- 重组尿激酶型纤溶酶原激活物受体在酵母系统中的表达及鉴定被引量：1
- 1998年
- 构建截断型可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体（ｕ－ＰＡＲ）的原核及酵母表达质粒并分别在大肠杆菌和Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ酵母中高效表达．利用ＰＣＲ扩增截断型可溶性ｕ－ＰＡＲｃＤＮＡ片段，并分别连入酵母及原核表达载体中，构建成表达质粒．后者经诱导表达的蛋白被用于免疫家兔，获得抗ｕ－ＰＡＲ的抗血清，用于对酵母表达产物的鉴定．前者在甲醇的诱导下表达，产物分泌至培养液中．结果表明，原核表达的ｕ－ＰＡＲ蛋白免疫家兔后获得高效价的抗血清，利用此抗血清所作Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实酵母表达蛋白具有ｕ－ＰＡＲ的免疫原性，表观分子量４０ｋＤ左右．Ｍｕｔ－表型在第５ｄ为最高（２．５μｇ／ｍｌ），Ｍｕｔ＋表型在第４ｄ为最高（７．５μｇ／ｍｌ）．因此，构建的可溶性ｕ－ＰＡＲ表达质粒在Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ酵母细胞获得表达，为进一步竞争拮抗受体功能的研究奠定了基础．
- 唐辉滨何诚彭鲁英于伟英应其龙朱运松
- 关键词：肿瘤酵母
- 干扰素的分子生物学研究进展被引量：5
- 1994年
- 本文介绍了干扰素(IFN)分子生物学方面的研究进展,主要涉及IFN的基因结构及其表达调控,IFN受体(IFNR)的结构和功能,以及IFN与受体结合后,引起的信号传导新模式和快速调控基因表达的分子机理。
- 何诚
- 关键词：干扰素分子生物学
- SERPIN超家族的结构、功能及活性调节被引量：1
- 1998年
- 丝氨酸蛋白酶抑制剂(SERPIN)超家族在体内生理及病理过程中起重要的调节作用,也是研究蛋白质结构与功能关系的良好模型,其独特的构象特征、作用机制、广泛的生物学功能以及与疾病发生的联系等,已引起人们极大的关注。
- 何诚
- 关键词：丝氨酸蛋白酶活性调节疾病
- t PA、u PA/u PAR及其抑制剂PAI 1在乳腺肿瘤的表达被引量：4
- 1999年
- 目的 研究组织型纤溶酶原激活剂（ｔＰＡ） 、尿激酶型纤溶酶原激活剂（ｕＰＡ） 及其受体ｕＰＡＲ、１ 型纤溶酶原激活剂抑制剂ＰＡＩ１ 在乳腺肿瘤中的分布及酶学活性。 方法 用免疫组织化学ＡＢＣ方法，分析４ 种因子在乳腺肿瘤组织中的定位及半定量表达，用发色底物法测定乳腺肿瘤组织提取物中的ｔＰＡ 和ｕＰＡ 的活性。 结果 ｔＰＡ、ｕＰＡ、ＰＡＩ１ 主要分布在正常腺上皮及癌上皮细胞的胞质中，ｕＰＡＲ 则在癌细胞的胞膜及胞浆中；总ＰＡ 活性和ｔＰＡ 活性在乳腺良、恶性组织中均无显著性改变，但ｕＰＡ，ｕＰＡＲ 和ＰＡＩ１ 在乳腺癌组织中的表达明显高于良性组织及癌旁组织；ｕＰＡ／ｕＰＡＲ在转移灶中的表达较原发灶有不同程度的下降，而ＰＡＩ１ 在转移灶中却较原发灶中为高。 结论 ｔＰＡ 可能与乳腺癌的恶性表型无关。而ｕＰＡ／ｕＰＡＲ 与恶性表型相关；ｕＰＡ／ｕＰＡＲ 和ＰＡＩ１的相互制约及平衡在调节肿瘤原发灶癌细胞的移动中可能起到重要作用。
- 唐辉滨何诚廖劲晖田昱应其龙宋后燕朱运松
- 关键词：U-PAU-PAR抑制剂
- 尿激酶受体的结构与功能研究进展被引量：2
- 1995年
- 尿激酶受体(uPAR)是纤溶系统的重要成份,与uPAR作用后和体内多种生理病理过程关系密切。本文综述uPAR的分子型式与结构特症,uPAR对细胞表面某些蛋白质水解的介导,激活生长因子,以及介导uPAR-PAI复合物的内吞清除和信号转导等功能。由此进一步阐明体内纤溶系统的作用及其在肿瘤治疗中的临床意义。
- 何诚
- 关键词：纤溶系统尿激酶受体
- Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂cDNA在P.pastoris酵母菌中的表达和鉴定
- 1998年
- 将编码３７９个氨基酸残基的ＰＡＩ－１ｃＤＮＡ插入到含ＡＯＸ１启动子和ＰＨＯ１分泌信号肽序列的甲醇营养型酵母载体中，构建成表达质粒ｐＹＩＳ－１．表达质粒转化Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ甲醇营养型酵母细胞，筛选Ｈｉｓ＋Ｍｕｔ－表型的转化子，经低密度摇瓶培养，１％甲醇诱导表达７ｄ后，培液经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，ＰＡＩ－１生物活性测定和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实表达出分子量为４３～５１ｋＤ的４条ＰＡＩ－１条带．表达的ＰＡＩ－１能有效地分泌到培液中，占培液总蛋白的２６％左右，达４ｍｇ／Ｌ培液；其比活性为１．１６×１０４ＡＵ／ｍｇ．
- 何诚唐辉滨田昱宋后燕朱运松
- 关键词：PAI-1
- nm23-H1-GFP融合蛋白在人肺癌细胞株中的表达及其对肿瘤细胞体外侵袭能力的影响被引量：13
- 2000年
- 研究 nm2 3- H1在肿瘤细胞中的定位及其对肿瘤细胞体外侵袭能力的影响 .用 RT- PCR方法检测人高和低转移肺巨细胞癌细胞株 95 D和 95 C中 nm2 3- H1的表达 ;利用分子克隆技术构建nm2 3- H1 -绿色荧光蛋白 ( GFP)融合基因表达质粒 ( p NM2 3- GFP) ,经脂质体转染将此质粒导入95 D和 95 C细胞中 ,筛选高荧光强度的克隆 ,用 Boyden小室模型检测其体外侵袭能力的变化 .结果显示 nm2 3- H1在 95 C细胞中的表达比 95 D高 .95 D细胞中表达的 nm2 3- H1 c DNA未发生突变 .表达的 nm2 3- H1 - GFP融合蛋白位于细胞的胞浆近胞膜处 .转染 p NM2 3- GFP质粒的 95 D和 95 C细胞体外侵袭能力明显比对照组低 .这些提示 nm2 3- H1高表达能明显降低肿瘤细胞体外侵袭能力 .
- 何诚贺平朱运松
- 关键词：NM23-H1肺巨细胞癌肿瘤侵袭转移
- 大肠杆菌表达的重组人PAI－1的纯化被引量：2
- 1996年
- 纯化了工程细菌表达的可溶态和包含体形式的ｒｈＰＡＩ－１，纯度均达９８％，其ｒｈＰＡＩ－１蛋白质得率分别为１５％和１９％，比活性分别为３３５００ＩＵ／ｍｇ和２７７０００ＩＵ／ｍｇ。Ｎ端氨基酸序列分析显示，ｒｈＰＡＩ－１Ｎ端１５个氨基酸与天然ＰＡＩ－１完全一致；包含体复性研究表明，包含体的复性与复性蛋白的浓度及复性液中助溶剂的浓度密切相关。纯化的ｒｈＰＡＩ－１为分析ＰＡＩ－１结构与功能及探讨其临床应用提供了材料。
- 贺平何诚张华宋后燕朱运松
- 关键词：纤溶酶原激活物抑制剂提纯
- 尿激酶受体在大肠杆菌中的表达及其多克隆抗体的制备
- 1998年
- 目的构建尿激酶受体（ｕｒｏｋｉｎａｓｅ－ｔｙｐｅｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｕＰＡＲ）表达质粒并在大肠杆菌中表达，用纯化的表达产物ｕＰＡＲ蛋白制备多克隆抗体并初步应用于肿瘤标本的检测。方法用基因工程的方法构建ｕＰＡＲｃＤＮＡ表达质粒ｐＬＹ４－ｕＰＡＲ，转化重组大肠杆菌在４２℃条件下诱导表达；利用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ进行纯化并用纯化后的抗原免疫新西兰兔制备多克隆抗体，应用制备的抗体对乳腺癌和肝癌中ｕＰＡＲ的分布进行检测。结果ｕＰＡＲ表达质粒在大肠杆菌中高效表达，表观Ｍｒ为３０×１０３左右。表达的ｕＰＡＲ占全菌蛋白的２０％左右；获得了效价为１∶３２的ｕＰＡＲ多克隆抗体；发现ｕＰＡＲ主要分布在癌细胞的表面及胞质内，而在癌旁组织中则较弱。结论ｕＰＡＲ在大肠杆菌获得高效表达，并制备得到多克隆抗体。ｕＰＡＲ在癌组织（乳腺癌及肝癌）与癌旁组织间的表达差异提示可将其应用到临床肿瘤的诊断与肿瘤转移的实验性研究中。
- 唐辉滨于伟英何诚廖劲辉田昱田昱朱运松
- 关键词：尿激酶受体多克隆抗体大肠杆菌肿瘤血管
- 甲醇营养型酵母表达系统的研究进展被引量：28
- 1998年
- 甲醇营养型酵母越来越被人们用作外源基因的表达系统。本文综述其在表达质粒构建，表达株的筛选，表达产物的糖链加工以及它分拣外源蛋白进入过氧化物酶体等的特点，不仅具有广泛的商业用途，而且在理论研究特别是膜蛋白结构与功能方面也有潜在应用价值。
- 何诚朱运松
- 关键词：基因表达系统过氧化物酶体
- 全文增补中
