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模拟微重力对K562细胞红系分化的影响及其机制研究: 近年来,人类向空间领域的开发竞争日益激烈,2003年我国“神舟”五号载人飞船成功发射,揭开了中国载人航天工程的新篇章。与此同时,人们越来越关注空间飞行给航天员带来的影响。已知的空间环境中,微重力、辐射以及磁场环境对人类的...; 钟田雨; 关键词：微重力红系分化蛋白质组丝裂原活化蛋白激酶; 文献传递

人BNIP3基因在Hela细胞中的表达及定位被引量：1: 2009年; 目的:构建BNIP3-HA融合蛋白的真核表达载体,观察BNIP3在Hela细胞中表达及其定位。方法:采用两步克隆法将HA和BNIP3的编码序列以融合表达的形式克隆到载体pcDNA3上,随后转染Hela细胞。BNIP3经AlexaFluor 488免疫荧光标记,线粒体用MitoFluor Red 589染色后在荧光显微镜下观察BNIP3的表达和定位。结果:重组质粒经酶切、聚合酶链反应(PCR)和测序鉴定构建正确,并在Hela细胞中能够表达,在荧光显微镜下观察,BNIP3-HA融合蛋白分布于线粒体。结论:成功构建BNIP3-HA融合蛋白表达载体并在Hela细胞线粒体中表达。; 陈登宇刘芸钟田雨王蔚赵明哲刘靖华姜勇; 关键词：基因 BCL-2 HELA细胞线粒体荧光免疫测定细胞内定位

丝裂原活化的蛋白激酶在高迁移率族蛋白1诱导内皮细胞释放炎性细胞因子中的作用被引量：5: 2009年; 目的研究重组人高迁移率族蛋白1(HMGB1)诱导内皮细胞释放趋化因子白介素-8(IL-8)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的规律及其与脂多糖(LPS)的协同作用;探讨丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号通路在上述作用中的地位。方法用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测不同浓度重组HMGB1(0~75ng/ml),或者HMGB1(15ng/ml)刺激后不同时间点人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌IL-8、MCP-1的水平变化以及HMGB1(15ng/ml)与LPS(10ng/ml)共同刺激后IL-8、MCP-1的水平变化;探讨MAPK信号通路在HMGB1诱导内皮细胞释放趋化因子中的作用时首先加入抑制剂SB203580(20mol/L)、PD98059(20mol/L)和JNKinhibitorII(50nmol/L)预处理细胞1h,再加入HMGB1和LPS刺激。结果在HMGB1蛋白刺激后3~6h,IL-8和MCP-1水平开始增加,12~24h持续增高(P<0.01);随着HMGB1浓度的增加,IL-8和MCP-1水平也明显升高,与基础值相比差异有统计学意义(P<0.01)。如果用LPS(10ng/ml)和...; 钟田雨唐靖刘亚伟李志杰陈登宇赵明哲王蔚刘靖华姜勇; 关键词：白介素-8 单核细胞趋化蛋白-1 人脐静脉内皮细胞

利用荧光共振能量转移技术研究活细胞TLR4与MD-2作用结构域被引量：6: 2009年; 脂多糖(LPS)的识别和信号转导是宿主发生防御反应的关键,Toll样受体4(TLR4)与髓样分化蛋白-2(MD-2)形成复合物在LPS的识别及其信号转导中发挥了重要作用.研究TLR4与MD-2结合的功能结构域,对于深入了解LPS信号转导机制及其内毒素休克的防治具有重要意义.运用基于强度的三通道荧光共振能量转移技术(FRET)及基因突变和转染技术,研究了活细胞TLR4与MD-2作用的结构域.结果表明:N端Glu24～Met41缺失使TLR4与MD-2结合能力明显下降;LPS刺激后TLR4聚合迅速增加,而缺失Glu24～Met41的TLR4不能聚合.上述结果提示,TLR4的Glu24～Met41不仅是结合MD-2的区域,并且还参与了LPS刺激后TLR4的聚合作用.; 钟田雨唐靖陈登宇刘亚伟王蔚刘靖华姜勇; 关键词：MD-2 信号转导

模拟微重力对K562细胞增殖的影响被引量：4: 2011年; 目的:研究微重力环境"航天贫血症"发生的相关机制。方法:采用美国国家航空航天局提供的旋转式细胞培养系统(RCCS-1)模拟微重力环境,培养人白血病K562细胞。用牛巴氏计数板计数细胞,用流式细胞术检测细胞周期,用Western-bloting方法检测细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白表达及其磷酸化水平。结果:模拟微重力环境培养的K562细胞的增殖速度显著低于地面普通培养对照组;同时还显著抑制细胞周期进程,使其停滞在G0/G1期;模拟微重力环境培养的细胞磷酸化ERK1/2表达随时间延长逐渐下降。结论:模拟微重力环境使细胞周期阻滞于G0/G1期,可能是由模拟微重力作用下ERK1/2磷酸化水平下降所致。; 龙星星钟田雨平宝红郑磊高雅周淑芸; 关键词：微重力人白血病K562细胞增殖

用FRET技术研究TLR4和MD-2的相互作用被引量：9: 2006年; 目的利用荧光共振能量转移(FRET)技术在活体细胞研究人Toll样受体(TLR)4与髓样细胞分化蛋白2(MD-2)的相互作用。方法用PCR方法扩增TLR4编码序列和MD-2编码序列(不包括信号肽序列)并分别亚克隆入带TLR4信号肽的增强型青色荧光蛋白和增强型黄色荧光蛋白表达载体(pECFP-C1-SP,pEYFP-C1-SP)中,重组质粒经酶切、序列鉴定分析后分别或共同转染HEK293细胞,用荧光显微镜观察荧光蛋白表达和分布情况,并用常规的方法和受体光漂白的方法对共表达青色荧光蛋白(CFP)-TLR4和黄色荧光蛋白(YFP)-MD-2的细胞进行FRET分析。结果重组质粒在HEK293细胞中得到表达,仅转染pECFP/TLR4或pEYFP/MD-2的细胞可见青色或黄色荧光主要分布在胞质内,以核周较多;而共转染pECFP/TLR4和pEYFP/MD-2的细胞可同时检测到青色和黄色荧光,主要分布在细胞膜,同时胞质也有少量表达。无论是用常规的方法还是受体光漂白的方法,对共表达CFP-TLR4和YFP-MD-2的细胞进行FRET分析结果表明有FRET现象的发生,提示TLR4和MD-2有相互作用并形成复合物。结论本研究为TLR4和MD-2在活体细胞中的相互作用提供了直接的证据。; 刘亚伟刘靖华唐靖赵清李建军赵明哲李志杰王国军钟田雨邓鹏姜勇; 关键词：TOLL样受体4 荧光共振能量转移

髓样分化蛋白-2在识别和转导内毒素信号中的作用被引量：7: 2007年; 脂多糖(LPS)通过TLR4介导细胞炎症反应.研究表明,髓样分化蛋白-2(MD-2)通过与TLR4形成复合物参与LPS诱导的细胞信号过程.TLR4/MD-2复合物中的MD-2结合LPS后,引起TLR4低聚化,进而激发下游信号.MD-2合成后,大部分在内质网/高尔基体和TLR4结合,然后以TLR4/MD-2复合物的形式在细胞表面表达.这既能调节TLR4的胞内分布,又能辅助TLR4识别LPS.还有一部分MD-2释放到血浆中,形成可溶性的MD-2(sMD-2).sMD-2在CD14参与下,能结合血浆中的LPS,形成LPS-sMD-2复合物从而辅助只表达TLR4而不表达MD-2的细胞识别LPS,但过度表达的sMD-2又能抑制LPS信号.MD-2在TLR4介导的内毒素识别和信号转导过程中发挥了重要的调控作用.; 钟田雨刘靖华姜勇; 关键词：信号转导

基于FRET技术的MD-2与TLR4活体相互作用研究: 革兰氏阴性(G-)菌感染引起的脓毒症(sepsis)是重症监护病房(intensivecare unit，ICU)常见的致死原因。脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是G-菌细胞壁的主要成分，也是其致病...; 钟田雨; 关键词：脓毒症重症监护细菌性感染; 文献传递

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钟田雨