姚立红
- 作品数：44 被引量：77H指数：5
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 表达人干扰素α-2b基因重组乳杆菌的鉴定及其抗病毒活性的动态研究被引量：1
- 2007年
- 目的：进一步鉴定表达人干扰素α-2b的重组乳杆菌DM8909／pSC111AE-IFN-α-2b，考察重组菌的培养条件及其表达产物动态的抗病毒活性。方法：在LRS培养基培养重组菌株DM8909／pSC111AE-IFN-α-2b并诱导表达，用Western印迹鉴定培养上清中的表达产物，对重组菌株在LRS培养基中的不同时间的D600、pH值、活菌数、表达产物抗病毒活性进行动态观察。结果：Western印迹鉴定证实了重组菌上清中的IFN-α-2b。重组菌培养18h后pH值由6．5开始下降，56h后降至3．5；细菌于培养21h进入对数期，32h进入稳定期；培养24～32h上清中干扰素抗病毒活性为4．08×10^5U／ml。结论：重组乳杆菌DM8909／pSC111AE-IFN-α-2b可表达IFN-α-2b于培养上清，培养24～32h上清中干扰素含量最高，可用于预防及治疗病毒感染的进一步研究。
- 陈辉张力平贾润清傅晓丽姚立红陈爱君康白袁杰利张智清
- 关键词：干扰素Α-2B乳杆菌属抗病毒活性
- 融合蛋白IFN-IgGFc在乳酸乳杆菌中的表达及其生物学活性研究被引量：1
- 2007年
- 用乳酸菌表达有药用价值的生物学活性多肽,是当前国际上的研究热点之一,对开发新的功能性食品具有广阔的前景。本文应用PCR方法将人干扰素IFN-α-2b基因与IgGFc基因连接,并引入一段柔性连接肽,构建了融合蛋白基因IFN-IgGFc,将融合蛋白基因克隆到原核表达载体pSC111AE中,转化乳酸乳杆菌ATCC393进行诱导表达及鉴定,并研究了融合蛋白的生物学活性。结果表明,通过Western-Blot方法在表达上清液检测出干扰素融合蛋白,ELISA测定表明两段多肽能够保持各自的构象,基因工程乳酸菌表达的上清液可以诱导WISH细胞产生明显的抗VSV病毒的活性,其活性为1.71×103IU/ml。本文首次构建并在大肠杆菌和乳酸菌表达了IFN-IgGFc融合蛋白,获得了能产生人干扰素的乳酸菌株,为基因工程乳酸菌及相关药物的开发研究奠定了基础。
- 高绪文陈辉贾润清姚立红马长伟张智清
- 关键词：乳酸菌干扰素融合蛋白抗病毒
- 甲型H_5N_1流行性感冒病毒基质蛋白2与基质蛋白1双基因载体疫苗的构建及其免疫学评价
- 2011年
- 目的构建表达甲型H5N1流行性感冒(流感)病毒基质蛋白(Matrix Protein,M)2(M2)与1(M1)基因的脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic Acid,DNA)疫苗与腺病毒(Adenovirus,Ad)载体疫苗,将其联合免疫小鼠,对免疫效果进行评价。方法以中国分离的首株人H5N1亚型禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)[A(甲型)/Anhui(安徽)/1/2005]作为研究对象,聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增全长M2和M1基因,构建共表达H5N1亚型AIVM2和M1基因的重组pStar-M2/M1。利用Ad-Easy载体系统,在293细胞中包装出表达M2基因的重组Ad-M2和表达M1基因的重组Ad-M1。按初次免疫-加强免疫程序,分别用重组pStar-M2/M1和重组Ad-M2+Ad-M1免疫BALB/c小鼠,共免疫4次,每次间隔14d。第1、3次用DNA疫苗,第2、4次用重组Ad疫苗,每次免疫前及末次免疫后13d采集血清,用于检测体液免疫应答。末次免疫后14d,以H1N1亚型流感病毒A/PuertoRico(PR,波多黎各)/8/34/株进行攻击。病毒攻击后14d内,逐日观察小鼠的存活及体重变化情况。结果用间接免疫荧光(Indirect Immunofluorescence Assay,IFA)方法检测到了重组pStar-M2/M1、Ad-M2、Ad-M1载体上相应插入基因的表达,将其联合免疫小鼠后,酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测到小鼠血清中的抗H5N1亚型流感病毒M2、M1的IgG抗体。病毒攻击实验结果表明,免疫后小鼠对流感病毒A/PR/8/34(H1N1)株的攻击有一定的交叉保护作用。结论成功构建了表达甲型H5N1流感病毒M2与M1基因的DNA疫苗与重组Ad疫苗,联合免疫小鼠后刺激产生了特异性的体液免疫应答,并对异源毒株具有一定的交叉保护作用。
- 郭建强姚立红陈爱珺刘晓宇付金奇张智清
- 关键词：联合免疫
- 一种人偏肺病毒病毒样颗粒、制备方法、应用及疫苗
- 本发明公开了一种人偏肺病毒病毒样颗粒、制备方法、应用及疫苗。人偏肺病毒病毒样颗粒由流感病毒H2N2的M1蛋白和人偏肺病毒的F蛋白组装而成，编码M1蛋白的核酸序列如SEQ ID NO:1所示，编码F蛋白的核酸序列如SEQ ...
- 麻粉莲郑丽舒陈爱珺姚立红
- H5N1亚型流感病毒M2与NA基因真核表达载体的构建与鉴定
- 2011年
- 目的 构建表达H5N1亚型流感病毒M2和NA基因的多种真核表达载体.方法 以我国分离的首株人H5N1亚型禽流感病毒（A/Anhui/1/2005）作为研究对象,PCR扩增全长M2与NA基因.将M2基因克隆入真核表达载体pStar的IRES上游或下游的MCS,构建重组pStar-M2/和pStar-/M2.将NA基因克隆人pStar载体IRES上游或下游的MCS,构建重组pStar-NA/和pStar-/NA.将M2和NA基因先后克隆到pStar载体IRES序列的上游和下游MCS,分别构建双基因共表达重组pStar-M2/NA和pStar-NA/M2.将重组质粒转染293细胞,使用IFA方法 检测各重组质粒相应外源基因的表达.结果 通过酶切鉴定,各重组质粒构建正确.将其转染293细胞后,使用IFA方法 检测到了各重组质粒中相应外源基因的表达.结论 构建了多种表达H5NI亚型流感病毒M2和（或）NA基因的真核表达载体,为研究开发流感DNA疫苗奠定了基础.
- 郭建强姚立红陈爱珺刘晓宇付金奇徐鹏卫张智清
- 关键词：流感病毒A型病毒蛋白质类神经氨酸酶
- H5N1流感病毒M1蛋白免疫制备的单克隆抗体的研究被引量：1
- 2009年
- 目的制备抗人流感病毒H5N1株M1蛋白的单克隆抗体，为流感的快速诊断和研究提供新的工具。方法应用在大肠埃希菌中表达的人H5N1亚型禽流感病毒（A／Anhui／1／2005）株M1蛋白，以纯化的表达产物免疫BALB／C小鼠，取脾细胞与sp2／0细胞系作细胞融合后，间接ELISA法筛选阳性的杂交瘤细胞，并应用间接免疫荧光法对抗体的特异性进行鉴定。结果获得3株能稳定分泌抗禽流感病毒M1抗原的McAb杂交瘤细胞株，交叉反应试验及间接免疫荧光检测表明，三株McAb具有型特异性。结论用H5N1禽流感病毒M1蛋白免疫制备的单克隆抗体，具有一定的交叉反应性，可用于多种亚型甲型流感病毒的检测。
- 陈爱珺姚立红郭建强徐一刘晓宇贾润清张智清
- 关键词：流感病毒A型膜蛋白质类抗体单克隆杂交瘤
- 应用核酸适配子检测细胞因子的新方法-ELONA法被引量：8
- 2004年
- 以人肿瘤坏死因子 (Humantumornecrosisfactor,hTNF α)特异性的核酸适配子为检测分子建立了酶联寡聚核苷酸吸附试验 (Enzyme linkedOligonucleotideassay ,ELONA)方法 ,用于hTNF α的检测。通过SELEX(SystematicEvolutionofLigandsbyExponentialEnrichment)方法从随机RNA库中筛选到与hTNF α特异结合的RNA适配子。根据其序列 ,用体外转录方法合成生物素标记的RNA适配子 ,并对其进行了氨基修饰以增加其稳定性。以hTNF α的单克隆抗体为捕获分子 ,生物素标记的hTNF α特异性RNA适配子为检测分子建立了ELONA方法 ,并对这种检测方法的灵敏度、精密度和准确度等进行了分析。同时用ELONA和ELISA方法检测了正常人血清中的hTNF α水平 ,并对检测结果进行比较。结果显示 ,ELONA方法的灵敏度为 10 0pg mL ,具有较好的精密度和准确度。ELONA法的检测结果与ELISA法检测结果基本一致。该方法适用于血清。
- 严馨蕊高绪文姚立红张智清
- 关键词：人肿瘤坏死因子细胞因子生物素标记
- 共表达流感病毒基质蛋白1和基质蛋白2基因的重组杆状病毒的构建
- 2015年
- 目的构建共表达流感病毒基质蛋白1(matrix protein 1,M1)和基质蛋白2(M2)基因的重组杆状病毒。方法扩增流感病毒A/PR/8/34株的M1和M2全长基因,并将其分别插入到p Fast Bacdual(p FBD)载体的两个多克隆位点,筛选出阳性重组转座载体p FBD-M1/M2,将其转化含有穿梭载体Bacimd的感受态DH10Bac细胞,经同源重组获得重组穿梭载体r Bacmid-M1/M2,在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,包装出重组杆状病毒r Bac-M1/M2。采用噬斑形成法检测重组病毒滴度,PCR法检测重组病毒基因组M1和M2基因插入情况,间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)和Western blot法检测M1和M2基因的表达。结果经PCR鉴定重组穿梭载体r Bacmid-M1/M2构建正确;第3代r Bac-M1/M2滴度为1×108 pfu/ml;感染r Bac-M1/M2的sf9昆虫细胞经PCR扩增,可见3 600 bp的条带;可在感染细胞的胞内和胞膜上检测到明显的特异性黄绿色荧光;感染r Bac-M1/M2的细胞裂解上清与鼠抗流感病毒(PR8株)多克隆抗体发生特异性反应,在相对分子质量约26 000及11 000处可见特异性反应条带。结论成功构建了共表达H1N1亚型流感病毒M1和M2基因的重组杆状病毒,为构建流感病毒样颗粒以及研制新型广谱流感疫苗奠定了基础。
- 姚立红陈爱珺徐鹏卫张智清郭建强
- 关键词：流感病毒杆状病毒
- 寨卡病毒E蛋白在重组杆状病毒中的表达
- 2017年
- 目的 在杆状病毒中表达寨卡病毒（Zika virus,ZIKV）包膜蛋白（Envelope protein,E蛋白）.方法 人工合成ZIKV E基因全长序列（1 518 bp）,并克隆到pFastBac1载体上,得到重组杆状病毒转移载体pFB1-E,转化含DH10Bac感受态细胞,获得骨架质粒rBacmid-E,转染sf9细胞,得到重组杆状病毒rBac-E.检测病毒滴度,PCR法检测E基因的插入,间接免疫荧光和Western blot法检测E蛋白的表达.结果 经PCR方法鉴定,重组杆状病毒骨架质粒构建成功,重组病毒rBac-E（第3代）病毒滴度为2.58×105pfu/ml.提取感染rBac-E的sf9细胞基因组,经PCR扩增得到3 830 bp的条带,间接免疫荧光检测出现特异性绿色荧光.Western blot鉴定可见感染重组杆状病毒rBac-E的细胞沉淀中在相对分子质量55×103处有特异性条带.结论 在杆状病毒表达系统中重组表达了ZIKV E蛋白,为ZIKV E蛋白功能研究及疫苗的开发奠定了基础.
- 高寒春姚立红王超郑丽舒
- 关键词：包膜蛋白杆状病毒SF9细胞
- 流感病毒M2蛋白胞外区与铜绿假单胞菌外毒素A融合蛋白的表达及其免疫原性研究被引量：5
- 2010年
- 本研究构建了表达甲型流感病毒M2蛋白胞外区与铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)融合蛋白的原核表达载体,根据铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)核苷酸序列设计突变PCR引物并实施突变PCR,以获得PEA基因编码区第553位氨基酸密码子缺失的突变PEA(ntPE),从而产生无毒性的PEA突变基因,然后用合成的M2e编码区替换ntPE基因中的非必需区Ib,产生ntPE-M2e嵌合基因。将该嵌合基因导入pET表达载体以构建原核表达载体,将表达产物胶回收后与弗氏不完全佐剂联合皮下免疫BALB/c小鼠,终免两周后用5个LD50流感病毒A/PR/34/8株进行攻击。取动物血清作ELISA并取脾脏作ELISPOT试验结果表明,免疫组可以诱导小鼠产生抗M2e特异性抗体反应和细胞免疫反应并能够抑制病毒在肺内的复制。本研究为甲型流感病毒广谱疫苗的进一步研发打下了基础。
- 徐一姚立红陈爱珺郭建强刘晓宇薄洪刘丽琦舒跃龙张智清
- 关键词：铜绿假单胞菌外毒素A免疫原性
