雷智刚
- 作品数：12 被引量：30H指数：4
- 供职机构：中山大学中山医学院寄生虫学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金卫生部科学研究基金联合国开发计划署基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 广州管圆线虫γ-丁基甜菜碱羟化酶基因的获得与分析被引量：7
- 2004年
- 目的 对广州管圆线虫成虫cDNA文库的插入片段进行研究。方法 铺平板培养广州管圆线虫成虫cDNA文库 ,从中挑选生长、分离良好的噬菌斑进行PCR扩增 ,根据PCR产物电泳结果挑选较大的cDNA插入片段进行克隆、测序和原核诱导表达 ,对表达产物进行免疫学鉴定 ,用生物信息学方法分析其结构和功能。结果 获得了国内外尚未见报道的广州管圆线虫全长基因 ,该基因长 14 16bp ,编码由 4 2 1个氨基酸组成的γ -丁基甜菜碱羟化酶 (gamma -butyrobetaine ,2 -oxoglu taratedioxygenase ,GAMMA -BBH ,EC 1 14 11 1) ;免疫学鉴定结果显示GAMMA -BBH不能与大鼠的抗血清结合。 结论 首次获得广州管圆线虫成虫GAMMA -BBH表达基因 ,为广州管圆线虫的研究提供实验室依据。
- 孟锦绣梁瑜何蔼李卓雅雷智刚易冰张瑞琳詹希美
- 关键词：广州管圆线虫基因CDNA文库生物信息学
- 抗日本血吸虫循环抗原噬菌体抗体基因结构分析
- 2003年
- 目的 对获得的抗日本血吸虫循环抗原的抗体克隆进行基因分析。方法 将 2株阳性克隆抗体基因进行测序 ,并用 NCBI和 Ig Blast Analysis of Imm unoglobulin sequences中的软件 ,对DNA序列和由其推导的氨基酸序列进行分析 ,并对其二级结构进行了模拟。结果 B0 4和 C2 4阳性克隆抗体基因的长度分别为 70 8bp和 732 bp,轻链和重链可变区基因与小鼠免疫球蛋白基因有高度的同源性。推导的氨基酸序列均具有典型的抗体轻、重链可变区特征。对 2株克隆抗体基因二级结构进行模拟 ,结果显示以 β-折叠和转角为主的平行肽链形成片层样结构 ,均符合抗体的基本构型。结论 B0 4、C2 4阳性克隆外源基因均属于小鼠免疫球蛋白可变区基因。
- 陈代雄俞慕华雷智刚孟锦绣何蔼李卓雅曹爱莲詹希美
- 关键词：日本血吸虫单链抗体可变区基因
- 日本血吸虫组织蛋白酶L2基因扩增及克隆被引量：2
- 2003年
- 目的 体外扩增日本血吸虫中国大陆株组织蛋白酶L2 (SjCL2 )的编码区基因序列 ,将其克隆到真核表达质粒pcDNA3中 ,为进一步对其进行功能研究奠定基础。方法 用TRIZOL分离日本血吸虫成虫RNA ,RT -PCR扩增目的基因 ,将扩增产物定向克隆到真核表达载体 pcDNA3中。 结果 RT -PCR特异性扩增出SjCL2编码区基因序列 ,其片段大小为1kb左右 ,经酶切和PCR鉴定表明所构建的质粒pcDNA -SjCL2中含有所扩增的基因序列。 结论 RT -PCR扩增的SjCL2编码区基因序列与预期长度相符合 ,成功构建了含SjCL2编码区基因的真核表达质粒pcDNA -SjCL2。
- 雷智刚何蔼李卓雅孟锦绣易冰詹希美
- 关键词：日本血吸虫基因扩增基因克隆基因表达
- 人源性抗腮腺炎病毒噬菌体抗体库的构建被引量：2
- 2003年
- 应用噬菌体表面呈现技术,从腮腺炎病毒抗体阳性者淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR扩增出抗体重链Fd和轻链基因,经XhoI/SpeI、SacI/XbaI双酶切,先后克隆入噬粒载体pComb3中,再电转化大肠杆菌XL1-blue,以辅助噬菌体VCSM13进行超感染。从分离出的淋巴细胞中共提取高质量RNA约110μg,经逆转录、PCR,分别扩增出约700 bp大小的κ、λ和Fd基因。PCR产物和载体经纯化、双酶切后进行连接,在2.5 kV、200 Ω、25μF的条件下电转化,转化率为2.48×107。最终得到库容量为6.4×106,滴度为7.8×1013 cfu/L的噬菌体抗体库。所构建的抗腮腺炎病毒特异性噬菌体抗体库容量中等大小,能满足从中筛选抗HN蛋白噬菌体抗体的需要。
- 俞慕华曾忠铭段永翔黄锐敏叶友松雷智刚詹希美
- 关键词：腮腺炎病毒逆转录聚合酶链反应电穿孔噬菌体抗体
- 日本血吸虫组织蛋白酶L基因克隆和真核表达的研究
- 在中国有500多万的血吸虫病患者,日本血吸虫是引起血吸虫病的病原体.血吸虫成虫寄生在人类及哺乳动物宿主的血管内,吞食大量的红细胞,降解血红蛋白(Hb)以提供生长、发育和繁殖所需.已报道了5种参与了Hb降解过程的蛋白酶:组...
- 雷智刚
- 关键词：日本血吸虫组织蛋白酶L分子克隆真核表达
- 日本血吸虫组织蛋白酶L2(SjCL2)基因巴氏毕赤酵母表达载体的构建被引量：3
- 2004年
- 目的 扩增SjCL2基因 ,构建巴氏毕赤酵母表达载体 pPICZαB -SjCL2 ,为进一步研究其蛋白酶的功能奠定基础。方法 运用RT -PCR技术 ,从日本血吸虫 (中国大陆株 )成虫总RNA中扩增获得SjCL2基因 ;将其定向克隆至巴氏毕赤酵母表达载体pPICZαB质粒 ;经KpnⅠ、XbaⅠ双酶切分析和PCR鉴定筛选出阳性克隆 ,测序分析SjCL2基因并确定其读码框的正确插入。结果 利用RT -PCR技术从日本血吸虫成虫总RNA中扩增到约 1Kb大小的SjCL2基因 ,通过双酶切分析、PCR鉴定以及DNA序列分析确定SjCL2基因被克隆到巴氏毕赤酵母表达载体 pPICZαB中。 结论 成功构建了含有SjCL2基因编码区序列的巴氏毕赤酵母表达载体 pPICZαB
- 易冰何蔼雷智刚郑小英张瑞林孟锦绣申川军李卓雅詹希美
- 关键词：日本血吸虫基因克隆
- 抗日本血吸虫噬菌体抗体库的筛选和阳性克隆的鉴定
- 2003年
- 目的 研制抗日本血吸虫循环抗原Sj MAg的单链抗体。 方法 用日本血吸虫成虫代谢抗原Sj MAg包板 ,对已构建的抗日本血吸虫噬菌体抗体库进行 3轮富集 ,然后用ELISA法从富集的次级抗体库中筛选阳性克隆 ,最后借助ELISA、SDS PAGE和Western印迹等方法 ,根据阳性克隆表达产物与其它 4种吸虫抗原反应的情况 ,进行特异性鉴定。 结果 从随机挑取的 72个克隆中筛选到阳性克隆 6个 ,经交叉筛选和鉴定最终获得特异性抗日本血吸虫阳性克隆 2个。 结论 用固相富集和ELISA筛选法可以从抗体库中有效地筛选到抗日本血吸虫循环抗原的阳性克隆 ,获得的抗体克隆可用于抗日本血吸虫循环抗原单链抗体的制备。
- 陈代雄俞慕华雷智刚郑斌何蔼张瑞琳詹希美
- 关键词：阳性克隆ELISA法
- 抗华支睾吸虫循环抗原噬菌体抗体基因分析
- 2002年
- 目的 对获得的抗华支睾吸虫循环抗原Fab抗体克隆进行基因分析。方法 将 2株阳性克隆抗体基因进行测序 ,并用NCBI和IgBlastAnalysisofImmunoglobulinsequences中的分析软件 ,对其推导的氨基酸序列进行分析 ,再进一步模拟它们的二级结构。结果 E38、B0 5阳性克隆抗体基因与人免疫球蛋白κ轻链和γ重链可变区基因高度同源。推导的氨基酸序列均具有典型的抗体轻、重链可变区特征。用分析软件对推测的 2株克隆轻链和重链Fd氨基酸序列进行二级结构模拟 ,结果显示以β -折叠和转角为主的平行肽链形成片层样结构 ,均符合抗体二级结构构型。 结论 E38、B0 5阳性克隆外源基因均属于人免疫球蛋白κ轻链和γ重链可变区基因。
- 俞慕华黄文繁雷智刚何蔼孟锦绣李卓雅唐希美
- 关键词：循环抗原噬菌体抗体基因分析克隆
- 日本血吸虫组织蛋白酶L1基因的编码区全序列分析及克隆被引量：8
- 2002年
- 目的 分析日本血吸虫组织蛋白酶L1(SjCL1)基因编码区的完整序列,并定向克隆到真核表达质粒pcD-NA3中。 方法 从日本血吸虫成虫提取总RNA,进行反向巢式RT-PCR,T载体克隆后测序。PCR扩增SjCL1基因的编码区序列,并将扩增产物克隆到pcDNA3质粒的BamHI和Xhol位点上。结果 通过反向巢式RT-PCR扩增出332 bp SjCL1基因5’端序列,测序后与报道的SiCL1基因部分序列拼接,可得到一个编码317个氨基酸的完整编码区序列。PCR特异性扩增出SjCL1编码区基因序列,其大小约为1 kb。经酶切、PCR鉴定和测序表明所构建的质粒pcDNA-SjCL1中含有所扩增的基因序列。 结论 构建了含SjCL1基因的编码区序列的真核表达质粒pcDNA-SjCL1。
- 雷智刚孟锦绣何蔼李卓雅易冰詹希美
- 关键词：日本血吸虫组织蛋白酶全序列分析基因克隆
- 人源性抗腮腺炎病毒噬菌体抗体库的构建
- 本文应用噬菌体表面呈现技术,从腮腺炎病毒抗体阳性者淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR扩增出抗体重链Fd和轻链基因,经XhoⅠ和SpeⅠ,SacⅠ和XbaⅠ双酶切,先后克隆入噬粒载体pComb3中,再电转化大肠杆菌XL...
- 俞慕华 曾忠铭 段永翔 黄锐敏 叶友松 雷智刚詹希美
- 关键词：腮腺炎病毒噬菌体抗体库容量
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