张雪
- 作品数：25 被引量：14H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院野战输血研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- α-半乳糖苷酶的单克隆抗体及其应用
- 本发明公开了一种α-半乳糖苷酶的单克隆抗体及其应用。本发明提供了保藏号为CGMCC No.8794的小鼠杂交瘤细胞（mus musculus hybridoma）B7G11。还提供了由保藏号为CGMCC No.8794的...
- 宫锋高红伟李素波季守平檀英霞宋锦文张士坤贠志敏张雪王颖丽
- 文献传递
- 制备脆弱拟杆菌来源的新型α-半乳糖苷酶单抗用于检测通用型红细胞中的微量残留酶被引量：1
- 2015年
- 目的建立一种检测微量脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)来源的α-半乳糖苷酶的方法用于测定酶解转变的通用型红细胞上的残留酶。方法用脆弱拟杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶(纯度大于90%)免疫BALB/c小鼠,制备单抗;用稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株制备腹水单抗,再经HiT rap rP rotein A柱纯化获得高纯度的抗体;间接ELISA法测定单抗效价,Western印迹法评价单抗特异性。联合纯化后的单抗和兔多抗采用间接ELISA法检测酶解法制备的通用型红细胞和洗涤液中的残留酶量。结果获得了高效价高纯度的单抗,Western印迹实验显示该抗体可特异性地与新型α-半乳糖苷酶结合;间接ELISA法检测微量α-半乳糖苷酶的下限为1 ng/ml,红细胞按1∶4的体积比经4次洗涤后,其残留酶量<10 ng/ml。结论所建立的在血型转变过程中检测微量残留α-半乳糖苷酶的方法,可用于酶解法制备的通用型红细胞的安全性评价。
- 李素波贠志敏高红伟张雪檀英霞张士坤季守平宫锋
- 关键词：Α-半乳糖苷酶单克隆抗体血型转变
- A→O血型转变制备通用型红细胞过程中残留α-N-乙酰半乳糖胺酶检测方法的建立被引量：3
- 2013年
- 目的:建立一种检测血型转变过程中通用型红细胞及洗涤上清中残留α-N-乙酰半乳糖胺酶的方法。方法:利用α-N-乙酰半乳糖胺酶的特异性兔多抗和抗His的单抗,采用间接ELISA法,建立检测微量α-N-乙酰半乳糖胺酶的方法,并用此方法检测血型转变过程中通用型红细胞及洗涤上清中残留的α-N-乙酰半乳糖胺酶。结果:建立了检测微量α-N-乙酰半乳糖胺酶的方法,该方法的检测下限为1 ng/mL;通过对洗涤后的红细胞和洗涤液中残留酶量的检测,确定经过4次洗涤后,残留酶量达到检测水平以下。结论:本方法的建立,为血型转变的通用型红细胞的安全性评价提供了检测方法,并为进一步的临床应用奠定了基础。
- 高红伟李素波鲍国强张雪徐丽娟檀英霞王颖丽季守平宫锋
- 关键词：血型转变
- 新型α-半乳糖苷酶的稳定性研究
- 2013年
- 目的：观察脆弱类杆菌来源的α-半乳糖苷酶（GAL）在不同pH缓冲液、不同温度下的稳定性，以及不同离子及还原剂对酶活性的影响。方法：以GAL对单糖底物对硝基-苯基-α-D-吡喃半乳糖苷（PNPG）的活性为主要检测指标，观察不同离子及还原剂等对酶活性的影响；观察GAL在不同pH缓冲液中和不同温度下的稳定性。结果：钙离子、锌离子、钴离子和高浓度的锰离子增强酶的活性，DTT抑制酶的活性，螯合剂EDTA的加入提高了酶活性。GAL在pH4.6～7.5时保存1 h后稳定性很好，能保持最高活性的90％以上；在4℃～45℃下保存的稳定性最好，45℃开始活性下降。结论：GAL具有很好的温度稳定性和pH稳定性，使其适用于血型转变和异种移植。
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- 关键词：Α-半乳糖苷酶稳定性血型转变活性测定
- 新型α-半乳糖苷酶多克隆抗体的制备及特异性鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的:制备高效价、高特异性的新型α-半乳糖苷酶的兔多抗,并鉴定该抗体的特异性。方法:用脆弱类杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶(纯度大于90%)免疫新西兰大白兔,获得α-半乳糖苷酶的兔抗血清,并经HiTrap rProtein A柱纯化获得高纯度的抗体;用间接ELISA法检测抗体效价,Western印迹评价抗体的特异性。结果:通过免疫法得到了α-半乳糖苷酶的兔多克隆抗体血清,抗体效价达1∶1×106,经rProtein A柱纯化后获得了高效价、高纯度的抗体,Western印迹显示该抗体特异性地与新型α-半乳糖苷酶结合。结论:获得了新型α-半乳糖苷酶的高效价、高特异性的兔多克隆抗体,可用于血型转变过程中残留α-半乳糖苷酶含量的特异性检测。
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- 关键词：Α-半乳糖苷酶多克隆抗体纯化
- α-半乳糖苷酶的单克隆抗体及其应用
- 本发明公开了一种α-半乳糖苷酶的单克隆抗体及其应用。本发明提供了保藏号为CGMCC？No.8794的小鼠杂交瘤细胞（mus？musculus？hybridoma）B7G11。还提供了由保藏号为CGMCC？No.8794的...
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- 文献传递
- 新型α-半乳糖苷酶清除动物红细胞表面αGal抗原的研究被引量：6
- 2012年
- 异种抗原αGal是引起异种移植免疫排斥反应的重要原因之一。脆弱类杆菌来源的α-半乳糖苷酶是一种新型的糖苷酶,能够切除支链多糖和直链多糖末端的αGal残基。本研究探讨新型α半乳糖苷酶清除红细胞表面αGal抗原的作用。利用新型的基因重组α-半乳糖苷酶酶解牛、猪、狗、兔红细胞上的异种抗原,并用流式细胞术分析细胞表面的αGal抗原。结果表明,动物红细胞表面的异种抗原αGal被完全或部分清除。结论:新型α-半乳糖苷酶可以用来清除异种红细胞上的αGal抗原,对降低异种移植引起的超急性排斥反应具有潜在意义。
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- 关键词：红细胞异种抗原Α-半乳糖苷酶
- 酶解法清除猪皮α-Gal抗原的研究被引量：2
- 2015年
- 目的利用脆弱拟杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶清除猪皮细胞及基质的异种抗原(α-Gal抗原),降低猪皮基质敷料的免疫原性。方法 2月龄健康无皮肤疾患的猪皮皮片,经剖层裁切成不同的规格后,分别经碘酊和75%乙醇溶液浸泡消毒,随后用PBS清洗后进行酶解条件的摸索;采用免疫荧光法检测猪皮的α-Gal抗原,双抗夹心ELISA法检测残留酶,通过对酶解猪皮的残留酶和α-Gal抗原的检测进而优化、改进酶解条件和洗涤条件,以确立最佳酶解工艺。结果建立了有效的酶解方法和洗涤方法,酶解后猪皮的α-Gal抗原清除率>90%,残留酶不能检出(间接ELISA法检测微量α-半乳糖苷酶的下限为1 ng/ml)。结论所建立的酶解工艺和洗涤工艺可有效清除猪皮细胞及基质的α-Gal抗原,建立了制备低免疫原性猪皮敷料的方法。
- 贠志敏李素波张雪檀英霞季守平高红伟宫锋
- 关键词：猪皮免疫原性Α-半乳糖苷酶
- 血型转变过程对通用型红细胞结构功能的影响
- 高红伟贠志敏张士坤贾延军季守平宫锋冯博张雪龚治尹李素波檀英霞
- 一种将A型、B型或AB型人红细胞体外转变为O型的方法及其专用试剂与试剂盒
- 本发明公开了一种将A型、B型和AB型人红细胞体外转变为O型（A→O、B→O、AB→O）的方法及其专用试剂与试剂盒。其中酶解缓冲液是质量百分浓度为5％的葡萄糖溶液，洗涤缓冲液是生理盐水或PBS。本发明用商品化的产品5％葡萄...
- 宫锋高红伟季守平李素波檀英霞张雪鲍国强王颖丽
- 文献传递
