IL-1Ra +TGF-β1双基因转染组。酶联免疫吸附分析法(ELISA)进行瞬时基因表达(细胞转染后48 h)及稳定基因表达(筛选后4周)的检测;免疫组织化学染色法检测各组IL-1Ra、TGF-β1及Ⅱ型胶原的表达;流式细胞仪检测各组细胞生长周期比例。结果:PLNCX2-IL-1Ra-GFP 与 PLNCX2-TGF-β1-RFP 转染包装细胞后分别有绿色荧光与红色荧光表达;空白组与PLNCX2空载体转染组的上述指标无统计学差异(P>0.05);ELISA检测示基因转染组有明显基因表达;与空白组及PLNCX2空载体转染组相比,双基因转染组IL-1Ra、TGF-β1、Ⅱ型胶原含量明显提高,IL-1Ra基因转染组IL-1Ra含量提高明显,但TGF-β1、Ⅱ型胶原含量提高不明显;双基因转染组软骨细胞位于S期的比例明显增高,与其他组比较有统计学差异(P<0.05)。结论:逆转录病毒载体构建成功,基因转染软骨细胞后可获得稳定表达,双基因转染的软骨细胞生物学活性优于单基因转染,为基因治疗骨关节炎(OA)的研究提供实验基础。
- 向川李璐卫小春林有志刘君孙剑
- 关键词：软骨细胞基因转染IL-1RATGF-Β1
- 反转录病毒载体介导转化生长因子β_1基因体外转染兔膝关节软骨细胞的表达
- 2010年
- 背景:将功能基因片段整合到基因载体内,再将基因载体转染入靶细胞中或转染入关节腔内,通过转基因的靶细胞持续大量分泌功能基因产物,在一个较长的时期内保持局部治疗浓度,可修复关节软骨损伤。目的:以重组反转录病毒载体介导转化生长因子β1体外转染兔膝关节软骨细胞,观察其表达情况及其对软骨细胞生物学性状的影响。方法:采用胰酶消化法分离培养兔软骨细胞。载体经PLNCX2HindⅢ/NotⅠ双酶切、去磷酸化后,与载体pDsRed2双酶切得到大的部分多克隆位点和RFP基因连接,构建PLNCX2-RFP。转化生长因子β1基因从PGEMT-TGF中扩增,经双酶切后与PLNCX2-RFP连接,构建PLNCX2-TGFβ1-RFP。包装反转录病毒载体,并检测病毒上清滴度。将培养的兔膝关节软骨细胞分组转染:对照组(不做任何转染)、转染PLNCX2组、转染PLNCX2-TGFβ1-RFP组,持续筛选2周,观察细胞变化。收集稳定转染的细胞上清液,以NO检测试剂盒检测基因转染对软骨细胞的影响,以ELISA法检测细胞培养上清液中人转化生长因子β1表达。结果与结论:重组基因PLNCX2-TGFβ1-RFP经酶切鉴定测序TGFβ1、RFP、序列均正确,表明构建成功预期的真核表达载体PLNCX2-TGFβ1-RFP。转染到包装细胞并筛选培养后,病毒滴度为1×106CFU。稳定转染软骨细胞后可观察到红色荧光,证明转染成功。持续筛选2周,散在贴壁细胞形成阳性克隆,逐渐弥漫融合,并有细胞簇出现,双核多见,细胞增生活跃。转染PLNCX2-TGFβ1-RFP组NO浓度高于对照组、转染PLNCX2组(P<0.05),对照组、转染PLNCX2组间差异无显著性意义。对照组与转染PLNCX2组均无转化生长因子β1表达,转染PLNCX2-TGFβ1-RFP组转化生长因子β1质量浓度为(28.08±3.73)ng/L。提示反转录病毒载体PLNCX2介导的人转化生长因子β1能有效转染到兔膝关节软骨细胞并获得稳定表达,同时转染后的软骨细胞增生活跃。
- 林树忠刘君向川卫小春
- 关键词：反转录病毒转化生长因子Β1转染软骨细胞软骨组织工程
- 应用Masquelet技术治疗跟骨骨髓炎的临床研究被引量：20
- 2017年
- [目的]探讨Masquelet技术在跟骨骨髓炎治疗中的应用。[方法]回顾性分析2014年1月~2015年4月收治的6例慢性跟骨骨髓炎患者,男4例,女2例;年龄27~45岁,平均32岁。其中3例外伤导致(1例电击伤,2例锐器伤),3例跟骨骨折内固定术后(2例钛板,1例空心钉)。术前AOFAS评分25~68分,平均45分。所有患者均采用Masquelet技术分2个阶段治疗:第1阶段彻底的清创(2次手术者,取出内固定材料),将混有大剂量万古霉素的聚曱基丙烯酸甲酯骨水泥塑形后填充于骨缺损部位,无张力关闭创面;第2阶段,术后3个月切开诱导膜,取出骨水泥,在诱导膜腔里填充自体髂骨,逐层关闭。记录患肢术后并发症、骨愈合时间及功能情况。[结果]患者术后6~18个月(平均12个月)随访,切口均愈合,无再发切口感染,无再发骨髓炎征象,无供区并发症,无术后再发骨折等需计划外手术。均行走自如,术后AOFAS评分79~96分,平均90.6分。[结论]Masquelet技术可以有效的治疗跟骨慢性骨髓炎清创后骨质缺损问题,操作简便,并发症少,患者满意度高。
- 杜虎羽刘君郭志坚任龙韬白浪唐康来
- 关键词：跟骨慢性骨髓炎
- 不同浓度葛根素对体外培养成骨细胞的影响被引量：7
- 2015年
- 背景:有研究报道中药葛根素具有减少骨吸收、促进骨形成的作用。目的:进一步验证中药葛根素对体外培养成骨细胞增殖的影响。方法:取新生大鼠的颅盖骨进行成骨细胞培养,取第3代细胞分别加入浓度为0,20,40,80和100μmol/L的葛根素+含体积分数10%胎牛血清DMEM培养基培养48 h。应用MTT法、碱性磷酸酶试剂盒及茜素红染色方法观察葛根素对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶活性及矿化结节形成的影响。结果与结论:与空白对照组比较,中药葛根素40,80μmol/L浓度组具有刺激成骨细胞增殖的作用;成骨细胞碱性磷酸酶活性检测显示葛根素在40μmol/L和80μmol/L浓度呈现明显的促进分化作用;在不同浓度葛根素中培养14 d可以清晰的观察到矿化组织形成,40μmol/L和80μmol/L葛根素培养的细胞矿化结节形成数量显著多于对照组。结果证实葛根素对体外培养的成骨细胞有明显的促进增殖作用。
- 林树忠刘君
- 关键词：骨细胞葛根素成骨细胞碱性磷酸酶细胞增殖
- 医源性内翻的手术治疗体会被引量：2
- 2015年
- 目的探讨医源性内翻手术的诊疗效果。方法采用手术治疗医源性内翻3例,左侧1例,右侧2例,均为女性,平均年龄64岁,且有外翻矫形术(Mc Bride术)病史。临床表现为趾内翻畸形伴仰趾,穿鞋不便并行走时伴第1跖趾关节疼痛。采用全麻下第1跖骨远端截骨(chevron截骨)+第1跖趾关节融合+内外侧软组织平衡重建手术。8周后拔出第1跖趾关节克氏针进行趾主动背伸及屈曲功能锻炼,3个月后开始渐进性患肢负重行走,6个月后正常行走。结果随访3例,时间12个月。术后内翻畸形均得到良好矫正,未见复发。术前外翻角平均为-25°,第1、2跖趾间角平均为10°;术后外翻角平均为20.5°,第1、2跖趾间角平均为7.5°;趾背伸及屈曲活动度基本正常。结论 外翻矫形术后内翻畸形是少见但严重降低患者功能预后的并发症。籽骨切除、软组织失平衡、截骨失平衡是继发内翻畸形的主要病因。多种术式均可造成第1跖趾关节力线失平衡,Mc Bride术后最易出现内翻。轻度内翻可采取保守治疗。重度畸形手术以第1跖骨远端截骨(chevron截骨)+第1跖趾关节融合+内外侧软组织平衡重建对医源性内翻的治疗效果满意。
- 杜虎羽刘君郭志坚任龙韬
- 关键词：医源性手术
- 逆转录病毒载体介导的白细胞介素-1Ra基因体外转染兔膝关节软骨细胞表达的研究
- 2009年
- 目的探讨运用重组逆转录病毒载体介导白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)体外转染兔膝关节软骨细胞,观察其在关节软骨细胞中的表达情况及其对软骨细胞生物学性状的影响。方法将构建含有目的基因的表达载体PLNCX2-IL-1Ra-GFP体外转染到兔膝关节软骨细胞,采用一氧化氮(NO)检测试剂盒检测基因转染对软骨细胞的影响,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中hIL-1Ra的表达情况。结果酶切和测序表明构建成功预期的真核表达载体PLNCX2-IL-1Ra-GFP;稳定转染软骨细胞后免疫荧光倒置显微镜观察到绿色荧光,证明转染成功;培养液中NO含量检测发现基因转染组比非基因转染组高,并且差异有统计学意义(P<0.05);ELISA检测发现基因转染组有一定量的hIL-1Ra表达,未转染组与空载体组均无基因表达,基因转染组与非基因转染组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论逆转录病毒载体PLNCX2介导的IL-1Ra能有效地转染到兔膝关节软骨细胞并获得稳定表达,同时转染后的软骨细胞增生活跃。为目的基因IL-1Ra转染治疗骨关节炎提供了理论基础。
- 林树忠刘君向川卫小春
- 关键词：逆转录病毒科白细胞介素转染软骨细胞
- 前踝撞击征的姑息性手术治疗
- 2015年
- 目的探讨姑息性手术对前踝撞击征的诊疗效果。方法采用姑息性手术治疗前踝撞击综合征8例9侧,患者均伴有不同程度的踝关节骨关节炎;其中男5例,女3例;平均年龄36岁（18-56岁）。左踝3侧,右踝6侧。病史2-20年,有踝关节骨折手术史4例,运动损伤史1例（为双侧）,踝关节扭伤病史3例。临床表现为踝关节肿胀、疼痛,踝关节跖屈活动受限。X线片及CT显示胫骨前缘和距骨骨质增生,呈鸟嘴样;关节间隙明显狭窄;核磁显示距骨软骨损伤,踝关节腔内积液。采用全麻手术骨赘切除,局部电烧。结果本组8例均获随访,平均时间为24个月（0.5-3年）。术后踝关节跖屈活动功能明显好转,按照Kofoed踝关节评分系统对术前、术后踝关节功能进行评估,术前平均42分,术后平均84分。优5侧,良3侧,复发1侧,但随访评分较术前明显提高;优良率88.9%。结论姑息性手术切除骨赘以及关节间隙增生变形组织的清理,可有效解除踝关节撞击症状,手术创伤小,功能恢复快,效果满意。配合局部电烧复发率低。
- 刘君任龙韬杜虎羽
- 关键词：踝关节手术
- 同步化法处理软骨细胞后对病毒转染效率影响的研究被引量：1
- 2008年
- 目的探讨同步化法对反转录病毒转染软骨细胞效率的影响。方法将构建并经过包装后的反转录病毒载体转染到经低温处理后的同步化兔膝关节软骨细胞,运用免疫荧光显微镜观察荧光显色,并用硝酸还原法检测细胞培养液中一氧化氮(NO)的含量,并与非同步化转染组对照,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞培养液中人白细胞介素-1受体(hIL-1Ra)的表达量,与非同步化的细胞上清液中hIL-1Ra的含量做空白对照。结果酶切鉴定重组基因正确;免疫荧光显微镜观察可见绿色荧光显色;同步化组上清液中NO含量为(145±3)μmol/L,非同步化组上清液中NO含量为(89±3)μmol/L;同步化组上清液中的hIL-1Ra的含量为(65±4)ng/L,明显高于非同步化组上清液中的hIL-1Ra的含量(41±3)ng/L(P<0.05)。结论软骨细胞经同步化后能显著提高反转录病毒载体的转染效率。
- 刘君向川卫小春
- 关键词：软骨细胞逆转录病毒科转染同步化
- 喹诺酮类药物对关节软骨的影响被引量：2
- 2007年
- 随着喹诺酮类（quinolones，QNs）药物的临床长期广泛应用,QNs引起的临床副作用逐渐表现出来，尤其是对儿童关节软骨的损伤越来越受到研究者们的关注。本文就喹诺酮的一般性状与关节软骨的关系及其引起关节软骨损伤的一些假说作以下阐述。
- 刘君卫小春
- 关键词：喹诺酮类药物关节软骨
