张鑫宇
- 作品数：61 被引量：214H指数：7
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程项目江苏高校优势学科建设工程资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 非洲猪瘟病毒p72基因的纳米金探针研究被引量：13
- 2011年
- 对22株发表的非洲猪瘟病毒(ASFV)p72基因序列进行比较,找出其中的高保守性区域,各设计、合成1条与保守区域互补的5′生物素标记及3′烷巯基修饰短链寡核苷酸探针,并将烷巯基修饰的探针吸附到纳米金颗粒上,制备纳米金标记探针。PCR扩增出的p72基因中的651 bp保守核酸序列,变性后与上述生物素探针及标记纳米金探针进行杂交,杂交产物加入吸附链霉亲和素的酶标板,利用亲和原理,捕获杂交产物,银染增强法对纳米金标记探针进行信号放大。结果表明:制备的纳米金探针经银染放大后,在酶标板中形成肉眼可见的黑色沉淀,可有效检测扩增出的p72基因,检测核酸浓度达到10 fmol·L-1,可用于ASFV快速诊断。
- 张鑫宇孙怀昌刘文俊夏晓莉成大荣
- 关键词：非洲猪瘟病毒
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒接触感染仔猪模型的建立被引量：4
- 2019年
- 为了建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)接触感染模型,将易感仔猪与PRRSV人工感染仔猪在隔离器中同居饲养,每日观察记录体温变化和临床症状,定期采集血清和粪便样品,用荧光定量RT-PCR检测病毒血症和粪便排毒水平;对病死猪和试验结束迫杀猪进行剖检和肺脏组织病理学检查,并检测各器官病毒载量和组织分布。结果显示:接触感染仔猪出现高热和PRRS症状时间分别较人工接种猪推迟2~3d;第3天起血清检测PRRSV阳性,第10天病毒血症上升至较高水平(108.6拷贝/mL);第5天起粪便检测PRRSV阳性,第7天粪便排毒量上升至较高水平(103.9拷贝/0.1g);3头接触感染仔猪分别于同居后第12天和第13天死亡,较人工接种猪推迟1~2d,病死猪的主要器官病毒载量以及剖检和肺脏显微病理变化与人工接种病死猪相似。这些结果表明,本研究建立的接触感染仔猪模型可用于PRRS疫苗免疫效果评价。
- 夏文龙吴植郭长明朱善元张鑫宇夏晓莉孙怀昌
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征
- 非洲猪瘟病毒无标签重组K205R抗原制备与应用被引量：7
- 2019年
- 为建立敏感、特异的非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体检测方法,将ASFV K205R基因与类弹性蛋白多肽(ELP)进行融合表达,用相变循环纯化ELP-K205R融合蛋白,用烟草蚀纹病毒(TEV)蛋白酶活性包涵体切除ELP标签,用相变循环回收K205R蛋白,用抗体阳性血清对重组K205R蛋白进行ELISA鉴定。结果表明:重组大肠埃希菌能正确表达ELP-K205R融合蛋白,相变循环纯化的融合蛋白纯度大于80%;TEV蛋白酶活性包涵体能有效切割ELP标签,回收的重组K205R蛋白纯度大于95%,能被特异抗体阳性血清识别;重组K205R抗原与抗体阴性猪血清反应阴性,与抗体阳性猪血清反应阳性,D450nm值与血清稀释倍数具有线性相关性。用重组K205R抗原对已知猪血清进行ELISA检测,结果显示24份ASFV抗体阳性血清为检测阳性,24份ASFV抗体阴性血清为检测阴性,检测符合率为100%。这一研究提示制备的无标签重组K205R抗原可用于ASFV抗体检测。
- 肖景景卢会鹏李洋洋周晓慧刘晓明胡威张晓凯徐保娟崔晓霞张鑫宇张泉夏晓莉孙怀昌
- 关键词：非洲猪瘟病毒抗体检测
- 马立克氏病病毒编码的类白细胞介素8研究进展
- 2003年
- 马立克氏病 (Marek’sdisease ,MD)是由马立克氏病病毒 (MDV)引起的一种淋巴细胞增生性肿瘤疾病 ,病毒的许多成分参与了致肿瘤过程。最近的研究结果发现 ,MDV编码一种类似于白细胞介素_8的产物 ,称之为病毒性白介素_8(vIL_8)。这种vIL_8与人类IL_8在结构上十分相似 ,但它对异嗜细胞的趋化作用微弱 ,而对外周血单核细胞有很好的趋化性 ,且在MDV溶细胞感染中起重要作用。vIL_8是否能象人类IL_8具有激活单核细胞、增强其吞噬作用、增进毛细血管增生和肿瘤生成等功能尚有待探索 ,本文就有关vIL_8的作用及作用机制进行了讨论。
- 张鑫宇秦爱建
- 关键词：趋化因子生物学功能马立克氏病毒
- 类弹性蛋白和内含肽融合表达纯化重组人防御素3被引量：3
- 2014年
- 为建立简单、经济的重组人β防御素3(HBD3)制备方法,将HBD3序列插入类弹性蛋白(ELP)与△I-CM内含肽融合表达载体,将重组载体转化大肠杆菌,20℃下用IPTG诱导融合蛋白表达,在优化条件下进行相变循环,用内含肽自裂解活性释放目的蛋白,用琼脂扩散和最小抑菌浓度法测定重组HBD3抗菌活性。结果表明:融合蛋白在重组菌中获得可溶性表达,第1轮相变循环的纯度为85.7%,再次相变循化的纯度达93.1%;内含肽裂解温度为28℃,孵育12 h裂解效率达90.3%;重组HBD3回收率达74.8%,产量为0.98 mg·L^(-1),纯度为92.6%,内毒素含量低于0.03 U·mg^(-1)(蛋白),对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有显著的抑菌活性。说明基于ELP相变循化和内含肽自裂解的重组蛋白表达与纯化系统可用于重组}tBD3的规模化制备。
- 刘文俊吴倩高慧徐碧张鑫宇夏晓莉孙怀昌
- 关键词：内含肽人Β防御素3纯化
- 类弹性蛋白多肽融合犬λ干扰素的表达、纯化及抗病毒活性研究被引量：3
- 2016年
- 为制备重组犬λ干扰素(CaIFN-λ),将CaIFN-λ1成熟肽编码序列优化成大肠埃希氏菌偏爱密码子序列,将合成序列插入类弹性蛋白多肽(ELP)融合表达载体,将重组载体转化大肠埃希氏菌,用IPTG诱导CaIFNλ-ELP融合干扰素表达,用温度敏感可逆相变循环(ITC)进行纯化,用细胞病变抑制法检测干扰素活性。结果表明:重组菌能正确表达CaIFNλ-ELP,≤24℃条件下约90%表达产物为可溶性蛋白,诱导24h的表达量约占菌体总蛋白的30%;沉淀CaIFNλ-ELP的相变温度为26℃,氯化钠浓度为2mol·L^(-1),一轮相变循环后的CaIFNλ-ELP纯度为70%,离心洗涤、变性和复性后的纯度可达90%,抗病毒效价为2.5×104 U·mg-1蛋白。说明重组大肠埃希氏菌表达的CaIFNλ-ELP融合干扰素具有纯化简单、成本较低和抗病毒活性较强等优点,有望作为长效干扰素进行开发利用。
- 徐光宇张鑫宇夏晓莉孙怀昌
- 关键词：纯化抗病毒活性
- 一株鹅源坦布苏病毒的分离鉴定及全基因组序列测定被引量：1
- 2018年
- 2017年10月,安徽六安某朗德鹅养殖场鹅群出现精神沉郁,采食下降,陆续死亡。对送检病死鹅组织观察,可见肝脏肿胀、质脆、颜色变淡,脑组织水肿、充血、出血。将脑组织研磨后接种SPF鸡胚进行分离病毒。收集死亡鸡胚尿囊液、离心后进行电镜负染发现直径约为40 nm的病毒粒子。利用黄病毒E蛋白基因特异性引物进行的RT-PCR以及序列分析证明该分离株为黄病毒属坦布苏病毒,命名为AHRD2018。将AHRD2018株全基因组进行PCR分段扩增、克隆、测序发现,AHRD2018全基因组全长为10 992 bp。AHRD2018株全基因组与国内鸭源坦布苏病毒分离株同源性最高可达97.7%,处于同一进化分支;与鸽源TMUV同源性为96.7%;与鹅源TMUV同源性为96.7%左右。这一鹅源坦布苏病毒的分离及其全基因组的测定为进一步探究坦布苏病毒的跨宿主传播机制及其致病分子机理提供了材料、打下了基础。
- 任丹李拓凡张鑫宇刘潇羽邵红霞邵红霞叶建强秦爱建
- 关键词：电镜PCR全基因组
- 类弹性蛋白多肽融合犬β干扰素的表达纯化和抗病毒活性及体外半衰期的研究被引量：4
- 2016年
- 为了研制长效犬β干扰素(Ca IFNb)基因工程产品,用聚合酶链反应从犬基因组DNA扩增Ca IFNb成熟肽编码序列,插入类弹性蛋白多肽(ELP)融合表达载体,将重组载体转化大肠杆菌BLR(DE3),用IPTG诱导Ca IFNb-ELP表达,利用ELP介导的温度敏感可逆相变循环(ITC)进行纯化,用50%细胞病变抑制试验检测干扰素活性,用50%小鼠血浆孵育法检测体外半衰期,并与融合组氨酸标签的His-Ca IFNb进行比较。结果显示,在≤28℃条件下,90%Ca IFNb-ELP为可溶性表达,His-Ca IFNb以不溶性包涵体表达;在优化条件下进行1轮ITC,获得的Ca IFNb-ELP的纯度为96%,显著高于以包涵体纯化的His-Ca IFNb的纯度(85%);Ca IFNb-ELP的抗病毒活性为1×105 U/mg,比His-Ca IFNb的抗病毒活性高10倍;Ca IFNb-ELP的体外半衰期>24 h,显著长于His-Ca IFNb的体外半衰期(12 h)。结果表明,Ca IFNb-ELP具有表达水平高、纯化简单和体外半衰期较长等优点,有望作为长效干扰素开发利用。
- 张敏张鑫宇夏晓莉孙怀昌
- 马立克氏病病毒类白细胞介素8(vIL-8)基因的克隆和表达被引量：6
- 2003年
- 用马立克氏病病毒 ( MDV)感染鸡胚成纤维细胞 ( CEF) ,提取总 RNA,经 RT- PCR扩增出由 MDV编码的病毒类白细胞介素 - 8( v IL- 8)基因 ,,并将其克隆进 p GEM- T easy载体中 ,测序进行分析。将 v IL- 8基因片段插入表达性载体 p GEX- 5 x- 3中 ,转化大肠杆菌 BL 2 1,经 IPTG诱导 ,结果获得了重组 v IL - 8- GST融合蛋白的表达。表达产物活性分析表明 ,v IL- 8基因重组产物具有趋化鸡外周血淋巴细胞的活性。提示 ,MDV在致瘤过程中 ,v IL- 8能吸引易感细胞促进病毒感染 ,并可能参与肿瘤的扩散和发展。
- 张鑫宇秦爱建金文杰刘岳龙
- 关键词：马立克氏病病毒基因克隆炎症因子生物学活性
- 定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒游离受体夹心ELISA方法的建立与应用被引量：1
- 2018年
- 为了建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)游离受体定量检测方法,本试验用表达猪唾液酸黏附素(Sn)游离受体的重组腺病毒rAd-Sn4D-Fc感染PK-15细胞,以细胞培养上清纯化的Sn4D-Fc游离受体作为标准抗原,鼠抗猪Sn免疫血清为一抗,生物素标记兔抗猪Sn多克隆抗体为二抗,建立定量检测Sn4D-Fc游离受体的双抗体夹心ELISA方法;用rAd-Sn4D-Fc注射仔猪,定期采集血清进行游离受体检测。结果显示,纯化Sn4D-Fc标准抗原的纯度为94.3%,能被Sn免疫血清识别;一抗的最佳工作浓度为5μg/mL蛋白,二抗的最佳稀释度为1∶4 000,夹心ELISA检测标准抗原的灵敏度为0.4ng/mL,对照抗原无交叉反应;夹心ELISA能从重组腺病毒注射猪血清中检测到Sn4D-Fc游离受体,最高表达量为6.54ng/mL,持续时间为15d。研究结果表明,建立的双抗体夹心ELISA可用于PRRSV游离受体的体内外定量检测。
- 夏文龙吴植郭长明朱善元余树培张鑫宇夏晓莉孙怀昌
- 关键词：夹心ELISA
