谢莉萍
- 作品数：67 被引量：158H指数：6
- 供职机构：清华大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学文化科学医药卫生更多>>
- 栉孔扇贝几丁质酶基因的克隆及功能鉴定被引量：6
- 2017年
- 为研究栉孔扇贝贝壳形成机理,首先应用质谱分析的方法,研究了几丁质酶在栉孔扇贝贝壳的蛋白质组中所占的比例。进一步利用RACE技术克隆获得栉孔扇贝几丁质酶的c DNA,全长共1587 bp,可编码439个氨基酸残基。氨基酸序列的功能结构域分析表明,该几丁质酶具有保守的几丁质酶特征结构域。组织表达分析表明,栉孔扇贝几丁质酶在外套膜组织中表达量最高,并且在外套膜边缘的表达量高于外套膜中心,推测其参与了贝壳的形成。应用实时定量PCR方法,检测贝壳损伤修复过程中基因表达水平,结果显示,几丁质酶基因表达水平呈现下调趋势,暗示其作为负调控因子参与贝壳修复过程。利用RNAi技术降低外套膜组织中几丁质酶基因的表达水平,同时应用扫描电子显微镜观察贝壳内表面的结构,发现贝壳矿物晶体片层的轮廓呈现不规则沉积。综合以上实验结果,推测几丁质酶通过水解几丁质来保证有机框架的有序性,从而对贝壳形状和外观起到调控作用。研究几丁质酶的基因组织表达规律及其生物学功能,将有助于揭示贝壳生物矿化的机制。
- 王俊高静谢军郑向南谢莉萍张荣庆
- 关键词：栉孔扇贝几丁质酶生物矿化
- 一种酮类化合物及其制备方法与应用
- 本发明公开了一种酮类化合物及其制备方法与应用。其目的是提供一种新的具有抗肿瘤活性的酮类化合物。本发明所提供的酮类化合物是式(I)化合物。其制备方法是黑曲霉(Aspergillus niger)转化梣酮，并自发酵液中提取式...
- 张荣庆谢莉萍杨若林贾铁留王洪钟郑桂兰
- 文献传递
- 乙酰微小杆菌生物合成5-甲基尿苷的研究被引量：2
- 2011年
- 用乙酰微小杆菌(Exiguobacterium acetylicum)完整细胞作为酶源,催化鸟苷和胸腺嘧啶合成抗艾滋病药物关键中间体5-甲基尿苷,并对影响菌体生长和5-甲基尿苷转化率的因素进行了考察。采用紫外诱变方法获得高表达核苷磷酸化酶菌种,使5-甲基尿苷的转化率提高到了75.8%;对培养基进行了碳源和氮源的优化,结果表明,3 g/L葡萄糖、20 g/L玉米浆、4 g/L NH4Cl有利于菌体生长;通过响应曲面(Response Surface Methodology,RSM)法获得了较为合适的转化条件:0.03 g/L MnSO4加入到pH值为8.0的磷酸缓冲液,两种底物浓度均为67 mmol/L,反应温度为56℃。
- 上官俊龙苏境坦郑桂兰张文权张贵友谢莉萍王洪钟
- 关键词：紫外诱变培养基优化生物合成响应曲面法
- 合浦珠母贝碱性磷酸酶的分离纯化与性质研究被引量：36
- 2000年
- 以合浦珠母贝 (Pinctadafucata)为提取酶的原料 ,经Tris HCl缓冲液 (pH7.5)抽提 ,正丁醇处理 ,硫酸铵分级沉淀分离 ,DEAE 纤维素离子交换树脂柱层析 ,DEAE A25离子交换分子筛柱层析纯化 ,得到一定纯度的碱性磷酸酶 ,比活力达到1444U/mg。酶学性质和动力学性质研究表明 ,该酶催化对硝基苯磷酸 (pNPP)的水解反应 ,最适 pH值为9.72,最适温度为45℃ ,水解反应的活化能为Ka=21.4kJ/mol,初速度为6.1μmol/L,米氏常数Km 值为2.86mmol/L,Vm 值为9.09μmol/L。产物类似物HPO2 - 4,WO3 - 4 对该酶均有明显的抑制作用 ,表现为竞争性抑制。金属离子对该酶的催化活力有不同的影响 ,正一价金属离子对该酶活性无影响 ,Mg2 +,Co2 +,Mn2 +对该酶有激活作用 ,Zn2 +对该酶有明显的抑制作用。
- 谢莉萍林静瑜肖锐张荣庆
- 关键词：合浦珠母贝碱性磷酸酶酶活性人工育珠
- 利用植物生长调节剂诱导烟草器官分化的基础教学实验被引量：1
- 2016年
- 在MS培养基中加入植物生长调节剂,诱导无菌烟草叶片的生长与分化,其中:2,4-D可以诱导叶片生成愈伤组织;NAA与6-BA浓度比为5∶1时,可以诱导叶片生成不定根;NAA与6-BA浓度比为1∶5时,可以诱导叶片生成不定芽。
- 李玉明王洪钟谢莉萍张贵友
- 关键词：诱导分化NAA6-BA
- 插核手术对合浦珠母贝免疫水平的影响被引量：15
- 2001年
- 对插核手术前后合浦珠母贝血清的超氧化物岐化酶（ＳＯＤ）活力、溶菌活力和抗菌活力以及血细胞的吞噬活性进行了比较研究。结果表明；插核手术后贝血清的‘ＳＯＤ活力明显上升，溶菌、抗菌活力明显下降，血细胞的吞噬活性降低，化学发光的各种参数显著改变，说明贝的体液和细胞免疫水平都明显降低。据此推断手术贝的免疫力低下是导致手术贝高死亡率的最根本原因。
- 周畅谢莉萍张荣庆
- 关键词：合浦珠母贝免疫水平珍珠贝
- 珍珠质基质蛋白及其编码基因与克隆方法和应用
- 本发明公开了一种珍珠质基质蛋白与编码基因及其克隆方法和应用。珍珠质基质蛋白是具有序列表中序列2氨基酸残基序列的蛋白质，蛋白序列的碳端还连接有序列表中序列3的信号肽。编码珍珠质基质蛋白的DNA序列是序列表中的序列1。本发明...
- 张荣庆张勇谢莉萍王洪钟
- 文献传递
- 用时间分辨荧光免疫法测定大鼠血浆中大豆苷元的含量被引量：4
- 2008年
- 目的建立时间分辨荧光免疫分析方法(TR-FIA)测定大鼠血浆中大豆苷元的浓度,并用于大鼠静脉注射大豆苷元溶液的药动学研究。方法血浆样品经酶水解后,经液液萃取法提取游离的大豆苷元,采用大豆苷元时间分辨荧光免疫分析试剂盒和Victor^3 1420型时间分辨荧光分析仪测定大豆苷元含量。结果本方法在0.13～61.02μg·L^(-1)内线性良好,相关系数r=0.998 i,精密度和回收率实验符合方法学要求。大鼠静脉注射大豆苷元溶液后,体内行为符合双室模型,主要药动学参数AUC,t_(1/2(α)),t_(1/2(β)),K_(10)分别为(38.09±5.01)mg·h·L^(-1),(0.30±0.05)h,(18.94±0.78)h,(1.17±0.20)h^(-1)。结论该方法稳定、灵敏度高、操作简单,适用于大豆苷元血药浓度的测定及药动学研究。
- 葛月宾谢莉萍张荣庆
- 关键词：大豆苷元时间分辨荧光免疫分析药动学
- 合浦珠母贝外套膜细胞engrailed、BMP2和Smad3的mRNA表达水平的相关性(英文)被引量：3
- 2010年
- 软体动物engrailed蛋白和骨形成相关蛋白对胚胎贝壳区域边界形成可能具有重要作用,engrailed还被推测为调节基质蛋白在外套膜组织区域化表达的重要调控因子.因此,弄清调控engrailed在软体动物中特征表达的分子机制有着重要的研究意义.但是,由于贝类基因组测序尚不完整,目前也没有建立获得贝类细胞系,以致于许多预测可能参与调控的基因需要通过克隆来鉴定,而且经典的研究细胞信号通路的方法也很难得到应用.目前,在中国南海广泛养殖的合浦珠母贝中,已获知其BMP2和Smad3的cDNA全长,以该贝的基因组为模板,PCR扩增获得了一段engrailed编码区片段.经软件分析,该片段含有EH4结构域,且与其他物种engrailed蛋白具有很高的同源性.研究的贝中,特别是外套膜组织中,engrailed、BMP2和Smad3三者表达之间的相关性,将有助于我们理解贝壳形成的分子机制.贝壳缺刻后半定量PCR试验结果表明,三者均参与贝壳修复,且在贝壳缺刻后的修复过程中,engrailed和Smad3的mRNA表达变化规律非常相似,提示它们之间可能存在相互影响的联系.用地塞米松(DXM)和过氧化氢(H2O2)分别处理原代培养的贝外套膜组织迁出细胞,实时相对定量PCR检测engrailed、BMP2和Smad3的mRNA表达水平,统计分析结果表明,三者具有显著的相关性.上述所有结果为进一步研究贝类生物矿化的发育和信号转导机制提供了新的思路和基础.
- 周玉娟何作鑫李长忠向亮朱方捷张贵友谢莉萍张荣庆
- 关键词：ENGRAILED合浦珠母贝SMAD3BMP2实时PCR
- EDTA对合浦珠母贝碱性磷酸酶活性的影响被引量：8
- 2004年
- 以合浦珠母贝(Pinctadafucata)为实验材料,从其外套膜中分离提取碱性磷酸酶(ALP),分别用不同浓度的EDTA不同时间处理ALP,发现随着EDTA浓度的增大,酶的活力指数下降至完全消失,可见酶分子在脱除金属辅基后,活力完全丧失,它是一种金属酶.对酶活性中心金属离子替换实验中,发现分别加入Mg2+、Mn2+、Co2+、Zn2+后,酶活力可得到一定程度的恢复,而同时加入Mg2+、Zn2+,可使酶活力恢复到92%.
- 林静瑜谢莉萍
- 关键词：合浦珠母贝碱性磷酸酶EDTA
